腫瘤的多藥耐藥及其逆轉(zhuǎn)劑研究進(jìn)展

1、綜述腫瘤的多藥耐藥及其逆轉(zhuǎn)劑研究進(jìn)展安徽省腫瘤醫(yī)院 桂留中 化療仍是惡性腫瘤的重要治療手段之一，然而腫瘤細(xì)胞的耐藥常使化療最終失敗。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的耐藥特點(diǎn)，耐藥可分為原藥耐藥（Primary drug resistance,PDR）和多藥耐藥（Multidrug resistance ,MDR）。PDR只對誘導(dǎo)藥物產(chǎn)生耐藥而對其他藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性，如抗代謝藥類；MDR則是指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥產(chǎn)生抗藥性的同時(shí)，對其他結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的抗腫瘤藥產(chǎn)生交叉耐藥性。MDR的表現(xiàn)十分復(fù)雜，既可有原發(fā)性（天然性）耐藥，也可有誘導(dǎo)性（獲得性）耐藥；還有典型性和非典型性耐藥之分。由于MDR給化療帶來了

2、困難，近年人們對其產(chǎn)生的機(jī)制以及試圖尋找逆轉(zhuǎn)劑做了大量的工作。本文簡介MDR產(chǎn)生的機(jī)制并著重介紹近年逆轉(zhuǎn)劑的研究進(jìn)展。1. MDR產(chǎn)生的機(jī)制1.1膜糖蛋白介導(dǎo)的機(jī)制1.1.1 P-gp與MDR 1976年Ling等首先在抗秋水仙堿的中國倉鼠卵巢細(xì)胞株上發(fā)現(xiàn)了一種能調(diào)節(jié)細(xì)胞膜通透性的糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）,因其相對分子量為170kd，又稱P-170。1。P-gp主要分布在有分泌功能的上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜中，在人類正常組織中有不同程度的表達(dá)，其中腎上腺、肺臟、胃腸、胰腺等組織中表達(dá)較高，而在骨髓中表達(dá)較低。P-gp屬于ATP結(jié)合盒家族的轉(zhuǎn)運(yùn)因子，其生理功能為在ATP供能下將細(xì)

3、胞內(nèi)的毒性產(chǎn)物泵出細(xì)胞，對組織細(xì)胞起保護(hù)作用。P-gp由mdr1基因編碼產(chǎn)生。人類mdr1基因位于7號(hào)染色體長臂2區(qū)一帶一亞帶（7q21.1）。1986年，Gros將編碼P-gp的mdr1cDNA直接轉(zhuǎn)染敏感細(xì)胞后，轉(zhuǎn)染細(xì)胞表現(xiàn)出完全的MDR表型，從而提供了P-gp能夠?qū)е露嗨幠退幍挠辛ψC據(jù)。現(xiàn)已證明，許多腫瘤原發(fā)性或獲得性耐藥均與P-gp過量表達(dá)有關(guān)。P-gp隨mdr1基因擴(kuò)增而增加。P-gp有多個(gè)藥物結(jié)合位點(diǎn)，因而具有多種藥物泵出功能，不過其底物多為天然性抗癌藥如長春堿類、蒽環(huán)類、紫杉醇類和鬼臼毒素類等。由于P-gp能逆濃度差將藥物泵出胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，從而減弱了藥物的細(xì)胞毒作用

4、。1.1.2 MRP與MDR 1992年Cole等在兩種非P-gpMDR細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因過度表達(dá)，并由其命名為mrp基因。該基因位于人類染色體16q13.1，由其編碼組成的跨膜糖蛋白稱為多藥耐藥相關(guān)蛋白（Multidrug resistance-associated protein ,MRP），相對分子量為190kd，也屬于ATP依賴性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白類。MRP的MDR相對機(jī)制與P-gp相似又有不同，相似的是都可依賴ATP供能將藥物泵出細(xì)胞外，不同的是： MRP轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)或與GSH結(jié)合，或與GSH共轉(zhuǎn)運(yùn)，改變藥物在胞內(nèi)的分布以降低核內(nèi)藥物濃度，從而使藥物在DNA靶點(diǎn)的絕對濃度降低； 通過

