模型及實(shí)驗(yàn)儀器耗材

1、ELISA 法檢測(cè)大鼠血清中 FSH、LH 、 E2、 T 水平1.1實(shí)驗(yàn)藥品試劑生理鹽水，批號(hào)：20130116，山東康寧藥業(yè)有限公司；無(wú)水乙醇，批號(hào)：32061，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司；水合氯醛，批號(hào)：30037517，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；FSHELISA試劑盒，武漢俊泰生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：E11122904LHELISA試劑盒，武漢俊泰生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：E11100806E2ELISA 試劑盒，武漢俊泰生物技術(shù)有限公司， 批號(hào)： E11100804、TELISA 試劑盒， 武漢俊泰生物技術(shù)有限公司，批號(hào)： E111008021 .2實(shí)驗(yàn)儀器EP管，型號(hào)：1.5m

2、l,美國(guó)Axygen公司；玻璃勻漿器，型號(hào)：1ml，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；移液器，型號(hào)：0.1-2.5 卩 L0.5-0 卩 L20-200 卩 L,100-1000 卩 L,美 國(guó) Thermo 公司；電子天平，型號(hào)：PL203,上海梅特勒一一托利多儀器有限公司； 高壓蒸汽滅菌鍋，型號(hào)：YXQ-LS-75G，常州諾基儀器有限公司； 全自動(dòng)干燥箱，型號(hào)：DHG-9640C,杭州藍(lán)天公司；超低溫冰箱，型號(hào)：T11-86-340-LA，北京天地精儀科技有限公司； 低溫高速離心機(jī)，型號(hào)：CR21GH,日本日立公司；多功能酶標(biāo)儀，型號(hào)：spectraMAXM5,上海美谷分子儀器有限 公司；Real

3、-TimePCR WesternBolt檢測(cè)TGF-目受體蛋白表達(dá)水平 1.實(shí)驗(yàn)藥品試劑PCR所用實(shí)驗(yàn)用品：生理鹽水，批號(hào)： 20130116，山東康寧藥業(yè)有限公司； 無(wú)水乙醇，批號(hào)： 32061，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司； 水合氯醛，批號(hào)： 30037517，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； DEPC，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；TRIzol，批號(hào)：15596-026 美國(guó) Lifetechnologies公司；氯仿，批號(hào)： 100068608，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；異丙醇，批號(hào)： 32064，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，批號(hào)：RR047A,寶生物工程（大連）有限公司

4、（大連TaKaRa公司）；SYBRPremixExTagM，批號(hào)：RR420A 寶生物工程（大連）有限公 司（大連TaKaRa公司）；Westernbolt所用實(shí)驗(yàn)用品：生理鹽水，批號(hào)： 20130116，山東康寧藥業(yè)有限公司； 無(wú)水乙醇，批號(hào)： 32061，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司； 水合氯醛，批號(hào)： 30037517，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； 脫脂奶粉，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；Tween-20,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；考馬斯亮藍(lán)快速染色液，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；麗春紅染液，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；氯化鈉，批號(hào)： 1266-2006，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司Glyc

5、ine,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；TrisBase武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；SDS,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；二甲苯，批號(hào)： 10023428，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；HCl，批號(hào)：81013,中國(guó)平煤神馬集團(tuán)開封東大化工有限公司；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒，批號(hào)：P0012A,上海碧云天生物技 術(shù)有限公司；TEMED，批號(hào)：ST728上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Western 一抗二抗去除液（強(qiáng)堿性），批號(hào)：P0025,上海碧云天生物技術(shù)有限公司；WesternBlot超敏發(fā)光液，批號(hào)：P1010,北京普利萊基因技術(shù)有 限公司；RIPA裂解液，批號(hào)：P0013,上海碧云天生物技術(shù)有

6、限公司； PMSF，批號(hào)：329-98-6北京中生瑞泰科技有限公司；BCA試劑盒，批號(hào)：P0010S上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Prestainedproteinloadingbuffer 批號(hào)：26617 美國(guó) Thermo 公司;PrestainedproteinMWmarker 批號(hào)：26616 美國(guó) Thermo 公司；5X Load in gbuffer，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；硝酸纖維素膜，批號(hào)：T328591,美國(guó)Lifetechnologies公司； 一抗：GAPDH抗體；TGF- 抗體美國(guó)millipore公司）二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠抗羊二抗（武漢科瑞生物技 術(shù)有

7、限公司）；大鼠憐actin引物、TGF- p1引物。英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公 司合成并經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)。引物序列見(jiàn)表1。表1引物序列目的基因引物序列產(chǎn)物長(zhǎng)度3-actinForward: 5-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC- 3'171bpReverse： 5 -ATGGAGCCACCGATCCACA- 3'TGF- 3 1Forward: 5-CAGACTCA TGATGACAGAGG- 3'381bpReverse： 5 -GAGATGTACAGGATCTTCCC- 3 '1.3實(shí)驗(yàn)儀器PCR所需儀器EP管，型號(hào):1.5ml,美國(guó) Axyge

