醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明模版

1、3參榆灌腸液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明3J名稱、漢語(yǔ)拼音，參榆灌腸液”名稱,是按中藥新藥的命名要求之本制劑名稱由處方中含有的飲片苦卷與地榆的簡(jiǎn)稱加劑型而來(lái),漢語(yǔ)拼音為“ShcnyuGuanchangye,3.2 處方處方為江蘇省主任醫(yī)部經(jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用多年療效顯著3.3 制法前述制法,為三批中試產(chǎn)品的制品工藝.3.4 性狀前述性狀，系根據(jù)在三批中試產(chǎn)品的性狀綜合描述而得“3.5 鑒別351黃柏供試品溶液的制備取本品10ml,加氫氧化鈉試泄調(diào)pH至11-13濾液用一氯甲烷提取2次，每次20ml，合并一氯甲烷提取液，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状肌慷芙?作為供試品溶液.同法制備陰性對(duì)照溶液，對(duì)照藥材溶液的制備取對(duì)照

2、藥材lg.加100ml水煎煮I小時(shí)，油液同法處理，作為對(duì)照藥材溶液.對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小鬼堿對(duì)照品，加甲辭制成每1ml含903咫的溶液，作為對(duì)照乩溶液.照薄層色譜法:附錄V1B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液畀91，分別點(diǎn)于同一酢膠G薄層板匕以一氯甲烷乙酸乙麗甲醉.水(15;40:22:10)10七以下放置的下乂溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi),取出，晾干，置紫外光燈(365mn)卜檢視口供試品色譜中,在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置匕顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性未見(jiàn)T擾。見(jiàn)圖1、2o斷液/層色調(diào)明1 m73 MHMVB* I 4 fflf!1 MMiini：2 MMinLi3 mLll.ZLS4 WttWfl

3、UW3 NJR+imMU191234圖I挈榆沛幀液黃柏油層鑒別圖(1)圖中i為制劑；(2)圖中2為對(duì)照我材：(3)國(guó)中3為對(duì)照品：4圖中4為陰性對(duì)照?qǐng)D2卷榆港崎液,用薄層鑒別圖(!)圖中I.2、a為不同批號(hào)鎏榆港靦液;圖中4為對(duì)照兩忖；(3)圖中5為對(duì)照陸3s2苦參供試品溶液的制備取本片50ml.如氨試液調(diào)pH至9-10,用裁甲烷振搖提取2次,俗次20mL合并二氯甲烷液，低溫蒸干，殘?jiān)右铱?ml使溶解.作為供試乩溶液“同法制備陰性供試品溶液。對(duì)照為材溶液的制備取苫繆對(duì)照弛材0%，加濃區(qū)試液02ml、一氯甲炕25ml，混勻,放置過(guò)夜，渡過(guò)，濾液播干,殘?jiān)右坏淄镼3n】l使溶解，作為對(duì)照藥材

4、溶液.照薄層色譜法(附錄V1B)試驗(yàn)，吸取k述一種溶液各加匕分別點(diǎn)于同一用2%裁就化船溶液制備的研膠G薄層板上，以二氮甲烷甲殍-濃也試液(5:060.3)IOC以下放置的F層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi)，取出，晾十,依次噴以碘化鋸用試液和亞硝酸鈉乙酥試液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材與譜相應(yīng)的位曾匕顯相同的橙色矗點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖3、4r.留a萼榆褥脫液苦多薄層就別圖口）圉中I為制劑*圖中2為對(duì)照弱材;<3）圖中3為陰愣對(duì)照：圖4若榆浦的液苫譽(yù)海星禁冽圖L1】圖中L 2, 3為不同批號(hào)2榆靠圜液;1”圖中4為對(duì)照的材；353三七供試M溶液的制備取木品40疝，用水飽和的正J醉溶液振搖提取3次,每次2

5、0ml,合并正丁靜液,用5%氨試液15ml洗瀟.分取正丁靜液，蒸T，線渣加甲醇2m【使溶解,作為供成品溶液,同法制備陰性供試茄溶液.對(duì)照為材溶液的制備取三七對(duì)照藥材1g,加水50ml,煎煮I小時(shí),濾過(guò),濾液用水飽和的正浙溶液振搖提取3次，加次20mL臺(tái)并正J制液,用5%氫成液15ml洗潺，分取正丁醇液,蒸|“殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為三七對(duì)服藥材溶液.照一層色譜法（附錄VIB）試驗(yàn),吸取上述三種溶液各lOph分別點(diǎn)于同一硅膠G板t.以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酥-水（15:40:22:10）10七以下放附的卜層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi)，取出，I麻干.殖以硫酸溶液（l-dOK1051c加熱至斑點(diǎn)顯色清晰

