紫外-可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn)ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 紫外可見分光光度計(jì)紫外可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn)的性能檢驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法驗(yàn)方法 2、學(xué)會(huì)、學(xué)會(huì)UV1100型紫外可見分光光度計(jì)型紫外可見分光光度計(jì)的運(yùn)用方法的運(yùn)用方法 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)展性能檢查，以保證測(cè)定對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)展性能檢查，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。結(jié)果的準(zhǔn)確。三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀型紫外可見分光光度儀 石英比色皿一對(duì)石英比色皿一對(duì) 擦鏡紙擦鏡紙 蒸餾水蒸餾水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液溶液 0.002mol/mol

2、KMnO4溶液溶液 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1、比色皿的配對(duì)性、比色皿的配對(duì)性注入注入蒸餾水蒸餾水兩個(gè)比色皿兩個(gè)比色皿分別分別440nm440nm以一個(gè)比色皿以一個(gè)比色皿為空白為空白T1T1100100測(cè)定測(cè)定另一個(gè)比色皿的另一個(gè)比色皿的T2T2T=T1-T2T=T1-T2T0.5%T0.5%T0.5%兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色不配對(duì)，應(yīng)進(jìn)展校正兩個(gè)比色不配對(duì)，應(yīng)進(jìn)展校正 2 2、波長(zhǎng)精度的檢查、波長(zhǎng)精度的檢查以蒸餾水為空白以蒸餾水為空白 測(cè)定測(cè)定KMnO4KMnO4溶液的吸收曲線溶液的吸收曲線假設(shè)測(cè)得的最大吸收波長(zhǎng)在假設(shè)測(cè)得的最大吸收波長(zhǎng)在5255251nm1

3、nm以以內(nèi)內(nèi)闡明闡明儀器波長(zhǎng)精度符合運(yùn)用要求儀器波長(zhǎng)精度符合運(yùn)用要求5008000.40.2(nm)A0 3 3、反復(fù)性的檢查、反復(fù)性的檢查以以0.02mol/L0.02mol/L的的H2SO4H2SO4為空為空白白在在257nm257nm處處同一同一K2Cr2O7K2Cr2O7溶液的溶液的T T，延續(xù)測(cè)定，延續(xù)測(cè)定7 7次次測(cè)定測(cè)定求出極差求出極差 假設(shè)極差假設(shè)極差0.5%0.5%儀器的反復(fù)性符合儀器的反復(fù)性符合運(yùn)用要求運(yùn)用要求 4. 4.吸收值準(zhǔn)確度的檢查吸收值準(zhǔn)確度的檢查235nm235nm、257nm257nm分別測(cè)定分別測(cè)定 K2Cr2O7 K2Cr2O7溶液吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)溶液

4、吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)以以0.02mol/L0.02mol/L的的H2SO4H2SO4為空為空白白(T(T100%100%313nm313nm、350nm350nm與下表規(guī)定的與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較吸收系數(shù)比較 假設(shè)相對(duì)偏向在假設(shè)相對(duì)偏向在1%1%以以內(nèi)內(nèi)闡明闡明儀器符合運(yùn)用要求儀器符合運(yùn)用要求波長(zhǎng)波長(zhǎng)/nm/nm 吸收系數(shù)吸收系數(shù) 235235123.0123.0126.0126.0257257142.8142.8146.2146.231331347.047.050.350.3350350105.5105.5108.5108.5五、思索題五、思索題1、同種比色皿透光度的差別對(duì)測(cè)定有何、同種比

5、色皿透光度的差別對(duì)測(cè)定有何影響？影響？2、檢查分光光度計(jì)的反復(fù)性對(duì)測(cè)定有什、檢查分光光度計(jì)的反復(fù)性對(duì)測(cè)定有什么實(shí)踐意義？么實(shí)踐意義？實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 吸收曲線的測(cè)繪及吸收曲線的測(cè)繪及吸收系數(shù)的測(cè)定吸收系數(shù)的測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法 2、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 1、假設(shè)溶劑固定不變，化合物吸收曲線、假設(shè)溶劑固定不變，化合物吸收曲線所出現(xiàn)的所出現(xiàn)的max、min或或(S)為一定值，且數(shù)為一定值，且數(shù)目也一定，為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。目也一定，為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。 2、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度

6、為、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為1%，液層厚度為液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。時(shí)的吸光度。 即即 1 %11c mAEC三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UVUV11001100型紫外可見分光光度計(jì)型紫外可見分光光度計(jì) 石英比色皿一對(duì)石英比色皿一對(duì) 95%95%乙醇乙醇A.RA.R 0.005%0.005%丹皮酚對(duì)照品溶液丹皮酚對(duì)照品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟丹皮酚對(duì)照品丹皮酚對(duì)照品10mg10mg9595乙醇溶解乙醇溶解定容至定容至10ml10ml搖勻搖勻精細(xì)汲取精細(xì)汲取5ml5ml置置100ml100ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容作為母液備用作為母液備用母液中丹皮酚的