8、n公司；玻璃勻漿器，型號(hào)：1ml,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；移液器，型號(hào)：0.1-2.5 卩 L0.5-0 卩 L20-200 卩 L,100-1000 卩 L,美 國(guó) Thermo公司；去酶PCR管，型號(hào)：0.2ml,美國(guó)Axygen公司；八聯(lián)管、蓋，型號(hào)：0.2ml,美國(guó)Axygen公司；電子天平，型號(hào)：PL203,上海梅特勒一一托利多儀器有限公司； 高壓蒸汽滅菌鍋，型號(hào)：YXQ-LS-75G，常州諾基儀器有限公司; 全自動(dòng)干燥箱，型號(hào)：DHG-9640C，杭州藍(lán)天公司；超低溫冰箱，型號(hào)：T11-86-340-LA，北京天地精儀科技有限公司; 低溫高速離心機(jī)，型號(hào)：CR21GH,日本日立公

9、司；核酸蛋白分析儀，型號(hào)：DU800型，美國(guó)Beckman公司；RealTime-PCR儀，型號(hào)：CFX96，美國(guó) Bio-Rad公司； 梯度PCR儀，型號(hào)：T100,美國(guó)Bio-Rad公司；Westernbolt實(shí)驗(yàn)儀器純水機(jī)，型號(hào)：E30131,英國(guó)ELGALABWATER 公司；制冰機(jī)，型號(hào)：SD40,廣州市廣紳電器制造有限公司；電子天平，型號(hào)：PL203,上海梅特勒一一托利多儀器有限公司； 高壓蒸汽滅菌鍋，型號(hào)：YXQ-LS-75G，常州諾基儀器有限公司; 全自動(dòng)干燥箱，型號(hào)：DHG-9640C,杭州藍(lán)天公司；全自動(dòng)洗板機(jī)，型號(hào)：1575,美國(guó)BIO-RAD公司；超低溫冰箱，型號(hào)：T1

10、1-86-340-LA，北京天地精儀科技有限公司;臺(tái)式高速離心機(jī)，型號(hào)：TG-16W，長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公 司；手掌型離心機(jī)，型號(hào)：LX-200,海門其林貝爾儀器制造有限公司； 低溫高速離心機(jī)，型號(hào)：CR21GH,日本日立公司；轉(zhuǎn)移脫色搖床，型號(hào)：TS-8型，海門其林貝爾儀器制造有限公司； 滾軸式混合器，型號(hào)：SRT-202海門其林貝爾儀器制造有限公 司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，型號(hào)：HH-2，常州澳華儀器有限公司； 旋渦混合器，型號(hào)：QL-901，海門其林貝爾儀器制造有限公司； 多功能酶標(biāo)儀，型號(hào)：spectraMAXM5,上海美谷分子儀器有限 公司；電腦型倒置熒光顯微鏡，型號(hào)：DFM-60C,

11、上海蔡康光學(xué)儀器有 限公司；激光共聚焦熒光顯微鏡，日本 Olmpus 公司；蛋白電泳儀，美國(guó) Bio-Rad公司；凝膠圖像成像分析儀，美國(guó) Bio-Rad公司；1.4westernbolt實(shí)驗(yàn)用到的溶液配制方法10%SDS-PAGE分離膠(2塊膠)：蒸餾水2.7ml, 10%過(guò)硫銨0.1ml, 1MTris(pH8.8)3.8ml ，10%SDS0.1ml ，30%Acr-Bis(29:1)3.3ml ，TEMED0.004ml。5%SDS-PAGE濃縮膠(2塊膠)：蒸餾水2.1ml, 10%過(guò)硫銨0.03ml, 1MTris(pH6.8)0.38ml ,10%SDS0.03ml,30%Acr

12、-Bis(29:1)0.5ml,TEMED0.003ml。10 倍電泳緩沖液：SDS10g TrisBase30g Glycine141.1g 蒸餾水 定容至1000ml,充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，置冰?C保存?zhèn)溆茫褂脮r(shí) 稀釋 10倍。轉(zhuǎn)膜液：Glycine14.4g TrisBase3.03g蒸餾水定容至800ml,充分 攪拌至完全溶解，置冰箱4C保存?zhèn)溆?，使用時(shí)加入200ml甲醇，使 其終濃度為 20%。TBS： TrisBase3g NaCI8g,蒸餾水定容至 800ml，充分?jǐn)嚢柚镣?全溶解，置冰箱4C保存?zhèn)溆?，使用時(shí)用HCI調(diào)pH值至7.4,以蒸餾 水定容至 1000ml。TBST：