5、形成CL通道或改變通道活性而改變細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器內(nèi)的pH值，而腫瘤細(xì)胞內(nèi)pH值降低將導(dǎo)致質(zhì)子化的藥物大量外排。MRP與P-gp之間存在交叉耐藥種類，包括長春堿類、阿霉素、足葉乙苷等，均為能與GSH共結(jié)合的藥物1，2,3。1.1.3 LRP與MDR 1993年Scheffer發(fā)現(xiàn)小細(xì)胞肺癌中有l(wèi)rp基因表達(dá)，該基因定位于16q13.1-16q11.2，編碼相對分子量為110kd蛋白，稱肺耐藥相關(guān)蛋白（Lung resistance-associated,LRP）。該蛋白是穹隆蛋白的主要成分，阻止以細(xì)胞核為靶點(diǎn)的藥物通過核孔進(jìn)入胞核，并將進(jìn)入胞漿的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到運(yùn)輸囊泡中，以胞吐的方式排出胞外，從而影響

6、胞內(nèi)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)與分布，致靶點(diǎn)藥物濃度下降，但亦依賴ATP供能。LRP分布在人體體腔上皮、分泌器官等正常組織中，也不同程度地分布于各種腫瘤組織中。LRP不僅對蒽環(huán)類、生物堿類、鬼臼毒素類產(chǎn)生耐藥，也對以DNA為靶點(diǎn)的非P-gp和MRP介導(dǎo)耐藥的順鉑、卡鉑等烷化劑產(chǎn)生耐藥。1.1.4 BCRP與MDR 1998年美國3個(gè)不同的研究小組相繼報(bào)道無P-gp和MRP表達(dá)的乳腺癌耐藥細(xì)胞系以及結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)新的腫瘤耐藥蛋白。后經(jīng)RNA指紋分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)，這些腫瘤細(xì)胞有一2.4kb的mRNA過度表達(dá)，該mRNA編碼一種655個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，被命名為乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白（BCRP）。該蛋白也是依賴ATP供

7、能將化療藥物泵出細(xì)胞外導(dǎo)致MDR。免疫熒光顯像證實(shí)BCRP主要位于細(xì)胞膜上，參與膜內(nèi)外藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，而不是像MRP那樣主要改變藥物在胞內(nèi)的分布。過度表達(dá)BCRP的腫瘤細(xì)胞株對米托蒽醌、阿霉素、柔紅霉素、鬼臼乙叉苷、喜樹堿類產(chǎn)生交叉耐藥，而對長春新堿、紫杉醇等較少交叉耐藥。1.2 酶介導(dǎo)的MDR1.2.1谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）與MDR GST是機(jī)體中催化GSH與親電物質(zhì)發(fā)生結(jié)合的一類酶系，是由同源或異源二聚體組成的超基因家族，到目前為止，共發(fā)現(xiàn)5類，即、。其中GST-與惡性腫瘤關(guān)系最為密切.GST-可催化親電子物質(zhì)與GSH結(jié)合,形成GSH-藥物結(jié)合物,增加其水溶性促進(jìn)代謝,最終將毒物從尿中排出或

8、降解為無毒性的醇類物質(zhì),從而降低抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒作用.其主要介導(dǎo)順鉑、烷化劑、蒽環(huán)類的耐藥.研究表明,腫瘤耐藥程度與GST-表達(dá)高低成正比.1.2.2拓?fù)洚悩?gòu)酶（Topoisomeras，TOPO） TOPO是一種能催化DNA超螺旋結(jié)構(gòu)局部構(gòu)型改變的基本核酶，分為、兩類。其中TOPO與細(xì)胞耐藥關(guān)系密切。TOPO是依托泊苷、替尼泊苷及蒽環(huán)類等的作用靶點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞由于快速增長的特性，其TOPO含量及活性遠(yuǎn)高于正常細(xì)胞。含量越高，抗腫瘤藥物作用靶點(diǎn)越多，化療效果越好，反之效果差。已證明一些耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)TOPO含量下降或活性減弱。因此TOPO含量可作為化療的一個(gè)敏感性指標(biāo)參數(shù)。此種耐藥并不伴隨P-

