納米復(fù)合羥基磷灰石（nHA）根管充填材料的應(yīng)用基礎(chǔ)研究

1、納米復(fù)合羥基磷灰石（nHA）根管充填材料的應(yīng)用基礎(chǔ)研究    Take a pain for a pleasure all wise men can.  A man cannot whistle and drink at he same time.  【摘要】  目的 通過對(duì)納米羥基磷灰石復(fù)合根充材料與傳統(tǒng)根管充填材料（充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合制劑）進(jìn)行細(xì)胞毒性、根管密合性及抑菌性的對(duì)比研究，評(píng)價(jià)納米羥基磷灰石復(fù)合材料的細(xì)胞毒性、根管壁密合度以及抑菌作用。材料與方法 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：體外培

2、養(yǎng)成骨細(xì)胞，添加納米羥基磷灰石復(fù)合材料浸提液，并以培養(yǎng)液為陰性對(duì)照組，充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合糊劑為陽性對(duì)照組。根據(jù)ISO標(biāo)準(zhǔn)采用MTT法進(jìn)行體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，測(cè)試不同浸提時(shí)間的材料浸提液與成骨細(xì)胞接觸1、3、5、7天的吸光度值,以評(píng)價(jià)其細(xì)胞毒性。根管密合性實(shí)驗(yàn)：將10顆近期拔除的單根牙隨機(jī)分成2組，每組牙齒按常規(guī)方法進(jìn)行根管預(yù)備()。實(shí)驗(yàn)組為40%納米羥基磷灰石復(fù)合糊劑充填，對(duì)照組為充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合糊劑充填。拍X線片以保證各組中實(shí)驗(yàn)離體牙牙根均完善充填，充分硬固后，進(jìn)行微滲漏試驗(yàn)。改良葡萄糖檢測(cè)微滲漏分析裝置進(jìn)行根管密合度實(shí)驗(yàn)，30天后結(jié)果由葡萄糖定量分析儀測(cè)定。抑菌性

3、實(shí)驗(yàn)：將蘸有營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液的棉拭子反復(fù)擦感染根管，進(jìn)行細(xì)菌接種、分離、鑒別、培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果為變型鏈球菌、金黃色葡萄球菌二種可利用菌種，分別用血培養(yǎng)基、普通培養(yǎng)基分別培養(yǎng)，對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組充填材料進(jìn)行抑菌性實(shí)驗(yàn)，觀察抑菌環(huán)大小，檢測(cè)出每組藥物的抑菌環(huán)直徑，取平均值計(jì)算。結(jié)果 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組無顯著差異（P0.05），實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組有顯著差異（P0.05）。根管密合性試驗(yàn)：對(duì)照組葡萄糖濃度明顯高于實(shí)驗(yàn)組，有顯著性差異（P0.05）(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文 )。抑菌性實(shí)驗(yàn)：各組根充糊劑均有良好抑菌性，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著（P0.05）。結(jié)論 納米羥基磷

4、灰石根充材料體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)陰性，有良好的生物相容性。納米羥基磷灰石復(fù)合根充材料其與根管壁密合度方面明顯優(yōu)于充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合糊劑，并具有良好的抑菌性。 【關(guān)鍵詞】  納米羥基磷灰石 根管充填 細(xì)胞毒性 微滲漏 抑菌性Riches do not always bring happiness.  根管治療術(shù)發(fā)展的總趨勢(shì)之一是研究無致癌傾向的、能夠嚴(yán)密堵塞根管的充填材料。本研究尋找一種新型的根管充填材料，有助于提高根管治療術(shù)的療效，更好地服務(wù)于口腔臨床。The sea refuses no river.&

5、#160; 1  材料和方法1.1  實(shí)驗(yàn)器材  納米羥基磷灰石，由南京愛普瑞納米材料有限公司；碘仿，哈爾濱市東北齒科材料加工廠；聚乙烯醇，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合制劑，上海二醫(yī)張江生物材料有限公司；MTT，美國(guó)GIBCO公司；二甲基亞砜，美國(guó)GIBCO公司；胎小牛血清，美國(guó)Sigma公司；DMEM培養(yǎng)液，美國(guó)Gibco公司；SD大鼠，浙江大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)中心。裂鉆、根管擴(kuò)大針，登士柏牙科有限公司；肉湯培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基（GAM）、需氧培養(yǎng)基（BA）、厭養(yǎng)罐、微量生化管，明新生物技術(shù)研究所；BioRADM