6、。供就品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無(wú)干擾,見(jiàn)圖5、6.圖£范睢淅屈液七即屈鑒別圖（I）圖中1為制劑；C）圈中N為對(duì)眼藥材;圖中3為陰性對(duì)照?qǐng)D6一椅潴/液療草前層鑒別圖口）圖中L 2, 3不同批號(hào)號(hào)榆游隨海:O圖中4為對(duì)源菊材以上二味飲的薄乂定性鑒別,經(jīng)歲批樣品試胎觀察，方法專屬.直觀，取現(xiàn)性明故列人質(zhì)吊機(jī)刈草.案3.6 檢查根據(jù)泄拗制中華人民共和國(guó)藥班1200年版二部附錄IS）通則期定及參榆油腸液的特點(diǎn)，分別對(duì)pH值、相對(duì)密僮,裝如及微生物限度等進(jìn)行了檢查.361pH值照中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄VIHpH值測(cè)定法,二批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)發(fā)L友

7、】pH值測(cè)定結(jié)果批號(hào)III2I21112141H215pH值3.693.653.67根據(jù)三批樣品pH值測(cè)定的結(jié)果，裨定樣品的pH值為3.0-5。3.62相對(duì)密度解中華人民共展國(guó)藥典2010年版二部附錄VIA相對(duì)密，度測(cè)定法，三批櫛品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2.及2相對(duì)密度測(cè)定結(jié)果批號(hào)H12I21112141H215相對(duì)密度L051.051.05根據(jù)三批樣品相對(duì)密度測(cè)定的結(jié)果，暫定樣品的相對(duì)密度為不低于L02363裝量差異照中華人民共和國(guó)蜀典下版二部附錄XF【最低裝量檢疊法】檢配結(jié)果見(jiàn)表表3裝用差異檢查結(jié)果批號(hào)隨機(jī)抽取3瓶(ml)平均裝量(ml)裝量限度g】)111212154152153153】112】4

8、)53153154153符合111215153152152152按裝量150ml規(guī)定.三批樣品梅查結(jié)果均符合規(guī)定.3.6.4微生物限度3.6.4.1 方法驗(yàn)證材料與依據(jù)3.6.4.2 1供試品：參榆灌腸液規(guī)格：XXX生產(chǎn)企業(yè)：江蘇省XXX醫(yī)院批號(hào)：1112121112141112153.6.4.1.2 培養(yǎng)基：批號(hào)：110512廠家：XXX1 .營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2 .玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：1105172廠家：XXX3 .營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基批號(hào)：110126廠家：XXX4 .膽鹽乳糖培養(yǎng)基批號(hào)：110408廠家：XXX5 .MUG培養(yǎng)基批號(hào)：110203廠家：XXX3.6.4.1.3 稀釋劑：pH7

9、.0無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液500ml/瓶，批號(hào)：2011032801（如緩沖液為市場(chǎng)購(gòu)買，需寫(xiě)明生產(chǎn)企業(yè)）3.6.4.1.4 菌種：菌種名稱編號(hào)來(lái)源傳代次數(shù)大腸埃希菌(Escherichiacoli)CMCC(B)44102南京巾藥檢所第3代金黃色葡穩(wěn)球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003南京巾藥檢所第3代銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC(B)10104南京巾藥檢所第3代枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)CMCC(B)63501南京巾藥檢所第3代白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001

10、南京巾藥檢所第3代黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC(F)98003南京巾藥檢所第3代3.6.4.1.5 驗(yàn)證依據(jù)：中國(guó)藥典2010年版二部附錄XIJ微生物限度檢查法方法驗(yàn)證。3.6.4.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)操作根據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄微生物限度檢查法方法，采用常規(guī)法（如常規(guī)法回收率未達(dá)70%,需采用培養(yǎng)基稀釋法重新進(jìn)行驗(yàn)證；如培養(yǎng)基稀釋法回收率仍未達(dá)70%,可采用薄膜過(guò)濾法再次進(jìn)行驗(yàn)證）對(duì)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證?？刂凭鷻z查方法采用常規(guī)法（若陽(yáng)性未生長(zhǎng)采用培養(yǎng)基稀釋法或薄膜過(guò)濾法），從而建立該樣品的微生物限度檢查方法。3.6.4.2.1 菌液制備方法：1 .接種大腸埃希