9、gp或MRP的表達(dá)，因此又稱為非典型性耐藥。1.2.3蛋白激酶C(PKC)與MDR PKC是一組Ca/磷脂依賴的同工酶，幾乎參與所有MDR的調(diào)節(jié)。P-gp是PKC催化磷酸化的底物，P-gp磷酸化后可被激活。PKC也可使MRP、LRP、GST和TOPO磷酸化而被激活。1.2.4 環(huán)氧化酶（Cyclodxygenase,COX） 是前列腺素合成過程中的關(guān)健酶，是一種膜結(jié)合蛋白，存在于核膜和線粒體上。其中COX-2是誘導(dǎo)型酶。近來一些研究表明，COX-2不僅通過多種機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后，還可能參與MDR的調(diào)節(jié)：人和鼠COX-2基因側(cè)翼區(qū)含2個(gè)NF-kB結(jié)合位點(diǎn)，COX-2可能通過NF-kB途

10、徑調(diào)節(jié)P-gp的表達(dá)；COX-2的催化產(chǎn)物PGE2可使PKC上調(diào)而活化P-gp和MRP。一項(xiàng)研究表明4，54例非小細(xì)胞肺癌中，COX-2陽性表達(dá)率為59.3%，P-gp表達(dá)率為46.3%，相應(yīng)癌旁正常組織未見COX-2表達(dá)；在COX-2陽性組中，P-gp陽性表達(dá)率65.6%，明顯高于COX-2陰性組的18.2%。劉軍等5檢測48例胃癌組織中COX-2陽性為29例（60.4%），P-gp陽性31例（64.6%）；29例COX-2陽性者中有24例P-gp表達(dá)陽性。1.3 凋亡調(diào)控基因介導(dǎo)的MDR1.3.1 P53基因 P53基因位于17號(hào)染色體短臂，因編碼相對分子量為53kd的核磷酸蛋白而命名。P

11、53基因有兩種：野生型和突變型。野生型是抑癌基因，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，控制處于生長停止?fàn)顟B(tài)的靜止期細(xì)胞從G0期到G1期的轉(zhuǎn)變。野生型P53產(chǎn)物P53蛋白半衰期較短，一般無法用免疫組化法檢測到。突變型不僅失去抑癌基因的作用，而且導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡信號(hào)喪失，從而增加癌細(xì)胞對抗癌藥物誘導(dǎo)凋亡的耐受力。野生型P53能從基因轉(zhuǎn)錄水平抑制P-gp表達(dá)，而突變型P53將失去此作用，甚至能激活mdr1基因下游啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性，從而導(dǎo)致耐藥。突變型P53基因所表達(dá)的蛋白結(jié)構(gòu)改變，半衰期延長，而且易檢測，廣泛存在于多種腫瘤組織中。當(dāng)用免疫組化法在癌組織中檢測到P53蛋白時(shí)，便可認(rèn)定P53基因發(fā)生了突變。1.3.2 bc

12、l-2家族 bcl-2家族是一類與細(xì)胞凋亡有關(guān)的基因家族，也是一個(gè)同源蛋白家族。Bcl-2是抑制細(xì)胞凋亡的重要基因，是決定腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)。該基因表達(dá)增強(qiáng)能顯著抑制細(xì)胞凋亡。Bcl-2不僅促進(jìn)化療和放療的耐受，而且提高腫瘤復(fù)發(fā)率和惡變的潛力。1.4 其他 DNA的去甲基化：目前，DNA甲基化作為一種基因外遺傳信號(hào)逐漸為人們所熟知。DNA甲基化是在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，以S-腺苷甲硫氨酰為甲基供體，將甲基轉(zhuǎn)移到胞嘧啶的第5位上。啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化對基因的表達(dá)有明顯的抑制作用。1997年Kusaba等6首先提出，甲基化可能是調(diào)控mdr1基因表達(dá)的開關(guān)。該研究小組將攜帶人mdr1基因的酵母人工