6、odel-550酶聯(lián)免疫酶標(biāo)儀，美國(guó)Sigma公司；二氧化碳培養(yǎng)箱，美國(guó)熱電集團(tuán)；Olympus IX-70倒置相差顯微鏡，日本OLYMPUS公司；超凈工作臺(tái)VS-1300-U，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；S2309A型牙科椅，西北醫(yī)療器械（集團(tuán)）有限公司；ELITYS數(shù)字X光牙片機(jī)，上海復(fù)星醫(yī)療器械有限公司；廣口瓶、粘蠟、1mol/L無菌葡萄糖溶液、2ml瓶無菌蒸餾水裝置、改良葡萄糖滴定微滲漏儀，佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院。1.2  實(shí)驗(yàn)方法A clear conscience is a sure card.  Call no man happy until

7、 he dies.  The peacock has fair feathers, but foul.  When love puts in, friendship is gone.  What youth is used to, age remembers.  Call no man happy until he dies.  1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析  應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)。2  結(jié)果    實(shí)驗(yàn)組

8、和陰性對(duì)照組細(xì)胞毒性無顯著性差異（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組有顯著差異（P0.05）,見表1。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組根管密合度之間有顯著性差異（P0.05）,見表2。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組抑菌試驗(yàn)之間無顯著性差異（P0.05）見表3、表4。表1  對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組OD值（略）表2  根充材料葡萄糖滲出量組別葡萄糖濃度 （略）表3  金黃色葡萄球菌抑菌環(huán)直徑（略）  表4  變形鏈球菌抑菌環(huán)直徑（略）3  討論3.1  細(xì)胞毒性研究  納米羥基磷灰石

9、微結(jié)構(gòu)類似于天然骨基質(zhì),可提高材料的生物活性、利用度和生物相容性，可提供適宜的環(huán)境促進(jìn)膠原和礦物的沉積以及成骨細(xì)胞的黏附，納米羥基磷灰石提供了一個(gè)更適合骨形成細(xì)胞生長(zhǎng)的界面從而促進(jìn)與骨的結(jié)合1。充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合制劑封閉劑導(dǎo)致根尖應(yīng)急炎癥反應(yīng)，這可能是從材料中游離出的酚、醛2與組織液接觸導(dǎo)致了持續(xù)的炎癥反應(yīng)，會(huì)在短時(shí)間內(nèi)釋放大量的酚和醛:一方面酚通過抑制前列腺紊和白細(xì)胞介素的合成使尖周炎癥緩解另一方面酚可抑制尖周神經(jīng)的活性,影響細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，低濃度的酚能激活抑制性T細(xì)胞,高濃度的油酚卻殺傷該細(xì)胞而對(duì)尖周組織產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，但是硬固后毒性降低。  

10、0; MTT比色法可以準(zhǔn)確、快速、靈敏地反映細(xì)胞增殖程度和細(xì)胞毒性程度3，因此MTT比色法用于評(píng)價(jià)材料細(xì)胞毒性的常用實(shí)驗(yàn)方法4。將細(xì)胞增殖度法與細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察相結(jié)合，可以更加有效地評(píng)價(jià)材料的細(xì)胞毒性，細(xì)胞毒性與被測(cè)材料的量尤其是表面積有關(guān)5。每孔所選用的細(xì)胞數(shù)量原則上應(yīng)以避免引起細(xì)胞融合為宜6。本實(shí)驗(yàn)通過吸光度值檢測(cè)，反映材料對(duì)細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組及陰性對(duì)照組細(xì)胞毒性無顯著性差異,實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照有顯著差異，說明實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞毒性小，生物相容性良好，表明實(shí)驗(yàn)組符合生物體應(yīng)用的基本要求，可以進(jìn)行活體組織的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。  3.2  根管密合度研究&

