凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程

1、凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程(SOP文件)1目的作為介質(zhì)輔助用于完全抗體及不完全抗體的臨床篩選檢測及輔助用于臨床交叉配血實驗。2檢驗原理紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，當紅細胞懸浮在電解質(zhì)時， 陽離子會被紅細胞的負電荷所吸引， 此時紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，而形成Zeta電位，Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。凝聚胺技術首先利用低離子溶液(LIM),降低介質(zhì)的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞和血清(血漿)中的抗體結合。其后， 加入凝聚胺(Polybrene)溶液， 它是一種高價陽離子多聚物、 肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細胞表

2、面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta電位降低，縮短紅細胞之間的距離，使紅細胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。最后，加入懸浮液(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)陽離子的作用， 使正常的紅細胞非特異性凝聚散開， 試驗結果為陰性； 但如果紅細胞被相應的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。3儲存條件及有效期未開封試劑應貯存于2c25C、相對濕度不大于80%無腐蝕性氣體的室內(nèi)；已開封試劑應貯存于相對濕度不大于80%,無腐蝕性氣體和通風良好的室溫環(huán)境，試劑用后應及時擰緊瓶蓋保存；未開封試劑的有效期為二年，在有效期內(nèi)的已開封試劑應在開封后的6個

3、月內(nèi)使用完。04樣本要求4.1新鮮血清，含EDTAt凝血漿、3%5%勺紅細胞懸液。4.2不能使用溶血標本及含枸檬酸鈉、肝素抗凝血漿標本。5檢驗方法輔助交叉配血試驗1取試管二支，標主次側，主側管加病人血清（血漿）2滴，加供血者3%5%：細胞懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴，次側管反之。1各加LIM0.65ml,混合均勻后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均勻。1用離心機3400轉/min（相當于1000g離心力）離心10秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。1輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，則必須要重做。1最后加入Resuspending2滴， 輕輕搖動試管

4、混合并同時觀察結果。 如果在60秒內(nèi)凝集散開，代表是由Polybrene引起的非特異性聚集，配血結果相合；如凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結合的特異性反應，配血結果不相合。如反應可疑，可進一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。6注意事項1.1可以用含EDTAi血漿代替血清使用。1.2若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加46滴Polybrene溶液以中和肝素。1.3本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定。1.4若試劑使用前為低溫貯存，請回復室溫再行操作。1.5加做輔助性抗人球蛋白試驗，目的是增加檢測抗-K的敏感性。寧城縣蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院輸血科NCXMYZYYYSXK1.6在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配

5、血試驗，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而導致假陽性的結果由現(xiàn)。若有此懷疑，建議在最后滴入Resuspending時，將試管立即置入37c水浴中，輕輕搖動試管混合，并在60秒內(nèi)觀察結果。1.7紅細胞抗原檢測步驟同抗體篩檢試驗，具檢測標準血清用已知標準血清。1.8用戶可使用IgG抗D抗體 （效價64）與RhD陽性紅細胞反應做陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。ABO血型定型操作規(guī)程（SOPt件）1目的用于鑒定人ABC血型2檢驗原理本品系用產(chǎn)生抗A或抗B血型抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)上清液（或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集試驗原理，專供鑒定人ABO血型用。3樣本要求本試劑適用于全血或

6、10%、5%紅細胞懸液。4檢驗方法平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或10%紅細胞生理氯化鈉懸液按1:1攪勻，不必再稀釋，按照有無凝集判定結果5結果判斷血型抗A試劑抗B試劑A+B-+O-AB+注：“+”有凝集反應，“-”無凝集反應6檢驗結果的解釋將已知的抗A、抗B血型定型試劑與受檢者的紅細胞混合時，與抗A血型定型試劑發(fā)生凝集者即為A型血型， 與抗B血型定型試劑發(fā)生凝集者即為B型血型，與抗A、抗B血型定型試劑均發(fā)生凝集者即為AB型血型，與抗A、抗B血型定型試劑均不發(fā)生凝集者即為O型血型。7注意事項9.1對含有較多自身冷凝集的受檢者，在鑒定血型時往往被誤認為AB血型，遇到此種情況，需用37生理氯化