13、染色體轉(zhuǎn)染至小鼠細(xì)胞中,用長春新堿誘導(dǎo)成耐藥株,然后將其與敏感株比較.結(jié)果顯示,耐藥株mdr1基因的選擇性表達(dá)增高,同時(shí)該基因5,端呈低甲基化狀態(tài),推測用化療藥物后,mdr1基因編碼的P-gp表達(dá)增高可能與該基因的5,位啟動(dòng)子區(qū)域的去甲基化狀態(tài)有關(guān).朱燕等7，也發(fā)現(xiàn)AL和MM患者骨髓mdr1基因表達(dá)水平與基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游110和150處的2個(gè)CCGG位點(diǎn)的甲基化程度呈負(fù)相關(guān).此外,葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶的過表達(dá)8、腫瘤細(xì)胞的乏氧以及細(xì)胞內(nèi)pH值降低均可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的MDR.2. MDR的逆轉(zhuǎn)從上看出腫瘤的多藥耐藥機(jī)制十分復(fù)雜,多數(shù)腫瘤細(xì)胞中幾種耐藥基因同時(shí)存在。張燕等9檢測120例成人常見腫瘤

14、標(biāo)本P-gp、MRP、LRP、GST、TOPO-的表達(dá),結(jié)果2種或2種以上耐藥基因的表達(dá)率達(dá)95.83%,5種耐藥基因共表達(dá)率達(dá)21.67%。雖然有些細(xì)節(jié)還有待進(jìn)一步證明,但P-gp介導(dǎo)的耐藥最為常見,其機(jī)理也較為清晰,目前的逆轉(zhuǎn)劑大多針對P-gp發(fā)揮作用.2.1 化學(xué)藥物逆轉(zhuǎn)劑包括鈣通道拮抗劑、環(huán)孢素類、蛋白激酶抑制劑等.前二者本身就是p-gp的底物,可與化療藥物競爭性地與P-gp結(jié)合,從而增加細(xì)胞內(nèi)藥物濃度.最常用的就是維拉帕米、尼卡地平等。體外測定維拉帕米濃度為2.5ug.ml-1時(shí),KBV200對長春新堿的IC50從1152nmol.L-1降至253nmol.l-1,當(dāng)維拉帕米濃度為1

15、0ug.ml-1時(shí),其IC50降至13.5nmol.l-1,也即長春新堿對KBV200的細(xì)胞毒性增加84倍10.另一項(xiàng)研究表明11,裸鼠口服維拉帕米20mg.kg-1與絲列霉素聯(lián)用,抑瘤率由35.79%提高到73.24%.陳賢鴻等12用尼卡地平抑制肝耐藥細(xì)胞BEL-7402/ADM增殖時(shí)發(fā)現(xiàn),5.0ug.ml-1的尼卡地平與ADM合用時(shí),ADM的IC50顯著降低,細(xì)胞內(nèi)ADM濃度升高,且呈劑量依賴性.江清林13用環(huán)孢素A逆轉(zhuǎn)多藥耐藥取得良好的臨床效果。但高濃度的鈣拮抗劑有嚴(yán)重的心血管副作用,環(huán)孢素A有免疫抑制性和腎毒性,這就限制了這些藥物臨床使用的劑量,難以達(dá)到預(yù)期的逆轉(zhuǎn)效果。近年人們相繼開發(fā)

16、出第二代逆轉(zhuǎn)劑,主要有右旋維拉帕米和來源于環(huán)孢素的衍生物PSC833等.右旋維拉帕米的心臟作用遠(yuǎn)小于混旋維拉帕米。方剛等14用1.25umol.L-1的右旋維拉帕米即可顯著增加耐藥KBV200細(xì)胞對長春新堿和阿霉素的敏感性,此濃度能被人體所接受.PSC833是環(huán)孢素A的衍生物,無環(huán)孢素A的免疫抑制和腎毒性作用。閻蓓等11用無毒劑量的PSC833給荷瘤裸鼠口服,使絲列霉素的抑瘤率提高了1.32倍.但PSC833的逆轉(zhuǎn)機(jī)理尚不清楚,有報(bào)道認(rèn)為其不是P-gp的底物,而是直接阻礙mdr1基因的表達(dá)15。2.2 以脂質(zhì)體或大分子為載體克服耐藥 脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體具有能增加與腫瘤的親和力、增加腫瘤細(xì)

