化學藥品滅菌無菌工藝驗證指導原則培訓(20150408)

1、 化學藥品滅菌無菌工藝驗證化學藥品滅菌無菌工藝驗證指導原則指導原則培訓人：何東征培訓人：何東征部部 門：岳陽門：岳陽研發(fā)研發(fā)工藝組工藝組2015.04.培訓培訓內容內容Click to add Title1概述概述1Click to add Title2制劑濕熱滅菌工藝制劑濕熱滅菌工藝2Click to add Title1制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3原料藥無菌生產工藝的驗證原料藥無菌生產工藝的驗證2 4Click to add Title1小結小結5 1. 概述概述1.1.無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，一般包

2、括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。原料藥，一般包括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。1.2.“無菌無菌”：一批藥品的無菌特性只能通過該批藥品中活微生一批藥品的無菌特性只能通過該批藥品中活微生物存在的概率低至某個可接受的水平，即無菌保證水平（物存在的概率低至某個可接受的水平，即無菌保證水平（Sterility Assurance Level, SAL）來表征，而這種概率意義上）來表征，而這種概率意義上的無菌需通過合理且經過驗證的滅菌工藝過程、良好的無菌保的無菌需通過合理且經過驗證的滅菌工藝過程、良好的無菌保證體系以及在生產過程中執(zhí)行嚴格的生產質量管理規(guī)范（證體系以及在生產過程中執(zhí)行嚴格的生產質量管理規(guī)

3、范（GMP）予以保證。）予以保證。1.3.無菌藥品的滅菌方式通常可分為：無菌藥品的滅菌方式通?？煞譃椋?、濕熱滅菌濕熱滅菌(高壓飽和高壓飽和蒸汽蒸汽)；2、干熱滅菌干熱滅菌（干熱空氣）（干熱空氣）；3、輻射滅菌輻射滅菌（Y 射線）射線）；4、氣體滅菌氣體滅菌（H2O2）；5、除菌過濾除菌過濾（0.22m濾芯）濾芯）。 1. 概述概述1. 概述概述1.4.按工藝的不同分為終端滅菌工藝（按工藝的不同分為終端滅菌工藝（terminal sterilizing process）和）和無菌生產工藝（無菌生產工藝（aseptic processing）。）。1.4.1.終端滅菌工藝系指將完成最終密封的產品

4、進行適當滅菌的工藝。終端滅菌工藝系指將完成最終密封的產品進行適當滅菌的工藝。1.4.2.無菌生產工藝系指在無菌環(huán)境條件下，通過無菌操作來生產無菌藥無菌生產工藝系指在無菌環(huán)境條件下，通過無菌操作來生產無菌藥品的方法品的方法1.5.終端滅菌工藝和無菌生產工藝實現(xiàn)產品無菌的方法有本質上的差異，終端滅菌工藝和無菌生產工藝實現(xiàn)產品無菌的方法有本質上的差異，從而決定了由這兩類工藝生產的產品應該達到的最低無菌保證水平的巨大從而決定了由這兩類工藝生產的產品應該達到的最低無菌保證水平的巨大差異。最終滅菌產品的無菌保證水平為微生物污染概率不超過差異。最終滅菌產品的無菌保證水平為微生物污染概率不超過10-6，對于，

5、對于非終端滅菌無菌產品，應通過培養(yǎng)基模擬灌裝證明其在非終端滅菌無菌產品，應通過培養(yǎng)基模擬灌裝證明其在95%置信限下的無置信限下的無菌保證水平至少應小于菌保證水平至少應小于0.1%。由此可見，非終端滅菌無菌產品存在微生物。由此可見，非終端滅菌無菌產品存在微生物污染的概率遠遠高于最終滅菌無菌產品，并且，在生產中影響非終端滅菌污染的概率遠遠高于最終滅菌無菌產品，并且，在生產中影響非終端滅菌無菌產品的無菌保證水平的因素也相對較多，生產過程的控制難度較大，無菌產品的無菌保證水平的因素也相對較多，生產過程的控制難度較大，所以在選擇無菌產品的滅菌方式時，應優(yōu)選終端滅菌工藝。對于必須采用所以在選擇無菌產品的滅