7、鈉溶液洗滌受檢者細胞2-3次，以去除吸附在紅細胞上的凝集素，然后再鑒定血型。9.2在做配型試驗時，如發(fā)現(xiàn)有不配合現(xiàn)象，則取受檢者血清，用已知A血型或B血型細胞進行反定型試驗，以核實原鑒定的血型是否正確。9.3用立即試管法不能測由亞型（如Ax）,需延長作用時間。9.4本品如由現(xiàn)渾濁或變色則不能使用， 若開瓶使用時間較長后， 最好用已知ABO血型紅細胞檢查結果是否與已知血型相符，以防制品污染，變質(zhì)失效，而造成鑒定錯誤。9.5在有效期內(nèi)使用。ABO血型反定型操作規(guī)程（SOP文件）1目的用于ABO血型的反定型檢測，該產(chǎn)品不用于血源篩查。寧城縣蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院輸血科NCXMYZYYYSXK2檢驗原理本品系采

8、用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人紅細胞經(jīng)洗滌后懸浮于紅細胞保存液中配制而成。采用凝集試驗原理，用已知的A1,B,O型紅細胞測定被檢者血清/血漿中有無相應的抗A或抗B抗體（反定型試驗），結合正定型結果判定ABOM型。3檢驗方法試管法取被檢者血清/血漿各50ul分別加入3支標記好的試管中；分別各加50ulA1、B、O試劑紅細胞；搖動試管，混勻。于900g離心15s,或室溫靜止1h;首先檢查是否溶血，（溶血可能是陽性結果，或是細菌污染。）輕輕搖動懸浮紅細胞。觀察凝集情況，并立即記錄結果。必要時可借助顯微鏡觀測。4檢驗結果的解釋ABO血型正反定型反應格局表正定型反定型血型抗A試劑抗B試劑A1

9、細胞B細胞O細胞+-+-A-+-B-+-O+-AB注：“+”有凝集反應，“-”無凝集反應5注意事項如果在反定型試驗中，受檢者的血清/血漿與O血型紅細胞試劑產(chǎn)生陽性反應，則需要添加自身對照試驗。如果自身對照為陽性，表明是冷凝集素導致。如果自身對照為陰性，則表明被檢者血清或血漿中可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他血型系統(tǒng)的抗體干擾定型。請按照相關的試驗方法解決上述定型問題。本品如由現(xiàn)紅細胞顏色變成暗紫色或紅細胞自發(fā)凝集，由現(xiàn)菌落或溶血，則不能使用。若開瓶使用時間較長后，最好用注冊上市的抗A、抗B血型定型試劑檢查結果是否與已知血型相符，以防制品污染、變質(zhì)失效、而造成檢定錯誤。為了便于鑒別，A1血型紅細胞試

10、劑標簽為藍色，B血型紅細胞試劑標簽為黃色，O血型紅細胞試劑標簽為紅色。乙型肝炎病毒表面抗原操作規(guī)程（SO發(fā)件）.目的用于血液的篩查和臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。.檢驗原理本品系用乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）包被的微孔板和酶標記抗-HBs及其他試劑制成，應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理檢測人血清和血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）.適用儀器微量移液器；37c恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶；計時器；酶標儀，檢測波長450nmn,參考波長630nmi.樣本要求樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術收集血液，全血樣本寧城縣蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院輸血科NCXMYZYYYSXK最好先放置37c處理2

11、小時，再將血樣本充分離心，3000轉/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應將血樣本充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結果。新鮮的樣本在28c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期貯存在-20C或以下，避免反復凍融。.檢驗方法實驗準備：從冷藏環(huán)境中取由試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行1:40倍稀釋。設陽性對照2孔，陰性對照3孔，空白對照1孔。加樣：在陽性對照、陰性對照孔內(nèi)分別加入陽性對照、陰性對照50ul,其余每孔加待測血清或血漿50

12、ulo蓋上封孔膠片，置37c水浴孵育60分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加酶結合物：空白孔除外，每孔各加酶結合物50ul。蓋上封孔膠片，置37c水浴孵育30分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加底物液： 每孔先加底物液A50ul,再加底物液B50ul,混勻， 蓋上封孔膠片， 置37c條件下避光顯色30分鐘后，加終止液50ul,混勻，終止反應。.參考值（參考范圍）終止后盡快測定，波長450nni先用空白孔校零，測OD值。如果選用雙波長測定，不必設置空白對照空。按下列公式計算：COV=陰性對照平均OD值X2.1倍陰性對照平

13、均OD直低于或等于0.05,按0.05計算；高于0.05時,按照實際OD直計算。.檢驗結果的解釋樣品OD直S/COV1時，待測樣本HBsAg為陽性；樣品OD直S/COV1時為陽性樣品OD值S/COV1時，待測樣本為陽性；樣品OD值S/COV1時，待測樣本為陰性。.注意事項本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢測結果作為診斷指標之一。使用時，從冷藏環(huán)境取由試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。結果判定需在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。封孔膠片不得重復使用。在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗結果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。