13、TBS 力口 0.1%體積 Tween-2QPBS 緩沖液：Na2HPO41.42g KCI0.2g, KH 2PO40.27g NaCI8g, 加入蒸餾水 800ml 充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，?HCl 調(diào) pH 值至 7.4，用 蒸餾水定容至1000ml,高壓蒸汽滅菌，置冰箱4 C保存?zhèn)溆?。Real-TimePCF、WesternBolt檢測(cè)Samd蛋白表達(dá)水平及其磷酸化水平1.實(shí)驗(yàn)藥品試劑PCR所用實(shí)驗(yàn)用品：生理鹽水，批號(hào)：20130116，山東康寧藥業(yè)有限公司;無(wú)水乙醇，批號(hào)：32061，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司;水合氯醛，批號(hào)：30037517，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;DEPC

14、，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司;TRIzol，批號(hào)：15596-026 美國(guó) Lifetechnologies公司；氯仿，批號(hào)： 100068608，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； 異丙醇，批號(hào)： 32064，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，批號(hào)：RR047A,寶生物工程（大連）有限公司（大連TaKaRa公司）；SYBRPremixExTagM，批號(hào)：RR420A 寶生物工程（大連）有限公 司（大連TaKaRa公司）；Westernbolt所用實(shí)驗(yàn)用品：生理鹽水，批號(hào)： 20130116，山東康寧藥業(yè)有限公司； 無(wú)水乙醇，批號(hào)： 32061，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司； 水合氯醛，批

15、號(hào)： 30037517，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； 脫脂奶粉，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；Tween-20,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；考馬斯亮藍(lán)快速染色液，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；麗春紅染液，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；氯化鈉，批號(hào)： 1266-2006，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司Glyc ine,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；TrisBase武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；SDS,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；二甲苯，批號(hào)： 10023428，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；HCl，批號(hào)：81013,中國(guó)平煤神馬集團(tuán)開封東大化工有限公司；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒，批號(hào)：P0012A,上海碧云天生物

16、技 術(shù)有限公司；TEMED，批號(hào)：ST728上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Western 一抗二抗去除液（強(qiáng)堿性），批號(hào)：P0025,上海碧云天生物技術(shù)有限公司；WesternBlot超敏發(fā)光液，批號(hào)：P1010,北京普利萊基因技術(shù)有限公司；RIPA裂解液，批號(hào)：P0013,上海碧云天生物技術(shù)有限公司；PMSF,批號(hào)：329-98-6北京中生瑞泰科技有限公司；BCA試劑盒，批號(hào)：P0010S上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Prestainedproteinloadingbuffer 批號(hào)：26617 美國(guó) Thermo 公司； PrestainedproteinMWmarker 批號(hào)：26616 美

17、國(guó) Thermo 公司；5X Load in gbuffer，武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；硝酸纖維素膜，批號(hào)：T328591,美國(guó)Lifetechnologies公司； 一抗：GAPDH抗體；p-Samd抗體（美國(guó)millipore公司） 二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠抗羊二抗（武漢科瑞生物技 術(shù)有限公司）；大鼠憐actin引物、Samd引物。英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司 合成并經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)。引物序列見(jiàn)表 2。表2引物序列目的基因引物序列產(chǎn)物長(zhǎng)度3-actinForward: 5-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC- 3'171bpReverse： 5 -ATGGAGCC

18、ACCGATCCACA- 3'SamdForward: 5 -CACTGGTTCCGAAAGGGACTC- 3'153bpReverse： 5 -CTGAAGCAAAAA TCGCCACCT- 3 '1.3實(shí)驗(yàn)儀器PCR所需儀器EP管，型號(hào)：1.5ml,美國(guó)Axygen公司；玻璃勻漿器，型號(hào)：1ml,武漢科瑞生物技術(shù)有限公司；移液器，型號(hào)：0.1-2.5 卩 L0.5-0 卩 L20-200 卩 L,100-1000 卩 L,美 國(guó) Thermo公司；去酶PCR管，型號(hào)：0.2ml,美國(guó)Axygen公司；八聯(lián)管、蓋，型號(hào)：0.2ml,美國(guó)Axygen公司；電子天平，型號(hào)