6、菌方式時，應優(yōu)選終端滅菌工藝。對于必須采用非終端滅菌工藝的產品，為盡量減少產品污染微生物的風險，鼓勵企業(yè)在非終端滅菌工藝的產品，為盡量減少產品污染微生物的風險，鼓勵企業(yè)在生產中采用隔離操作、吹灌封一體等先進技術。生產中采用隔離操作、吹灌封一體等先進技術。2. 1. 濕熱滅菌工藝的研究濕熱滅菌工藝的研究2.制劑濕熱滅菌工藝2.1.1.濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)2.1.2.過度殺滅法的工藝研究過度殺滅法的工藝研究2.1.3.殘存概率法的工藝研究殘存概率法的工藝研究2.2. 濕熱滅菌工藝的驗證濕熱滅菌工藝的驗證2.2.1.物理確認物理確認2.2.2.生物學確認生物學確認2.2.1

7、1 濕熱滅菌工藝的研究濕熱滅菌工藝的研究 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.1.1.濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)濕熱滅菌工藝的確定依據(jù) 滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝的決策樹進行，濕熱滅菌工藝是決策樹中首先考慮的滅菌工藝。對于藥品的滅菌工藝的考察和確定，首先是考察其能否采用濕熱滅菌工藝，能否耐受濕熱滅菌的高溫。目前濕熱滅菌方法主要有兩種：過度殺滅法（F012）和殘存概率法（F08）。F0值的確認應同時滿足物理學確認和生物學確認。如果F0值不能達到8，提示選擇濕熱滅菌工藝不合適，必須考慮其他滅菌工藝或者無菌生產工藝。 在很大程度上取決于被滅菌產品的熱穩(wěn)定性。藥物是否能耐受濕熱滅菌工藝，除了與藥物活性成分

8、的化學性質相關外，還與制劑的處方、工藝、包裝容器等密切相關，所以在初期的工藝設計過程中需要通過對藥物熱穩(wěn)定性的綜合分析來確定濕熱滅菌工藝的可行性。需要注意的是，使用熱不穩(wěn)定的包裝材料不能作為選擇無菌工藝的唯一理由。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.1.1.1.活性成分的化學結構特點與穩(wěn)定性v通過對活性成分的化學結構進行分析，可以初步判斷活性成分的穩(wěn)定性?；钚猿煞忠籽趸嗅槍π缘倪M行處方工藝的優(yōu)化研究v在此基礎之上，還應該通過設計一系列的強制降解試驗對活性成分的穩(wěn)定性做進一步研究確認，了解活性成分在各種條件下可能發(fā)生的降解反應，以便在處方工藝的研究中采取針對性的措施，保障產品能夠采用濕熱滅菌工藝

9、2.1.1.2.處方工藝的研究采取充入惰性氣體加入適宜的抗氧化劑活性成分的穩(wěn)定性與pH值相關尋找最利于主成分穩(wěn)定性的pH值主成分是因為某些雜質的存在影響了穩(wěn)定性適宜的手段去除相關的雜質2.1.1.3.穩(wěn)定性研究v無論使用何種設計方法，都需要進行最終滅菌產品的穩(wěn)定性研究。考察最終滅菌程序對產品性質穩(wěn)定性影響的指標可包括產品的降解量、含量、pH值、顏色、緩沖能力以及產品的其它質量特性。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝v滅菌時，殺滅微生物的效果和活性成分的降解都隨著時間和溫度而累積。這意味著加熱和冷卻的變化將影響產品的穩(wěn)定性，同時影響殺滅效果。因此，穩(wěn)定性研究用樣品最好選取處于最苛刻的滅菌條件的產品，

10、如：可采用在熱穿透試驗中F0最大的位置上滅菌的產品進行穩(wěn)定性考察，以確保所有滅菌產品的質量在有效期內仍能符合要求。2.1.2.過度殺滅法的工藝研究 過度殺滅法假設的生物負荷和耐熱性都高于實際數(shù)，而大多數(shù)微生物的耐熱性都比較低，很少發(fā)現(xiàn)自然生成的微生物的D121值大于0.5分鐘。因此，過度殺滅的滅菌程序理論上能完全殺滅微生物，從而能提供很高的無菌保證值。由于該方法已經對生物負荷及耐熱性作了最壞的假設，故沒有必要對每一批次的被滅菌品進行微生物的監(jiān)控。2.2.1 1 濕熱滅菌工藝的研究濕熱滅菌工藝的研究 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝但這并不意味著生產過程中對微生物可以完全不加控制。即使對最終滅菌產品