11、菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置350C培養(yǎng)24小時(shí)，分別取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液，10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)為50100cfu的菌懸液。2 .接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，置250C培養(yǎng)48小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液，10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)為50100cfu的菌懸液。3 .接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，置250C培養(yǎng)7天，加入5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫，并吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用

12、含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的無(wú)菌氯化鈉制成每1ml含抱子數(shù)為50100cfu的抱子懸液。3.6.4.2.2供試液制備：取供13c品10ml,加pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液至100ml,混均，作為1:10供試液。3.6.4.3 菌落計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證3.6.4.3.1 平皿法：(常規(guī)法)試驗(yàn)組：取1:10供試液1ml,分別加入10個(gè)平皿中，再依次加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種菌的菌懸液1ml(含50100cfu),每株菌平行制備2個(gè)平皿，立刻傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。菌液組

13、：分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內(nèi)，每個(gè)菌平行制備2個(gè)平皿，測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。供試品對(duì)照組：取1:10供試液1ml分別注入4個(gè)平皿中，立刻注入營(yíng)養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。以測(cè)定供試品的本底菌數(shù)。上述方法平行實(shí)驗(yàn)3次結(jié)果見(jiàn)表1表1.參榆灌腸液細(xì)菌.霉菌和酵母菌回收率的測(cè)定(平皿法)菌種類型試驗(yàn)試驗(yàn)組菌液組供試品回收率()次數(shù)對(duì)照組試驗(yàn)組大腸埃布國(guó)14749095.9265620100361560100金黃色葡錮球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱桿菌13842090.52475009

14、4.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6試驗(yàn)組菌回收率(%)=試驗(yàn)組平均菌落數(shù)供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)M1000/菌液組的平均菌落數(shù)由表1可見(jiàn)參榆灌腸液用平皿菌落計(jì)數(shù)法，三次平行試驗(yàn)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都達(dá)到了70%,說(shuō)明常規(guī)平皿法用于參榆灌腸液計(jì)數(shù)結(jié)果是準(zhǔn)確的。備注：如采用常規(guī)平皿法菌落回收率都達(dá)到70%,則細(xì)菌、霉菌和酯母菌的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證即可完成，但如常規(guī)法一種或幾種菌回收率三次均低于70%,需采用培養(yǎng)基稀釋法重新進(jìn)行試

15、驗(yàn)，具體操作如下：若細(xì)菌回收率低于70%則細(xì)菌數(shù)計(jì)數(shù)采用培養(yǎng)基稀釋法，霉菌回收率低于70%則霉菌酯母菌計(jì)數(shù)采用培養(yǎng)基稀釋法，二者均低于70%則同時(shí)采用培養(yǎng)基稀釋法。驗(yàn)證資料中需體現(xiàn)常規(guī)法及培養(yǎng)基稀釋法兩種驗(yàn)證方法及結(jié)果。3.6.4.3.2 平皿法：（培養(yǎng)基稀釋法）試驗(yàn)組：取1:10供試液0.2ml及各試驗(yàn)用菌液1ml分別注入平皿中，每種試驗(yàn)菌平行制備10個(gè)平皿，立刻傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，細(xì)菌350C培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌及酵母菌250C培養(yǎng)72小時(shí)。菌液組：分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內(nèi)，每個(gè)菌平行制備2個(gè)平皿，測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。供試品對(duì)照組：取1:10供試液0.2ml分

16、別注入20個(gè)平皿中，立刻傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基制備10個(gè)平皿，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。以測(cè)定供試品的本底菌數(shù)。上述方法平行實(shí)驗(yàn)3次結(jié)果見(jiàn)表2表2.參榆灌腸液細(xì)菌.霉菌和酵母菌回收率的測(cè)定（培養(yǎng)基稀釋法）菌種類型試驗(yàn)次數(shù)試驗(yàn)組菌液組供試品對(duì)照組回收率（）試驗(yàn)組大腸埃布國(guó)14749095.9265620100361560100金黃色葡錮球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱桿菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠困14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438