19、：PL203,上海梅特勒一一托利多儀器有限公司；高壓蒸汽滅菌鍋，型號(hào)：YXQ-LS-75G，常州諾基儀器有限公司; 全自動(dòng)干燥箱，型號(hào)：DHG-9640C,杭州藍(lán)天公司； 超低溫冰箱，型號(hào)：T11-86-340-LA，北京天地精儀科技有限公司； 低溫高速離心機(jī)，型號(hào)：CR21GH,日本日立公司；核酸蛋白分析儀，型號(hào)：DU800型，美國(guó)Beckman公司；RealTime-PCR儀，型號(hào)：CFX96，美國(guó) Bio-Rad公司； 梯度PCR儀，型號(hào)：T100,美國(guó)Bio-Rad公司；Westernbolt實(shí)驗(yàn)儀器純水機(jī)，型號(hào)：E30131,英國(guó)ELGALABWATER 公司；制冰機(jī)，型號(hào)：SD40

20、,廣州市廣紳電器制造有限公司；電子天平，型號(hào)：PL203,上海梅特勒一一托利多儀器有限公司； 高壓蒸汽滅菌鍋，型號(hào)：YXQ-LS-75G，常州諾基儀器有限公司; 全自動(dòng)干燥箱，型號(hào)：DHG-9640C,杭州藍(lán)天公司； 全自動(dòng)洗板機(jī)，型號(hào)：1575,美國(guó)BIO-RAD公司； 超低溫冰箱，型號(hào)：T11-86-340-LA，北京天地精儀科技有限公司； 臺(tái)式高速離心機(jī)，型號(hào)：TG-16W，長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公 司；手掌型離心機(jī)，型號(hào)：LX-200,海門其林貝爾儀器制造有限公司； 低溫高速離心機(jī)，型號(hào)：CR21GH,日本日立公司；轉(zhuǎn)移脫色搖床，型號(hào)：TS-8型，海門其林貝爾儀器制造有限公司； 滾軸式

21、混合器，型號(hào)：SRT-202海門其林貝爾儀器制造有限公 司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，型號(hào)：HH-2，常州澳華儀器有限公司；旋渦混合器，型號(hào)：QL-901，海門其林貝爾儀器制造有限公司； 多功能酶標(biāo)儀，型號(hào)：spectraMAXM5,上海美谷分子儀器有限 公司；電腦型倒置熒光顯微鏡，型號(hào)：DFM-60C,上海蔡康光學(xué)儀器有 限公司；激光共聚焦熒光顯微鏡，日本 Olmpus 公司；蛋白電泳儀，美國(guó) Bio-Rad公司；凝膠圖像成像分析儀，美國(guó) Bio-Rad公司；1.4westernbolt實(shí)驗(yàn)用到的溶液配制方法10%SDS-PAGE分離膠(2塊膠)：蒸餾水2.7ml, 10%過(guò)硫銨0.1ml, 1MTr

22、is(pH8.8)3.8ml ，10%SDS0.1ml ，30%Acr-Bis(29:1)3.3ml ，TEMED0.004ml。5%SDS-PAGE濃縮膠(2塊膠)：蒸餾水2.1ml, 10%過(guò)硫銨0.03ml, 1MTris(pH6.8)0.38ml ,10%SDS0.03ml,30%Acr-Bis(29:1)0.5ml,TEMED0.003ml。10 倍電泳緩沖液：SDS10g TrisBase30g Glycine141.1g 蒸餾水 定容至1000ml,充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，置冰?C保存?zhèn)溆?，使用時(shí) 稀釋 10倍。轉(zhuǎn)膜液：Glycine14.4g TrisBase3.03g蒸餾水定容

23、至800ml,充分 攪拌至完全溶解，置冰箱4C保存?zhèn)溆?，使用時(shí)加入200ml甲醇，使 其終濃度為 20%。TBS: TrisBase3g NaCI8g,蒸餾水定容至 800ml，充分?jǐn)嚢柚镣?全溶解，置冰箱4C保存?zhèn)溆?，使用時(shí)用HCI調(diào)pH值至7.4,以蒸餾 水定容至 1000ml。TBST: TBS 力口 0.1%體積 Tween-2QPBS 緩沖液： Na2HPO41.42g, KCl0.2g, KH2PO40.27g, NaCl8g, 加入蒸餾水 800ml 充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?用 HCl 調(diào) pH 值至 7.4,用 蒸餾水定容至1000ml,高壓蒸汽滅菌，置冰箱4 C保存?zhèn)溆谩?.多囊卵巢綜合征動(dòng)物模型選擇多囊卵巢綜合征（polycysticovarysyndromePCO是婦科常見(jiàn)的生 殖功能障礙性疾病 ,主要表現(xiàn)為卵巢的雄激素過(guò)多所造成的閉經(jīng)、多 毛、肥胖及無(wú)排卵，其發(fā)生率占生育年齡婦女的5%10%1。目前多囊 卵巢綜合征動(dòng)物模型主要有芳香酶抑制劑造模法、 雄激素造模法、 雌 激素造模法、孕激素聯(lián)合 HC