11、設定了過度殺滅參數(shù)，仍應該在適當?shù)臅r間間隔內對生物負荷及耐熱性進行監(jiān)測。從控制熱原的角度，也應當遵循工藝衛(wèi)生規(guī)范，控制產品的微生物污染。如果實際生產中能夠嚴格遵循GMP的要求，這一點是可以實現(xiàn)的。 過度殺滅要求的熱能比較大，其后果是被滅菌品降解的可能性增大。2.2.1 1 濕熱滅菌工藝的研究濕熱滅菌工藝的研究 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.1.3.殘存概率法的工藝研究v殘存概率法所需監(jiān)控的指標包括被滅菌品生產開始階段及常規(guī)生產階段指示菌（對滅菌程序呈現(xiàn)強耐熱性的試驗菌）以及生物負荷的信息。只有對這些指標進行了有效的監(jiān)控后，才能采用比過度殺滅法F0值低的熱力滅菌程序，同時產品的無菌保證水平不會

12、降低。v殘存概率法更適合那些處方耐熱性較差的最終滅菌產品。此法能夠恰當?shù)貧缟镓摵?，同時避免產品發(fā)生不可接受的降解。此時滅菌程序的設計就需同時考慮控制待滅菌產品的生物負荷及其耐熱性。v無菌保證值= F0 / D - lgN0v其中，無菌保證值是SAL的負對數(shù)，N0為滅菌開始時產品中的污染微生物總數(shù)，D為污染微生物的耐熱參數(shù)。所以，滅菌工藝的無菌保證值與F0、N0、D密切相關。2.1.3.1.滅菌前生物負荷的控制v除了需要關注滅菌過程本身，還需要在生產過程中采用一些適當?shù)氖侄蝸肀O(jiān)測和控制藥品滅菌前的生物負荷。具體措施通常包括滅菌前微生物數(shù)量與耐熱性的監(jiān)測、藥液過濾、工藝參數(shù)的控制等等。v藥液過

13、濾：在確定工藝的過程中，也應該對濾膜的孔徑、材質、濾器的使用周期進行必要的篩選。v在工藝參數(shù)控制方面，由于微生物在藥液放置期間也會逐漸繁殖，尤其一些營養(yǎng)型的注射液，如葡萄糖注射液等，其環(huán)境更有利于微生物的生長和繁殖，因此應通過工藝篩選和驗證來確定溶液配制至過濾前、以及過濾后至滅菌前能夠放置的最長時限，并相應確定產品的批量、生產周期等關鍵工藝參數(shù)。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.1.3.2.滅菌前微生物污染的監(jiān)測v滅菌前微生物污染水平的監(jiān)測應在正常生產過程中取樣并覆蓋整個生產過程，取樣設計應選取生產過程中污染最大，最有代表性的樣品，且要充分考慮到產品從灌封到滅菌前的放置時間。一般而言，如果灌裝

14、持續(xù)一段時間，可從每批產品灌裝開始、中間及結束時分別取樣。v污染水平檢查可采用薄膜過濾法，方法應經過驗證，具體操作可參照中國藥典微生物限度檢查法。v對于最終滅菌且滅菌前生物負荷檢查中發(fā)現(xiàn)污染菌的產品，應進行污染菌耐熱性的檢查。污染菌的耐熱性檢查可以采用合適的測定方法，比如：將樣品或浸泡在藥液中的收集有污染菌的濾膜，在80100保溫約1030min，過濾，取濾膜培養(yǎng)，觀察是否有菌生長。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝v耐熱性檢查中任何幸存下來或生長的微生物都可以被假定為耐熱菌，應采用定時煮沸法將它和已知的生物指示劑的耐熱性加以比較，必要時，可再進一步測試耐熱污染菌的D值，然后根據(jù)滅菌的F0值及污染

15、菌的數(shù)量與耐熱性對產品的無菌做出評價。當產品微生物污染水平超標準時，應對污染菌進行鑒別、調查污染菌的來源并采用相應的糾正措施。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.2.1.物理確認2.2.2 2 濕熱滅菌工藝的驗證濕熱滅菌工藝的驗證 物理確認所用的溫度測試系統(tǒng)應在驗證和/或試驗前后校準，校準的頻次應根據(jù)儀器設備的性能、驗證的時間的長短來確定。溫度探頭的精度至少為0.15。2.2.1.1.物理確認的前提 物理確認所涉及的滅菌設備，也應該在驗證前經過設備確認，其中應包括空載熱分布試驗。2.2.1.2.裝載熱分布試驗 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝裝載熱分布試驗的目的是了解在裝載條件下設備內部的溫度分布狀