17、089.522731087.132829096.6試驗(yàn)組菌回收率（）=試驗(yàn)組平均菌落數(shù)一供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)乂1000y菌液組的平均菌落數(shù)由表2可見(jiàn)參榆灌腸液用培養(yǎng)基稀釋法，三次平行試驗(yàn)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都達(dá)到了70%,說(shuō)明培養(yǎng)基稀釋法用于參榆灌腸液計(jì)數(shù)結(jié)果是準(zhǔn)確的。備注：如培養(yǎng)基稀釋法回收率仍低于70%,采用薄膜過(guò)濾法再次進(jìn)行試驗(yàn)。驗(yàn)證資料中需體現(xiàn)常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法及薄膜過(guò)濾法三種驗(yàn)證方法及結(jié)果。具體操作如下：3.6.4.3.3 薄膜過(guò)濾法：供試液制備：取1:10供試液10ml放入離心管中，將離心管放入離心機(jī)，500轉(zhuǎn)/min離心3分

18、鐘，取上清液。（注：僅細(xì)菌計(jì)數(shù)可用低速離心，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)不可采用。）試驗(yàn)組：取1:10上述供試液1ml加pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液100ml稀釋過(guò)濾，用400ml（備注：具體用量依樣品抑菌作用強(qiáng)弱而定，在試驗(yàn)中需設(shè)計(jì)不同的沖洗量進(jìn)行沖洗，根據(jù)回收率的情況選擇不同的沖洗量）pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液沖洗濾膜，每次100ml,在最后一次沖洗液中分別加入試驗(yàn)用菌液1ml,過(guò)濾后無(wú)菌方法取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂或玫瑰紅鈉瓊脂平板上，細(xì)菌350C培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌及酵母菌250C培養(yǎng)72小時(shí)。菌液組：分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內(nèi)，每個(gè)菌平行制備2個(gè)平皿，測(cè)定所加的試驗(yàn)菌

19、數(shù)。供試品對(duì)照組：取1:10供試液1ml采用上述薄膜過(guò)濾法沖洗過(guò)濾，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。以測(cè)定供試品的本底菌數(shù)。上述方法平行實(shí)驗(yàn)3次結(jié)果見(jiàn)表3表3.參榆灌腸液細(xì)菌.霉菌和酵母菌回收率的測(cè)定（薄膜過(guò)濾法）菌種類型試驗(yàn)試驗(yàn)組菌液組供試品回收率次數(shù)對(duì)照組試驗(yàn)組大腸埃布國(guó)14749095.9265620100361560100金黃色葡錮球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱桿菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.5227310

20、87.132829096.6(%)=試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)菌液組的平均菌落數(shù)10%試驗(yàn)組菌回收率由表3可見(jiàn)參榆灌腸液用薄膜過(guò)濾法，三次平行試驗(yàn)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都達(dá)到了70%,說(shuō)明薄膜過(guò)濾法用于參榆灌腸液計(jì)數(shù)結(jié)果是準(zhǔn)確的。3.6.4.4 控制菌(大腸埃希菌)檢查方法的驗(yàn)證3.6.4.4.1 直接接種法(1)試驗(yàn)組：取1:10的供試液10ml,接種至100ml的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基內(nèi)，加入49cfu大腸埃希菌，350C培養(yǎng)24小時(shí)，可見(jiàn)培養(yǎng)基混濁，有氣體產(chǎn)生。取上述培養(yǎng)物0.2ml接種至5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)5小時(shí)、

21、24小時(shí)，在366nm紫外線下觀察，可見(jiàn)熒光反應(yīng)，滴加靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色.(2)陰性菌對(duì)照組：取1:10的供試液10ml,接種至100ml的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基內(nèi)，加入33cfu金黃色葡萄球菌,350C培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)基無(wú)混濁與氣體產(chǎn)生。取上述培養(yǎng)液0.2ml接種至5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)5小時(shí)、24小時(shí)，在366nm紫外線下觀察，無(wú)熒光反應(yīng)，滴加靛基質(zhì)試液，液面均呈試劑本色。上述方法試驗(yàn)組檢出了大腸埃希菌，陰性菌對(duì)照組未檢出金黃色葡萄球菌。說(shuō)明用100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基可以進(jìn)行參榆灌腸液大腸埃希菌檢查。備注：試驗(yàn)中若100ml陽(yáng)性對(duì)照未生長(zhǎng)，則加大膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基用量，