17、胞對藥物的攝取量從而克服耐藥性。但早期開發(fā)的普通脂質(zhì)體載體藥物制劑易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別,不能有效發(fā)揮藥物活性。近年研究開發(fā)的表面用聚乙二醇修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體解決了上述問題.目前進(jìn)入臨床前和臨床試驗(yàn)的有多柔比星、米托蒽醌、柔紅霉素等長循環(huán)脂質(zhì)體16.金涌等17用半乳糖神經(jīng)酰胺為主要膜脂質(zhì)材料制備了5-氟尿嘧啶半乳糖神經(jīng)酰胺脂質(zhì)體(5-Fu-GCL),并對其體外對耐5-Fu的HepG2細(xì)胞株的抑制作用及其抗耐藥性進(jìn)行了考察。結(jié)果表明,5-Fu-GCL對耐5-Fu的HepG2細(xì)胞株的IC50遠(yuǎn)小于游離的5-Fu,進(jìn)入胞內(nèi)的濃度遠(yuǎn)比游離5-Fu高,并認(rèn)為其作用還與抑制胞內(nèi)胸苷酸合成酶的表達(dá)和增加NO含

18、量有關(guān).腫瘤組織的血管系統(tǒng)具有不連續(xù)的內(nèi)皮導(dǎo)致腫瘤血管的非特異性滲透，允許大分子藥物滲入腫瘤組織，同時(shí)腫瘤組織缺乏淋巴管引流，這樣可阻止在腫瘤細(xì)胞中積聚的大分子藥物被清除，這種效應(yīng)稱為EPR效應(yīng)。以N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺為載體與多柔比星以肽鍵結(jié)合后延長了多柔比星的半衰期，但由于此肽鍵穩(wěn)定，靜注后可確保無游離的多柔比星在循環(huán)系統(tǒng)中釋放，增加了治療指數(shù)。人卵巢癌細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)顯示其能克服與MDR有關(guān)的P-gp藥物外排泵。同類物凈司他汀和培門冬酶也有相似作用。182.3 中藥逆轉(zhuǎn)MDR 近年來,從中藥中尋找逆轉(zhuǎn)MDR的活性成分成為一大研究熱點(diǎn)。2.3.1 -欖香烯乳劑 該成分是從中藥莪術(shù)中提取

19、的一種非細(xì)胞毒抗腫瘤藥物,能夠提高機(jī)體的免疫力,無心肝腎器官損害和骨髓抑制等副作用。胡軍等18測定了其對MCF-7/ADM細(xì)胞株對阿霉素耐藥的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果表明,無毒劑量的-欖香烯乳劑(6ug.ml-1)的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2倍,也是通過增加細(xì)胞內(nèi)阿霉素濃度來實(shí)現(xiàn)的。2.3.2 苦參堿 苦參類生物堿廣泛存在于豆科槐屬植物苦參、廣豆根中,主要包括苦參堿和氧化苦參堿。在眾多的苦參類生物堿中以苦參堿的抗腫瘤活性最高。陳鴻雁等19研究了苦參堿與6種抗腫瘤藥聯(lián)用對KBV200耐藥細(xì)胞株P(guān)-gp表達(dá)的影響。結(jié)果表明,苦參堿與長春新堿聯(lián)用后P-gp的表達(dá)從46.09%下降到10.49%,與阿霉素聯(lián)用后從32.09%