16、況，包括高溫點、低溫點的位置，為后續(xù)的評估和驗證打下基礎。裝載熱分布一般在空載熱分布的基礎上進行。溫度探頭的個數(shù)和安裝位置取決于滅菌器的幾何形狀以及設備確認的結果，安裝位置應包括可能的高溫點、低溫點，滅菌柜溫度控制探頭處、靠近溫度記錄探頭處。溫度探頭應安放在待滅菌容器的周圍，注意不能接觸待滅菌的容器。裝載熱分布試驗需要考慮最大、最小和生產過程中典型裝載量情況，進行試驗時，應盡可能使用待滅菌產品。如果采用類似物，應結合產品的熱力學性質等(如粘度、比熱容等)進行適當?shù)娘L險評估。待滅菌產品的裝載方式和滅菌工藝的各項參數(shù)的設定應與正常生產時一致，應采用適宜的方式（圖表或照片）說明產品的裝載情況，并評估

17、探頭放置是否合理。如果待滅菌產品存在不同包裝規(guī)格或濃度規(guī)格，應評估驗證所采用的樣品和裝載方式是否能充分反映所有樣品的實際裝載情況。每一裝載量的熱分布試驗需要至少連續(xù)進行三次。2.2.1.3.熱穿透試驗熱穿透試驗是考察滅菌柜和滅菌程序對待滅菌產品適用性的一項試驗。熱穿透試驗的目的是確認產品內部也能達到預定的滅菌溫度、滅菌時間或F0值。一個好的滅菌柜和滅菌程序，既要使所有待滅菌產品達到一定的F0值，以保障產品的SAL106，同時又不能使部分產品受熱過度而造成藥物部分降解，以致同一滅菌批次的產品出現(xiàn)質量不均一。熱穿透試驗的溫度探頭的個數(shù)和安裝位置可參考裝載熱分布設置。一般采用足夠數(shù)量的溫度探頭，將熱

18、穿透溫度探頭置于藥液中的冷點，即整個包裝中最難滅菌的位置。對于小容量注射液，如果有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭放在產品包裝之外也能夠反映出產品的熱穿透情況，風險能夠充分得到控制，也可以考慮將探頭放在容器之外。熱穿透試驗的步驟及要求與裝載的熱分布試驗基本相同，每一裝載方式的熱穿透試驗也需要至少進行三次。以確定達到預期的無菌保障水平對于F0值最大點位置（熱點）的樣品，由于其受熱情況最為強烈，因此應評估該位置下產品的穩(wěn)定性情況，以進一步確認滅菌對于產品的穩(wěn)定性沒有影響。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.2.1.4.熱分布和熱穿透試驗數(shù)據(jù)的分析處理在物理確認試驗中，應確認關

19、鍵和重要的操作參數(shù)并有相應的文件和記錄。-保溫階段每個探頭所測得溫度的變化范圍-保溫階段不同探頭之間測得的溫度變化范圍-保溫階段探頭測得的溫度與設定溫度之間的差值-保溫階段探頭測得超過設定溫度的最短及最長時間-F0的下限及上限-滅菌階段結束時的最低F0值-滅菌階段的最低和最高壓力-飽和蒸汽溫度和壓力之間的關系-滅菌階段腔室的最低和最高溫度-熱穿透溫度探頭之間的最大溫差或F0的變化范圍-熱分布試驗中溫度探頭間的最大溫差-最長平衡時間-最少正常運行的探頭數(shù)通常情況下，保溫時間內溫度波動應在1.0之內，升、降溫過程的溫度波動可通過總體F0值來反映，如果溫度或F0值差別過大，提示滅菌柜的性能不符合要求

20、、裝載方式選擇不當?shù)?，需要尋找原因并進行改進，重新進行驗證。對于熱敏感的藥物，還應該控制滅菌柜的升溫和降溫時間，以保證熱能的輸入控制在合理的范圍以內，不會對產品的熱穩(wěn)定性造成影響。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝2.2.2.生物學確認2.2.2 2 濕熱滅菌工藝的驗證濕熱滅菌工藝的驗證v濕熱滅菌工藝的微生物挑戰(zhàn)試驗是指將一定量已知D值的耐熱孢子（生物指示劑）在設定的濕熱滅菌條件下滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是否確實能使產品達到預定的無菌保證水平。生物指示劑被殺滅的程度，是評價一個滅菌程序有效性的直觀指標。2.2.2.1.生物指示劑選用的一般原則v一般情況下，生物指示劑選擇的原則性要求是：孢子穩(wěn)定、