22、分別作200ml、300ml,方法同以上方法。3.6.4.4.2 薄膜過(guò)濾法若直接接種法加大培養(yǎng)基用量陽(yáng)性對(duì)照仍無(wú)法檢出，則采用薄膜過(guò)濾法：(1)試驗(yàn)組：取1:10的供試液10ml,用離心機(jī)低速離心500r/min離心3分鐘，取上清液定容至10ml,加入pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液稀釋至100ml薄膜過(guò)濾，用400ml(備注：具體用量依樣品抑菌作用強(qiáng)弱而定，在試驗(yàn)中需設(shè)計(jì)不同的沖洗量進(jìn)行沖洗，根據(jù)回收率的情況選擇不同的沖洗量)pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液沖洗濾膜，每次100ml,過(guò)濾后無(wú)菌方法取出濾膜，接種至100ml的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基內(nèi)，加入49cfu大腸埃希菌，350C培養(yǎng)2

23、4小時(shí)，可見(jiàn)培養(yǎng)基混濁，有氣體產(chǎn)生。取上述培養(yǎng)物0.2ml接種至5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)5小時(shí)、24小時(shí)，在366nm紫外線下觀察，可見(jiàn)熒光反應(yīng)，滴加靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色.(2)陰性菌對(duì)照組：取1:10的供試液10ml,用離心機(jī)低速離心500r/min離心3分鐘，取上清液定容至10ml,加入pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液稀釋至100ml薄膜過(guò)濾，用400ml(注：具體用量依樣品抑菌作用強(qiáng)弱而定)pH7.0的無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液沖洗濾膜，每次100ml,過(guò)濾后無(wú)菌方法取出濾膜，接種至100ml的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基內(nèi)，加入33cfu金黃色葡萄球菌,350C培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)基無(wú)

24、混濁與氣體產(chǎn)生。取上述培養(yǎng)液0.2ml接種至5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)5小時(shí)、24小時(shí)，在366nm紫外線下觀察，無(wú)熒光反應(yīng)，滴加靛基質(zhì)試液，液面均呈試劑本色。上述方法試驗(yàn)組檢出了大腸埃希菌，陰性菌對(duì)照組未檢出金黃色葡萄球菌，說(shuō)明用100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基可以進(jìn)行參榆灌腸液大腸埃希菌檢查。備注：如制劑中含生藥，需增加大腸菌群檢查驗(yàn)證試驗(yàn)；如制劑中含動(dòng)物藥，需增加沙門(mén)菌檢查驗(yàn)證方法；如制劑為外用藥，需增加金黃色葡萄球菌、銅綠桿菌檢查驗(yàn)證方法，每個(gè)品種具體要求見(jiàn)中國(guó)藥典2010年版附錄。其他控制菌檢查常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過(guò)濾法方法同上述大腸埃希菌檢查方法，需使用相應(yīng)增菌及分離培養(yǎng)基

25、o如金黃色葡萄球菌使用營(yíng)養(yǎng)肉湯增菌，甘露醇氯化鈉瓊脂分離等。結(jié)論：參榆灌腸液按中國(guó)藥典2010年版二部附錄微生物限度檢查法方法驗(yàn)證試驗(yàn)：取供試品10g,加pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白凍緩沖液至100ml，混勻,作為1:10供試液。細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測(cè)定：可用常規(guī)平皿法（或培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過(guò)濾法）；大腸埃希菌檢查可用100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基進(jìn)行增菌培養(yǎng)（或其他量的培養(yǎng)基、薄膜過(guò)濾法），依法檢查。金黃色葡萄球菌采用。依法檢查，銅綠假單胞菌采用。00000000依法檢查。（備注：上文中黑體斜體部分文字僅為驗(yàn)證過(guò)程中指導(dǎo)之用）3.64.5參檎灌腸液的微生物限度檢查方法供試液的制備：吸取供試乩10m

26、L加pH7.0無(wú)菌氯化鈉.蛋臼陳緩沖液至tOOmL振福均勻，作為】:10供試液取上述供試液】ml,加入pH70無(wú)菌氯化鈉.蛋自豚級(jí)沖液如制得1：1爐供試液，備用,3,6A5J細(xì)菌，鷲菌及醉母菌計(jì)數(shù)（I）細(xì)菌數(shù)計(jì)數(shù)樣品細(xì)菌數(shù)測(cè)定：分別吸取樣陸I：10的供試液1E1,分別10個(gè)無(wú)菌平皿中.每每個(gè)平肥0川，平行試驗(yàn)二份，立即幀注1V20川溫度不超過(guò)45t營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基.混勻，凝固,3075七倒置培養(yǎng)4&小時(shí).計(jì)放，】0個(gè)平皿中的細(xì)菌數(shù)之和即為每ml供試液中細(xì)數(shù)，陰性對(duì)照t取pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋門(mén)膿緩沖液】ml無(wú)篇手皿中，平行制備2個(gè)平板,立即傾注l5-20ml溫度不超過(guò)45T營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)