20、下降到8.89%,而與平陽霉素5-氟尿嘧啶環(huán)磷酰胺順鉑分別聯(lián)用后,P-gp表達(dá)無明顯變化.李宏建等20觀察了苦參堿對模擬臨床化療CFP方案誘導(dǎo)的小鼠S180腫瘤細(xì)胞獲得性多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用,結(jié)果亦證實(shí)了苦參堿對P-gp表達(dá)的抑制作用,同時(shí)能增加細(xì)胞凋亡因子Fas和Trail的表達(dá),降低細(xì)胞黏附因子CD54的表達(dá)。2.3.3 漢防己甲素和蝙蝠葛堿 二者均是漢防己的主要有效成分,屬異喹啉生物堿,是一種弱鈣通道阻滯劑,其耐藥逆轉(zhuǎn)機(jī)理與維拉帕米相似.漢防己甲素是報(bào)道得最多的中藥單體逆轉(zhuǎn)劑21,22。2.3.4 丹參酮 丹參酮是丹參的主要化學(xué)成分,一直應(yīng)用于心血管疾病的治療,副作用低。丹參酮也有鈣離子拮

21、抗效應(yīng),逆轉(zhuǎn)MDR機(jī)制也是減少藥物被P-gp外排。劉長劍等23對比了丹參酮和微乳丹參酮對人白血病耐藥細(xì)胞株K562/ADM的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)效果。結(jié)果表明,2者均能降低ADM的IC50值,提高細(xì)胞凋亡率,微乳丹參酮的作用更顯著。微乳作為載體使藥物更易到達(dá)靶細(xì)胞.作者同時(shí)測定了bcl-2的表達(dá)水平,結(jié)果丹參酮、空白微乳、微乳丹參酮均能抑制bcl-2的表達(dá),但以后者作用最強(qiáng)。2.3.5 茶多酚與川芎嗪 茶多酚是從茶葉中提取的多酚類化合物,主含的單體成分為表兒茶素表沒食子兒茶素。粱剛等24探討這兩種成分體外逆轉(zhuǎn)人肝癌耐藥細(xì)胞株BERL-7404/ADM對ADM耐藥的作用。結(jié)果二者ADM的IC50由 36

22、mg.l-1分別下降至2.3mg.l-1和1.9mg.l-1,并使mdr1的表達(dá)與對照組相比分別下降27.6%及41.3%,表沒食子兒茶素作用更顯著。川芎嗪則是從川芎根莖中分離提純的生物堿之一，廣泛用于治療心腦血管疾病，早年即有它可部分糾正ADM對小鼠腹水癌的耐藥性報(bào)道,近年解霞等25進(jìn)一步證實(shí)了它可逆轉(zhuǎn)人乳腺癌MCF-7/ADM對ADM的耐藥，亦是通過抑制P-gp的表達(dá)發(fā)揮作用。2.3.6 單位中藥 槐耳顆粒為國家中藥一類新藥，本身有良好的促進(jìn)凋亡和免疫增強(qiáng)作用。張玉寶等的研究證明它能逆轉(zhuǎn)人乳腺癌MCF-7/ADM對ADM的耐藥作用，降低ADM的IC50值，增加胞內(nèi)ADM濃度，使耐藥細(xì)胞株的

23、mdr1表達(dá)水平下調(diào)。李秀榮等27報(bào)道了中藥漏蘆抽提劑逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR及誘導(dǎo)凋亡的作用：阿霉素與其合用增加人乳腺癌MCF-7/ADM的被殺傷率，使細(xì)胞停滯于G2-M期，6小時(shí)細(xì)胞死亡率是單用ADM的1.72倍，與維拉帕米相似；與單用相比，P-gp、bcl-2、端粒酶均顯著降低。此外，雅膽子油乳、姜黃素、雄黃、人參皂苷以及一些中藥復(fù)方等也都被證實(shí)有逆轉(zhuǎn)MDR作用。2.4 免疫逆轉(zhuǎn)MDR2.4.1 抗體逆轉(zhuǎn)MDR 主要有：針對P-gp的抗體：這類抗體均識(shí)別P-gp膜外表位，且不同抗體逆轉(zhuǎn)的耐受藥物不同，同時(shí)抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)也參與了逆轉(zhuǎn)。如用MRK-16修飾的阿霉素免疫脂質(zhì)體在6小時(shí)后使非小細(xì)胞肺癌