21、非致病菌、易于培養(yǎng)、有效期長、保存及使用方便、安全性好。注意所用的生物指示劑的耐熱性應強于待滅菌產品中的污染菌。v常用的生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌等。過度殺滅法：嗜熱脂肪芽孢桿菌的孢子，或其他D值大于1的芽孢。殘存概率法：耐熱性可以小于嗜熱脂肪芽孢桿菌的孢子。2.2.2.2.生物指示劑的使用和放置v實際驗證過程中可以將生物指示劑接種在待滅菌產品上或直接采用市售的生物指示劑成品，殘存概率法推薦采用直接接種法。 2. 2. 制劑濕熱滅菌工藝v對于具體的品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產品之中，應測定生物指示劑在該產品中的耐熱性，即D值。v生物指示劑的用量需要根據(jù)生物指

22、示劑在待滅菌樣品中的耐熱性來確定，其用量應符合挑戰(zhàn)性試驗的要求。生物指示劑的用量可以采用陰性分數(shù)法或者殘存曲線法計算，可以根據(jù)實際情況選擇合適的計算方法。2.2.2.3.滅菌v生物指示劑的驗證應該按照產品設定的滅菌工藝進行滅菌。每個產品的每個規(guī)格的每一滅菌程序，至少需要連續(xù)進行三次生物指示劑驗證試驗。2.2.2.3.檢查和培養(yǎng)2.2.2.2.生物指示劑的使用和放置v裝有生物指示劑的容器應緊挨于裝有測溫探頭的容器，在滅菌設備的冷點處必需放置生物指示劑。滅菌柜的其他部位應裝載產品或者類似物，以盡可能的模仿實際生產時的狀況。v完成滅菌周期后，盡快將指示劑放入培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。需要注意不同的生物指示劑

23、所需要的培養(yǎng)條件也各不相同，應根據(jù)所用生物指示劑的特性和供應商的說明書來確定培養(yǎng)條件，同時應放置陽性對照樣品。2.2.2.3.試驗結果的評價v根據(jù)生物指示劑的D值和接種量推算產品在滅菌過程中實際達到的SAL值。如果各次驗證的結果不一致，需要分析原因，采取相應的改進措施后重新進行驗證工作。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.1.無菌生產工藝的研究-無菌藥品應首選終端滅菌工藝。如不能耐受終端滅菌工藝條件，應確定是否能通過優(yōu)化處方工藝，以改善其耐熱性且不影響其他關鍵質量屬性。如經充分的研究證實產品無法耐受終端滅菌工藝，則可考慮能否通過除菌過濾工藝進行過濾除菌，如果可以，即可采用除菌過濾

24、和無菌工藝相結合；如果不可以，則可考慮采用無菌分裝和無菌工藝相結合。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.1.1. 過濾除菌工藝的研究-過濾除菌工藝是通過除菌過濾器，將藥液中的微生物除去而得到無菌濾液。采用過濾除菌工藝時，工藝研究和生產過程控制的重點是影響無菌保證水平的工藝步驟和工藝參數(shù)，主要包括物料（如原料藥、輔料、內包裝材料等）的質量控制、除菌過濾器的選擇、除菌過濾工藝參數(shù)的研究、除菌過濾生產過程的控制等。-對于采用過濾除菌生產工藝的制劑，需注意對配制藥液使用的原料藥、輔料（包括注射用水）等原材料的微生物負荷進行檢查，掌握潛在的污染微生物的總體特性情況，通過研究確定相應的質控標

25、準。-過濾除菌生產工藝所使用的除菌過濾器，通常為標稱孔徑0.2微米（0.22微米）或更小的除菌級的過濾器。除菌過濾器的過濾效能是評價除菌過濾工藝的重要參數(shù)，需要進行相應的研究和驗證。3.1.1. 過濾除菌工藝的研究-通常，影響除菌過濾器的除菌過濾效能的因素包括：藥液的性質，如藥液的粘度、表面張力、pH值、滲透壓等；過濾步驟的工藝參數(shù)，如過濾的壓力、流速、時間、溫度等；除菌過濾器與所過濾的藥液的相互作用，如除菌過濾器與藥液的相容性、除菌過濾器的過濾總量和使用周期等。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝-在實際生產過程中，過濾除菌前通常應進行過濾器完整性檢測，過濾除菌后必須要進行過濾器完