27、基，混勻.梃固,3075七倒四培養(yǎng)48小時(shí)，不得有菌生長(zhǎng)，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù):樣品福菊及菊母菌計(jì)數(shù)測(cè)定：分別吸取樣品h】0的供試液】mi,分別10個(gè)無(wú)菌平HIL中，呼個(gè)平皿Qml，平行試驗(yàn)一份，立即傾注15-20而溫度不超過(guò)45匕攻魂紅納瓊脂培養(yǎng)基，混勻,凝固，25-28C倒置培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)，10個(gè)平叭中的細(xì)菌數(shù)之和即為將ml供試液中霉菌數(shù).陰性對(duì)照，取pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白天點(diǎn)沖液1mL置無(wú)的平皿中,平行制備2個(gè)平板,立即傾注154Oml溫度不超過(guò)45匕玫瑰紅的瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固.2328匕倒置培養(yǎng)72小時(shí)，不得有的生長(zhǎng).3瓜452控制菌檢查（I）樣品大腸埃希菌檢充取h10供試液】0

28、mL加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基3經(jīng)35、37培養(yǎng)24小時(shí)后,若有菌生長(zhǎng)，再進(jìn)行MUG和標(biāo)基質(zhì)試臉，以確定是否染菌.陰性對(duì)照I取pH70無(wú)菌氯化鈉.蛋白臍緩沖液10mL加入I00H膽鹽乳精培養(yǎng)基中，經(jīng)35-37C培養(yǎng)24小時(shí),不得有菌生長(zhǎng)、（2）樣品金黃色葡僦球前檢查取1:10供試液】Qmh加入IQQml營(yíng)養(yǎng)肉渴培養(yǎng)基中,經(jīng)35-37C培養(yǎng)24小時(shí)后，若有菌生長(zhǎng)，再進(jìn)行分離培養(yǎng)和甘露醇商蒜試驗(yàn)，以確定是否染菌.陰性時(shí)照；取pH7.0無(wú)菌氯化鈉洸白腺緩沖液10mL加入100ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)3537c培養(yǎng)24小時(shí).不得有菌生長(zhǎng)0（3）樣品銅綠假單胞菌檢查取1:10供試液iOml,加入100

29、ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，經(jīng)3577匕培養(yǎng)24小時(shí)后,若有菌生長(zhǎng)，再進(jìn)行分離培養(yǎng)和42*C生長(zhǎng)試驗(yàn),以確定是否染菌.陰性對(duì)照：取pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白豚緩沖液10mL加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,經(jīng)35-37P培養(yǎng)24小時(shí).不得有常生長(zhǎng).按照中國(guó)藥典2010年版一部附錄XIIIC微小物限度檢杳法檢音，將ml藥物中細(xì)菌數(shù)應(yīng)300個(gè)信，寄菌、酵母菌數(shù)應(yīng)Wiw/g,不得檢出大腸埃肅菌金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌,365三批中試產(chǎn)品微生物限度檢查結(jié)果按中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部附錄XIIIC微生物限度檢杳法要求，結(jié)合驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)論，依法時(shí)參揄灌腸液進(jìn)行微生物限度檢行，結(jié)果見(jiàn)表】，表15參榆灌腸液

30、微生物限度檢在結(jié)果表檢查菌批號(hào)111212IH214H12I5細(xì)菌總數(shù)<10<10<J0醉母的.<10<10<10盅菌總數(shù)金黃色葡萄球篷未檢出未檢出未檢出大腸埃希菌未檢出未檢出未檢出銅綠假單胞菌未檢出未檢出未檢出活蜻未檢出未檢出未檢出檢查結(jié)果表明，三批樣品微生物限度均符合規(guī)定.3.7含量測(cè)定37】測(cè)定對(duì)象及成分的選擇參榆灌腸液由黃柏、石百浦，普參、地榆等七味中藥組成，具有祛溫得火，止血生肌.斂瘡愈痛之功效,用干久痢，腹痛,腹瀉,粘液膿血使,里急后重-方中黃柏是君藥。黃柏中的生物堿類成分具有廣泛的藥理作用，包括抗菌、抗真菌，鎮(zhèn)咳、降壓、抗滴蟲(chóng)、抗肝炎、增強(qiáng)免疫