24、SPC-A1/TAX胞內(nèi)阿霉素濃度增加17.34倍28。另一P-gp單抗JSB-1對人腎癌具有明顯的調(diào)節(jié)增敏作用29。APO-1單抗：Fas抗原是存在于細(xì)胞膜表面的糖蛋白，又稱APO-1抗原，屬于TNF受體超家族?？笰PO-1抗體與惡性腫瘤細(xì)胞膜表面APO-1結(jié)合，可觸發(fā)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。對于APO-1抗原低表達(dá)或無表達(dá)的MDR腫瘤，可通過構(gòu)建Fas抗原表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染到這些細(xì)胞中，促使Fas抗原高表達(dá)后即可應(yīng)用APO-1單抗觸發(fā)凋亡30。2.4.2 細(xì)胞因子逆轉(zhuǎn)MDR 機(jī)體免疫系統(tǒng)中許多細(xì)胞因子，如TNF、IL-2、INF等可降低mdr1編碼的P-gp的表達(dá)水平，增加細(xì)胞對MDR相關(guān)藥物如阿霉素

25、、長春新堿等的敏感性，說明這些細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的MDR31。2.5 反義寡聚脫氧核糖核酸（AOD）逆轉(zhuǎn)MDR 利用AOD逆轉(zhuǎn)MDR成為近年來研究的熱門。AOD可通過人工設(shè)計(jì)得到，可以與靶RNA如mdr1的RNA互補(bǔ)結(jié)合，干擾mRNA翻譯從而減少P-gp等的合成。但是轉(zhuǎn)錄是一個(gè)連續(xù)的過程，隨著新的mRNA不斷生成，則需要大量的AOD來阻斷持續(xù)發(fā)生的mRNA翻譯，這使得AOD在臨床廣泛應(yīng)用受到限制。Labroile等32設(shè)計(jì)了一種27-mer的AOD，其可與mdr1基因結(jié)合形成三螺旋結(jié)構(gòu)，從而大輻減少了AOD的用量。2.6 其他 核酶逆轉(zhuǎn)MDR：核酶具有核苷酸內(nèi)切酶的活性，能

26、專一性地切割靶酶RNA，抑制其基因表達(dá)，終止P-gp合成。對于抗mdr1核酶基因不足的腫瘤細(xì)胞，可以采用人工轉(zhuǎn)染的方法來恢復(fù)瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性33,34。植入促凋亡基因：如野生型P53能誘導(dǎo)DNA受損的細(xì)胞凋亡，國內(nèi)已有以腺病毒為載體的P53基因上市（商品名：今又生），將其注入瘤區(qū)，增加鼻咽癌、卵巢癌對放、化療的敏感性。此外，核糖核酸干擾技術(shù)、將耐藥基因轉(zhuǎn)染至造血干細(xì)胞以便耐受高劑量化療藥物從而間接解決MDR等也都在研究中。結(jié)語 腫瘤多藥耐藥的機(jī)制十分復(fù)雜，有些機(jī)制尚不清楚，多重MDR是腫瘤多藥耐藥的主要形式。目前在研的逆轉(zhuǎn)劑種類繁多，大多是針對P糖蛋白發(fā)揮作用。但或因毒副作用大，或因機(jī)

27、理不清晰，或因價(jià)格昂貴等多種原因，要過渡到臨床尚需做大量的工作。中藥逆轉(zhuǎn)劑關(guān)注較多，有些已在臨床廣泛使用，但作用靶點(diǎn)較為單一，尚無系統(tǒng)的理論總結(jié)。相信隨著人們對腫瘤分子生物學(xué)機(jī)制認(rèn)識(shí)的不斷深入，基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，人類定能尋找到安全、高效的MDR逆轉(zhuǎn)劑。參考文獻(xiàn)1 王治偉，楊強(qiáng)，趙渝.腫瘤多藥耐藥的生化及分子機(jī)制.重慶醫(yī)學(xué) 2008，37（5）：5432 Zuylen L , Nooter K, Sparreboom A et al. Development of multidrug-resistance convertors: sense or nonsense j Investigat

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