7、含量為母液中丹皮酚的含量為0.005%0.005%1 1、吸收曲線的測(cè)繪、吸收曲線的測(cè)繪精細(xì)汲取母液精細(xì)汲取母液1ml1ml置置10ml10ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容以以9595乙醇為空白，進(jìn)展光譜掃描，得到吸收曲線圖。乙醇為空白，進(jìn)展光譜掃描，得到吸收曲線圖。2 2、吸收曲線的測(cè)繪、吸收曲線的測(cè)繪 利用上述溶液，在利用上述溶液，在274nm274nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定其吸光度并計(jì)算波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定其吸光度并計(jì)算百分吸收系數(shù)。百分吸收系數(shù)。實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 分光光度法測(cè)定槐花中分光光度法測(cè)定槐花中總黃酮的含量總黃酮的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握用規(guī)范曲線法測(cè)定槐花中總黃、掌握用規(guī)范曲線法測(cè)定

8、槐花中總黃酮含量的方法酮含量的方法 2、穩(wěn)定紫外可見分光光度計(jì)的操作、穩(wěn)定紫外可見分光光度計(jì)的操作方法方法二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等構(gòu)黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等構(gòu)造可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有造可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分析。色配合物，可用于定量分析。三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀型紫外可見分光光度儀 石英比色皿一對(duì)石英比色皿一對(duì) 5% NaNO2溶液溶液 10% Al(NO3)3溶液溶液 NaOH試液試液 蘆丁對(duì)照品蘆丁對(duì)照品 槐花藥材槐花藥材 其他試劑均為分析純；其他試劑均為分析純；

9、 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1 1、對(duì)照品溶液的制備、對(duì)照品溶液的制備加甲醇，水浴使溶解加甲醇，水浴使溶解蘆丁對(duì)照品蘆丁對(duì)照品50mg50mg置置25ml25ml量瓶中量瓶中放冷，加甲醇至刻度，搖勻放冷，加甲醇至刻度，搖勻精細(xì)汲取精細(xì)汲取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度，搖勻加水至刻度，搖勻即得每即得每1ml1ml中含無水蘆丁中含無水蘆丁0.2mg0.2mg2 2、規(guī)范曲線的制備、規(guī)范曲線的制備精細(xì)量取對(duì)照品溶液精細(xì)量取對(duì)照品溶液0 0、1 1、2 2、3 3、4 4、5ml5ml分別置分別置25ml25ml量瓶中量瓶中各加各加H2OH2O加加5

10、% 5% NaNO2NaNO2 1ml 1ml搖勻搖勻放置放置6min6min10% 10% Al(NO3)3Al(NO3)3 1ml 1ml搖勻搖勻放置放置6min6min加加加加NaOHNaOH試液試液 10ml10ml加水至刻度加水至刻度搖勻，放置搖勻，放置15min15min至至5ml5ml=500nm=500nm以相應(yīng)試劑為空白以相應(yīng)試劑為空白測(cè)定吸光度測(cè)定吸光度A A以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制規(guī)范曲線以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制規(guī)范曲線吸光度吸光度濃度濃度mg/mlmg/ml3 3、供試品溶液的制備、供試品溶液的制備槐花粗粉槐花粗粉1g1g精細(xì)稱定精細(xì)稱定置置索氏

11、提取器中索氏提取器中加加乙醚乙醚加熱回流至加熱回流至提取液無色提取液無色放冷放冷棄乙醚液棄乙醚液加加甲醇甲醇90ml90ml加熱回流至加熱回流至提取液無色提取液無色移至移至100ml100ml量瓶中量瓶中甲醇少量多次洗滌容器甲醇少量多次洗滌容器洗液并入量瓶中洗液并入量瓶中加甲醇至刻度加甲醇至刻度搖勻搖勻精細(xì)汲取精細(xì)汲取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度，搖勻加水至刻度，搖勻即得即得4 4、樣品的測(cè)定、樣品的測(cè)定精細(xì)汲取供試品溶液精細(xì)汲取供試品溶液3ml3ml置置25ml25ml量瓶中量瓶中照規(guī)范曲線制備項(xiàng)下的方法照規(guī)范曲線制備項(xiàng)下的方法自自“加水至加水至5ml5ml