26、整性檢測。-由于微生物通過除菌過濾器的概率隨著待過濾溶液中微生物數(shù)量的增加而增加，除菌過濾工藝中需對待過濾溶液的微生物負荷情況進行研究和控制。同時應通過研究確定無菌生產各操作環(huán)節(jié)的時間控制范圍，如料液配制后待過濾的存放時間、藥液過濾操作的時間、過濾后至灌裝前放置的時間、灌封操作的時間、滅菌后的內包裝材料及密封件允許的放置時間、除菌過濾器的過濾總量和使用周期等。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.1.2. 無菌分裝工藝的研究 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝-無菌分裝生產工藝是將采用經驗證的滅菌/除菌工藝過程處理后的原料藥或者原料藥和輔料，用無菌操作的方法分裝到采用經驗

27、證的滅菌工藝處理的容器中，密封得到的。-無菌分裝工藝的工藝研究和生產過程控制的重點同樣是影響無菌保證水平的工藝步驟，主要包括物料（包括原料藥、輔料、內包裝材料等）的質量控制、物料暴露于環(huán)境中可能再污染的操作步驟等。-關于物料的質量控制，采用無菌分裝工藝的制劑所涉及的所有物料，都必須采用適當?shù)臏缇?除菌工藝處理后方可使用。各物料的滅菌/除菌工藝，都應經過驗證、進行監(jiān)測，并受到良好的控制。同時需要對各物料的無菌性、細菌內毒素水平等進行嚴格控制，通過研究確定相應的質控標準。-原料藥或者原料藥和輔料的分裝步驟是影響產品質量和無菌保證水平的關鍵生產步驟，應結合生產設備和產品特點進行工藝參數(shù)（如分裝速度和

28、分裝時間等）的研究，并確定相應的工藝控制標準。3.2. 無菌生產工藝的驗證 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝-無菌生產工藝能否達到設定的無菌保證水平，與整個生產過程的控制密切相關，應按照GMP要求及產品具體生產工藝情況進行生產環(huán)境和生產過程的控制，應對無菌生產工藝進行驗證。-無菌生產工藝驗證應包括最差條件。在實際生產過程中，對生產過程和工藝參數(shù)的控制均不能超過經驗證的最差條件的控制范圍。-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗是無菌生產工藝驗證的重要部分，應盡可能模擬常規(guī)的無菌生產工藝，并包括所有對無菌保證水平有影響的操作，以及生產中可能出現(xiàn)的各種干預和最差條件。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的首次驗證，應當連續(xù)

29、進行3次合格試驗。在生產用的設備、設施、人員結構及工藝方法有重大變更時都應重復進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。對于除菌過濾工藝的驗證，還包括對除菌過濾系統(tǒng)的驗證，如過濾器的微生物截留驗證、過濾器與待過濾藥液的相容性驗證等。3.2.1. 培養(yǎng)基模擬灌裝試驗 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.1.1. 培養(yǎng)基-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗需要選擇合適的培養(yǎng)基，并對培養(yǎng)基的質量進行控制。-應當根據(jù)產品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基。一般選用胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），某些特殊情況下也可以選用厭氧生長培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FTM）。-應關注培養(yǎng)基的微生物促生長性能

30、，在按照標準操作規(guī)程制備培養(yǎng)基后，可參考中國藥典附錄進行培養(yǎng)基微生物促生長性能試驗，確認所制備的培養(yǎng)基出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長。-用于無菌分裝工藝驗證的培養(yǎng)基，應關注無菌性檢查，可參考中國藥典附錄進行，結果應符合規(guī)定。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.1.1. 培養(yǎng)基-在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中，需進行陽性對照試驗，即取低濃度的菌種接種于進行陽性試驗用的對照容器中，與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗在同一條件下進行培養(yǎng)。除了中國藥典附錄中規(guī)定的陽性菌，建議使用生產環(huán)境中常見的微生物，或者在同一生產環(huán)境中曾被檢出過的菌種。接種量一般每個容器10100CFU，每個菌種接種2瓶，通常需均證實

31、有菌生長，該培養(yǎng)基模擬灌裝試驗方有效。-如果試驗中需要使用模擬分裝用粉末，同樣需要對模擬分裝用粉末進行選擇和質量控制。模擬分裝用粉末的選擇一般遵循以下原則：可以在干粉狀態(tài)下滅菌，滅菌后的無菌性達到藥典規(guī)定的標準；流動性較好，可以用分裝機分裝；可溶于液體培養(yǎng)基；在模擬試驗應用的濃度下無抑菌性。常用的模擬分裝材料有乳糖、甘露醇、PEG6000、PEG8000等，也可以采用培養(yǎng)基干粉作為模擬分裝用無菌粉末。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.1.2. 模擬無菌生產工藝的操作過程-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中使用的內包裝材料的清洗、滅菌，分裝設備的清洗、消毒及與產品接觸的分裝設備部件的清洗、