14、確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導致錯誤的試驗結果。使用微量移液器加樣時，每次應更換吸頭吸取樣本。8.9在操作過程中應盡量避免反應微孔中產(chǎn)生氣泡。準確控制反應溫度和反應時間。洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應注意控制，既避免洗液過量而溢生，又能充滿反應微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。本試劑盒及臨床樣本均應視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。.參考文獻中國藥典2010年版三部體外診斷試劑說明書編寫指導原則（國食藥監(jiān)械【20071240號）HIV抗體初篩實驗室操作

15、規(guī)程（SOPC件）.檢驗目的檢驗人體血清中是否感染HIV病毒.檢驗原理本產(chǎn)品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和“2（HIV-1和HIV-2）抗原包被的微孔板和酶聯(lián)記的HIV-1和HIV-2抗原及其它試劑組成試劑盒，應用雙原夾心法原理檢測人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒抗體，用于獻血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒的篩查。.檢驗條件操作人員對本實驗應心中有數(shù)，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程。洗板機，酶標儀，加樣器必須定期校正。試劑按規(guī)定保存。.標本采集門診病人由檢驗科人員無菌抽取靜脈血2ml分離血清備用。住院病人由護士采血送檢驗科。要避免溶血。.設備和試劑設備全自動ZDM;酶標洗板機，MR-96A酶標儀

16、。試劑珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的抗HIV診斷試劑盒。.操作方法實驗準備從冷環(huán)境中取由試劑盒，室溫平衡半小時，同時將濃縮洗液用蒸儲水作1:20稀釋備用。編號每板應設空白對照1孔，陽性對照2孔，陰性對照2孔，質(zhì)控1孔。加樣每孔加入50ul樣品稀釋液，并分別在相應孔中加入待測樣品或陰、陽對照、質(zhì)控品50ulo空白孔內(nèi)只加稀釋液。溫育用封板膜封板后置37c溫育60分鐘。加酶除空白對照孔外，每孔加50ul酶標記物，輕輕震動混勻，用封板膜將板孔封好，置37c溫育30分鐘。洗板小心將封板膜揭掉，選擇6次的程序洗板，最后排干。顯色每孔先加顯色劑A再加顯色劑B各50ul,輕輕混勻后置37C避光顯色30分鐘。

17、測定每孔加終止液50ul,輕輕混勻，用酶標儀波長450nm及620nm測定各孔OD值。.參考值試劑空白標準：試劑空白A值應 V0.08（空白校零前）陰性對照標準：陰性對照A值應 W0.12陽性對照標準：抗-HIV-1陽性對照A值應 A0.8抗-HIV-2陽性對照A值應 A0.8臨界值（C.O.）計算：寧城縣蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院輸血科NCXMYZYYYSXK臨界值（C.O.）=陰性對照平均A值+0.15備注：陰性對照平均A值小于0.08按0.08計算，大于0.08按試劑值計算.檢驗結果的解釋樣品A值 A 臨界值（C.O.）為HIV抗體陽性樣品A值臨界值（C.O.）為HIV抗體陰性備注：初次檢驗陽性者應重

18、新取樣進行雙孔復試，如果復試中任何一孔為陽性則樣品視為HIV抗體陽性，對復試結果為陽性的樣品請按全國艾滋病檢測技術規(guī)范處理?？赡軐z驗結果產(chǎn)生影響的因素：.不充分的洗滌，如侵泡時間不夠或洗液量不足。.洗板機針孔堵塞或位置調(diào)節(jié)不當，孔底洗液殘留量過多。.加樣量不準。.在檢驗過程中應避免交叉污染及酶結合物和其他試劑的污染。.沒有使用正確的波長讀數(shù)。.測試過程中應避免反應孔的干燥。.血清或血漿樣品如有溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況，可能會對檢驗產(chǎn)生影響。.質(zhì)量控制每次做室內(nèi)質(zhì)控，同標本一起做，發(fā)現(xiàn)問題及時處理。每年兩次參加省臨床檢驗中心免疫質(zhì)評，以保證檢驗質(zhì)量.注意事項本試劑的使用單位必須是經(jīng)當?shù)匦l(wèi)生行政部門批準的寧城縣蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院輸血科NCXMYZYYYSXKHIV初篩實驗室。檢測必須符合HIV試驗室管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定，嚴格防止交叉污染。操作時必須戴