12、起起從規(guī)范曲線上求出供試品溶液中蘆丁的分量，即得從規(guī)范曲線上求出供試品溶液中蘆丁的分量，即得依法測(cè)定吸光度依法測(cè)定吸光度槐花中含總黃酮以無水蘆丁槐花中含總黃酮以無水蘆丁C27H30O16C27H30O16計(jì)，計(jì)，不得少于不得少于8.0%8.0%。五、本卷須知五、本卷須知 1、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色 2、顯色劑參與的順序、參與量和顯色、顯色劑參與的順序、參與量和顯色時(shí)間要正確時(shí)間要正確六、思索題六、思索題 1.分光光度法有哪些影響要素？分光光度法有哪些影響要素？ 2.試述規(guī)范曲線法的優(yōu)點(diǎn)。試述規(guī)范曲線法的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

13、的掌握薄層板的制板方法。掌握薄層板的制板方法。二、儀器與試劑二、儀器與試劑 天平天平0.1g 研缽研缽 玻璃板玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液水溶液 3 蒸餾水蒸餾水 薄層層析用硅膠薄層層析用硅膠GF254青島青島海洋化工廠海洋化工廠三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1. 洗板洗板 選取板面平整的玻璃板，洗選取板面平整的玻璃板，洗凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上，凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上，陰干備用。陰干備用。2勻漿勻漿 將吸附劑將吸附劑1份份3.0g和和水水3份在研缽中向同一方向研磨混合份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。均勻。 3 3鋪制鋪制 將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒

14、至玻璃板的將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，悄然震一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，悄然震動(dòng)，使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置程度臺(tái)上陰干。動(dòng)，使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置程度臺(tái)上陰干。4 4活化活化 將陰干的薄層板至于將陰干的薄層板至于110110烘箱中活化烘箱中活化3030分鐘，置于有枯燥器中分鐘，置于有枯燥器中備用。備用。四、思索題四、思索題 1薄層板的鋪制過程中應(yīng)留意哪些問題？ 實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 薄層色譜定性分薄層色譜定性分析析 五味子的定性鑒別五味子的定性鑒別 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握薄層色譜的定性分析方法。掌握薄層色譜的定性分析方法。

15、2. 熟習(xí)薄層板的點(diǎn)樣方法。熟習(xí)薄層板的點(diǎn)樣方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 中藥五味子中，五味子甲素為其主要有效成分之一，為了更好的進(jìn)展定性鑒別，選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)照藥材進(jìn)展對(duì)照，根據(jù)一樣的組分在一樣的條件下，應(yīng)該有一樣的顏色和比移值來作為定性鑒別的根據(jù)。五味子植株五味子植株五味子藥材五味子藥材三、儀器與試劑三、儀器與試劑 定量毛細(xì)管定量毛細(xì)管 已制備好的薄層板硅膠已制備好的薄層板硅膠GF254 展開缸展開缸 所用試劑均為分析純所用試劑均為分析純 五味子粉末五味子粉末定量毛細(xì)管定量毛細(xì)管雙槽展開缸雙槽展開缸對(duì)對(duì) 照照 品品四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1.供試品液的制

16、備：取五味子粉末供試品液的制備：取五味子粉末1g，加三氯甲烷，加三氯甲烷20ml，加熱回，加熱回流流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄樵尤燃淄?ml使溶解，作為使溶解，作為供試品液。供試品液。2.對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。溶液。3.對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每ml含含1mg的對(duì)照品溶液。的對(duì)照品溶液。 4. 汲取上述三種溶液各汲取上述三種溶液各2l，點(diǎn)于同，點(diǎn)于同一硅膠一硅膠GF254薄層板

17、上，以石油醚薄層板上，以石油醚3060甲酸乙酯甲酸甲酸乙酯甲酸15 5 1的上層溶液為展開劑，的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中，下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯一樣顏色的斑點(diǎn)。置上，顯一樣顏色的斑點(diǎn)。五、思索題五、思索題 1如何抑制薄層展開過程中的邊如何抑制薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的要素有緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的要素有哪些？哪些？ 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握利用高效液相色譜法進(jìn)展定性 及定量分析。 2.穩(wěn)定高效液相色譜儀的運(yùn)用方法。實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分析析中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和含量測(cè)定含量測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)原理 1.采用與知化合物對(duì)照,對(duì)組分進(jìn)展定 性分析。 2.采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)展含量測(cè)定。三、儀器與試劑 L-2000液相色譜儀L-2400紫外檢測(cè)器 C18反相鍵合色譜柱250 mm4.6 mm 微量進(jìn)樣器25l 芍藥苷對(duì)照品；赤芍藥材 其他試劑均為分析純 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 色譜條件 C18反相鍵合色譜柱； 流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