31、功能、抗?jié)冏饔玫龋嵝【蹓A又是其主要成分,因此，本試騎選擇鹽酸小窠堿作為指標(biāo)性成分，用高效液相色譜法測(cè)定其含輔，以控制制劑腦M，保證臨床療效。試驍結(jié)果表明，HPLC靈敏度高，重復(fù)性好,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確.可用于參榆海慚液中鹽酸小聚彼的含量測(cè)定。3.7.2含量測(cè)定37.2.1儀器與試藥AgilemllOO高效液相色潸儀,西元集（G13I1A）.柱溫箱（GI316ALVWD檢測(cè)器（G1314A）P匚作站<Chemstation）»鹽酸小舞堿對(duì)照品（批號(hào)II07I3T002%含后測(cè)定用*購(gòu)自中國(guó)藥品生物制乩檢定所）:MQ萬(wàn)電子分析天平（BPQ11D型.德國(guó)SM萬(wàn)us）1ASB2200

32、型超用波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器公司卜參榆灌腸液（批號(hào)111212,114，1112151;水為超純水,乙脂，甲醉為色譜姓，H余化學(xué)試劑為分析純，3.72.2方法與結(jié)果照中華人民共和國(guó)藥典2010隼版二部高效液相測(cè)定法（附錄VD）測(cè)定.3.7221對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小嘿堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醛溶解制成每1ml含244圈的溶液。3.722.2供試品溶液的制備精密吸取本品2ml,置50ml量瓶中,加流動(dòng)相超聲處理功率250W,頻率MkH"20分鐘,放冷.用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液*同法制備陰性供試品溶液.*7.223色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試臉色譜柱：

33、HederaODS-2Cistl（25046mm,5pm）t以乙胞*0.1%磷酸溶液50:50）（每100ml加十一烷基磺酸仍01g）為海動(dòng)相:檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；柱溫：30。；流速；LOmlmin分別精密吸取鹽酸小菜堿對(duì)照品溶液，供試品溶液及陰件供試品溶液各1口心.注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，供試品與對(duì)照品在相同的位置有較大吸收.陰性對(duì)照無(wú)干擾色譜樣的理論板數(shù)按鹽酸小聚堿峰計(jì)算不低于4000,分離度大于L5.37224線性關(guān)系考察取上述對(duì)照品溶液，用甲醇分別稀釋至122.0、6L0、30$15.25、7625、3,8125脂司1分別精密吸取各不同濃度的對(duì)照品溶液103.注入寤效液相色譜儀中

34、測(cè)定。經(jīng)線性網(wǎng)歸.窗起檄小樊堿回歸方程y=4±85x+4,4244,尸0399%鹽酸小聚減在工X125-12工0地E范雨內(nèi)，馬峰面積的積分值呈良好的線性關(guān)系.結(jié)果如圖一圖7鹽酸小蟾堿標(biāo)準(zhǔn)曲線37225精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液】0山.注入病效液相色譜儀，重更進(jìn)樣6次，測(cè)定，以峰面一根枳分值計(jì)算，RSD為。.15%,結(jié)果見(jiàn)表16口表】6精懵度試驗(yàn)結(jié)果表Nd123456A1110.11106.71110.71108211065H07.4RSD(%)0.153,72.2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取同一批號(hào)(111214)的本品2ml,共6份，按“3.7222.項(xiàng)下處理方法制備供試晶溶液。分別精密吸收供試晶溶液10用，注入高效液相色惜儀中,測(cè)定，以鹽酸小聚堿含鼠計(jì)算,RSD為L(zhǎng)61%,結(jié)果見(jiàn)表17。表17爪更件試驗(yàn)結(jié)果表No一123456含她mg1ml)1.004L0261,054L008L0I71.017RSD(%)1.6137227穩(wěn)定性試胎取同一供試品溶液，按上述色譜條件，TO.2.*6、8、12h分別進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰而積，R$D為0,0'說(shuō)明本品在12b內(nèi)檢定，結(jié)果見(jiàn)表表18穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表時(shí)間Ch)0246812A1811.61807,6181).8I81Z7181