32、滅菌、安裝過程均應遵循與實際生產操作相同的標準操作規(guī)程。-應當注意有足夠數(shù)量的培養(yǎng)基與容器的內表面充分接觸，灌裝培養(yǎng)基時，每個容器的灌裝體積一般為1/3-1/2之間，最多不能超過容器的85%。-對于凍干粉針劑的驗證試驗，在培養(yǎng)基灌裝半壓塞后，只需模擬樣品進入和移出凍干機的過程即可，而不必完全模擬整個凍干過程，以保證一旦有細菌，能夠保持較好的生存能力。-可模擬一些可能造成污染的操作步驟，如抽真空，充氮（驗證中應使用壓縮空氣代替）等步驟。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.1.2. 模擬無菌生產工藝的操作過程-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗應盡可能模擬常規(guī)的無菌生產工藝，應包括所有對無菌保證

33、水平有影響的關鍵操作，包括生產中可能出現(xiàn)的各種干預和最差條件。各種干預和最差條件的考慮需要體現(xiàn)風險控制的理念。-通?？赡艹霈F(xiàn)的各種干預和最差條件包括：人員數(shù)量和他們的活動、換班、休息等；設備調試，正常停車、非正常停車、意外事故（如檢修等）；采用滅菌后所允許放置的最長時間的設備或者車間進行生產；模擬生產時間最長的批量所需的時間；采用最慢的填充速度和最大的包裝容器（即最長的暴露時間）；采用最快的填充速度和最小的包裝容器（即容易伴隨更多干預的生產情況）。-在試驗計劃中，總體研究設計和運行時間應該模擬可能出現(xiàn)的各種干預和最差操作條件，覆蓋所有實際生產過程涉及的操作。-培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量應當足以保證評

34、價的有效性，批量較小的產品，培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量應當至少等于產品的批量。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.1.3. 試驗結果的評價-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗需要對所有灌裝樣品進行培養(yǎng)和無菌檢查。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的目標是零污染，應當符合以下要求：-一旦發(fā)現(xiàn)污染，需要進行偏差調查，包括污染菌的鑒別、污染情況的評估、是否可以重復進行試驗等等。3.2.1. 除菌過濾系統(tǒng)的驗證 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝-除菌過濾系統(tǒng)的驗證一般包括微生物截留研究、相容性研究（包括可提取物和浸出物研究、化學兼容性研究和吸附研究）。3.2.2.1. 微生物截留研究-驗證目的驗證目的：除菌過

35、濾器微生物截留試驗是通過模擬實際過濾工藝，過濾含有一定量生物指示菌的產品溶液或者產品替代溶液，確認除菌過濾器的微生物截留能力。-過濾器的微生物截留驗證的設計：-a、挑戰(zhàn)用微生物的選擇通常采用缺陷性假單胞菌作為挑戰(zhàn)性試驗用菌；如果使用其他細菌，應保證該細菌足夠細小至足以挑戰(zhàn)除菌級別過濾器的截留性能，并能代表產品中發(fā)現(xiàn)的最小微生物。應盡可能的進行微生物負荷的鑒別和量化研究，掌握所分離的微生物的形態(tài)學特征，為挑戰(zhàn)性微生物的選擇提供依據(jù)。a、挑戰(zhàn)用微生物的選擇-挑戰(zhàn)性微生物的大小可以通過其可穿過0.45微米級別的濾膜來確證。通常情況下，標準培養(yǎng)條件下生長的缺陷性假單胞菌，在高挑戰(zhàn)濃度（如107/cm2

36、）時，能少量穿過0.45微米級別的濾膜。3.2.2.1. 微生物截留研究-b、微生物截留試驗條件在試驗室模擬生產工藝條件，將定量缺陷性假單胞菌加入到挑戰(zhàn)溶液中進行過濾，缺陷性假單胞菌的加入量應當能夠在預定的時間內提供穩(wěn)定的挑戰(zhàn)濃度，并應盡可能確認缺陷性假單胞菌的單分散性狀態(tài)。挑戰(zhàn)溶液應盡可能使用實際產品。微生物截留試驗過程中的壓差應達到或超過實際生產過程的最大壓差和/或單位面積的最大流速（在過濾器制造商的設計規(guī)范內）。微生物截留驗證研究應包括多個批次的濾膜（通常三個批次），其中至少應有一個批次，其預研究時或物理完整性測試時的數(shù)值符合但是接近（例如，10之內）過濾器生產商提供的合格規(guī)范限值。 3