11、#160; 理想的根充材料應(yīng)當(dāng)具有優(yōu)良的封閉性性，能夠嚴(yán)密封閉根尖孔。如果封閉性能不良會(huì)引起根管充填不嚴(yán)密而造成微滲漏現(xiàn)象，導(dǎo)致根管內(nèi)的細(xì)菌再感染，最終可導(dǎo)致根管治療失敗。20nm羥基磷灰石顆粒，與牙齒硬組織相似，比一般的生物體內(nèi)的細(xì)胞都小，提高了韌性和力學(xué)性能，增強(qiáng)了流動(dòng)性，采用的納米羥基磷灰石顆粒可以滲透至牙本質(zhì)深部，而形成較好的封閉性能。對(duì)照組可溶解性發(fā)生在根管內(nèi)，根尖充填中對(duì)照組的消失使根尖受腐蝕而密合度降低。What youth is used to, age remembers.  3.3  抑菌性研究  根管治療是當(dāng)前國(guó)

12、內(nèi)外治療感染根管的主要方法，遺留在根管系統(tǒng)中的細(xì)菌和殘余牙髓組織等可能成為根管治療失敗的主要原因。根充糊劑是否具有良好的抑菌作用成為重要因素，患牙根管內(nèi)以厭氧菌為主的混合菌感染7，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組具有較強(qiáng)的抑菌性，碘仿起到了防腐殺菌的主要作用。碘仿是一種良好的消毒劑和防腐劑，具有很強(qiáng)的殺菌和局部抗感染能力，與組織親和力強(qiáng)，且對(duì)組織刺激性小。碘仿遇到組織液或細(xì)菌產(chǎn)物時(shí)可緩慢分解釋放游離碘，與菌體蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)合使其變性，使細(xì)菌產(chǎn)生氧化，起到殺菌作用，尤其對(duì)厭氧菌的殺滅作用更強(qiáng)，從而有效地消除再感染，碘仿還對(duì)吸收根管內(nèi)滲出物，促進(jìn)根尖病灶的吸收，減少滲出也有一定的改善作用。納米材料具有較大

13、的表面積，對(duì)細(xì)菌具有高吸附力，大量吸附與細(xì)菌代謝相關(guān)的酶，從而干擾細(xì)菌的代謝8。羥基磷灰石本身為堿性，不利于細(xì)菌生長(zhǎng)。對(duì)照組發(fā)生在根管內(nèi)的溶解，單獨(dú)使用充填根管會(huì)使根尖再受污染。4  結(jié)論    （1）納米羥基磷灰石復(fù)合根管充填劑有很好的安全性和良好的生物相容性，不會(huì)干擾生物細(xì)胞的正常功能。（2）納米羥基磷灰石根充糊劑的根管密合度優(yōu)于傳統(tǒng)的充填用復(fù)方麝香草酚散甲醛甲酚復(fù)合制劑。（3）納米羥基磷灰石根充糊劑具有良好的抑菌性。可作為根管充填材料，有良好的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】   劉 泉,莫安春,黃

14、 文.納米羥基磷灰石顆粒與成骨細(xì)胞相容性的研究J. 實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2007,8(11):47.2 農(nóng) 晨,沈澄波. 乳牙根管充填材料的研究進(jìn)展J.右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005,（2）:236238. 3 李國(guó)華,龔振宇,于淑湘,等. 3Y- TZP 全瓷材料體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)(MTT法)J. 中國(guó)美容醫(yī)學(xué),2008 ,17(3):401403.4 Thonemann B, Schmalz G, Hiller KA,&#

15、160;et al . Responses of L929 mouse fibroblasts, primary and immortalized bovine dental papilla-de-rived cell lines to dental resin componentsJ. Dent Mater,2002,18(4):318323.5 Meryon SD

16、.The influence of surface area on the in vitro cyto -toxicity of a range of dental materialsJ.J Biomed Mat Res,1987,21:11791186.6 Rupprecht RD, Horning CM, Towle HJ. A

17、60;clinical evaluation of hydroxyapatite cement in the treatment of Classfurcation defectsJ. J Periodontol, 2001,72(10): 14431450.7 Lai CC,Huang FM,Chan Y,et al.Antibacterial Effects of Resinous Retrograde