37、 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.2.1. 微生物截留研究c、微生物截留驗證研究中使用的過濾膜的物理完整性檢測數(shù)值應包括在試驗報告中。物理完整性檢測應使用具有標準值的物料進行，如水、70%異丙醇、或其他溶液。微生物挑戰(zhàn)試驗前后均應進行完整性測試。物理完整性檢測應使用具有標準值的物料進行，如水、70%異丙醇、或其他溶液。微生物挑戰(zhàn)試驗前后均應進行完整性測試。如果微生物截留驗證研究中，在過濾器的下游檢測到測試用微生物，則應進行調查。如果調查確認測試用微生物能穿透完整性檢測達標的過濾器，那么就應重新考慮此種過濾器在這些工作條件下的適用性。

38、除菌過濾時不推薦重復使用過濾器。如果需要重復使用除菌級過濾器，需要說明理由，并對重復使用的相關參數(shù)（如最多處理批次、過濾量等）進行嚴格的驗證后確定相應的范圍。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝3.2.2.2. 相容性研究a、可提取物和浸出物研究可提取物可提取物指在人為或挑戰(zhàn)性條件（如溶劑、溫度或時間）下，從過濾器中脫離的任何化學組分。通過可提取物的研究，可以盡可能多地了解過濾器組件材料中可能被提取出來的物質，并據(jù)此建立專屬、靈敏、可行的分析方法。浸出物浸出物是指在正常儲存或使用條件下，從過濾器中進入產品或溶液中的物質。潛在的可提取物或浸出物的來源包括但不限于：膜組件（如：成形劑、表

39、面活性劑、抗氧化劑、殘留溶劑、支架層）和塑料組件（如：封蓋、外殼、支架、O型圈）。影響因素包括滅菌方法、過濾液的化學性質、接觸時間、溫度、過濾量與面積之比等?？紤]到可提取物的來源不同和影響因素較多，建議過濾器使用者在開展研究時盡可能使用實際產品，并使用與實際生產相同類型的過濾器。當產品會干擾分析方法或產品過于昂貴等時可使用替代溶液，替代溶液必須與待過濾產品性質盡可能一致，能代表產品的溶解性作用和化學特性。 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝a、可提取物和浸出物研究確定了用于可提取物試驗的萃取溶液（產品、替代液或幾類溶液合并使用）后，在后續(xù)試驗設計時應模擬實際生產條時的最差條件，具體可

40、考慮溫度、時間、pH值和預處理（如：沖洗、滅菌）工序等關鍵變量。可提取物試驗應采用過濾裝置處于最差條件時的接觸時間和溫度，使用滅菌后的過濾器來完成?？梢杂渺o態(tài)浸泡或循環(huán)流動的方法。采用靜態(tài)浸泡法時，過濾器在給定溫度的萃取溶液中浸泡一段既定的時間。而采用循環(huán)流動法時，萃取液在既定的時間內循環(huán)反復穿越過濾器。將萃取液收集并檢測，從而確定其中的過濾器可提取物。在取得過濾器萃取液后，通過分析可以確定來自過濾器的物質種類和含量，分析方法可包括非揮發(fā)性殘留物、紫外光譜、紅外光譜、氣相色譜-質譜、液相色譜-質譜、總有機碳分析等。除了對過濾器可提取物的種類和含量進行確定外，必要時還可以采用已被認可的生物反應性試驗對其安全性進行評估。3.2.2.2. 相容性研究 3 3. .制劑無菌生產工藝制劑無菌生產工藝b、化學兼容性研究過濾器的化學兼容性研究用來評估過濾裝置與料液的化學相容性，以避免可能的過濾器受損或變形，并能防止料液受到釋放物或微粒物質的污染。化學兼容性試驗應涵蓋整個裝置，試驗的設計應考慮料液性質、過濾溫度和接觸時間等。由于過濾裝置與過濾料液或溶劑之間可能存在諸多化學相互作用，過濾器生產商所提供的代表性的化學兼容性表通常只作