蒙藥地格達(dá)-4味湯對小鼠化學(xué)性肝損傷的實驗研究

1、蒙藥地格達(dá)-4味湯對小鼠化學(xué)性肝損傷的實驗研究【摘要】 目的觀察地格達(dá)-4味湯對D-半乳糖胺(D-GlaN)、硫代乙酰胺(TAA)所致小鼠肝損傷的防治作用。方法以護肝片作陽性對照,用不同肝毒劑造成小鼠急性肝損傷模型,分別測定動物血清相關(guān)指標(biāo),用t檢驗法比較各組間差異。結(jié)果地格達(dá)-4味湯組可降低因D-GlaN所致肝損傷小鼠的ALT及AST (P0.05)；明顯降低因TAA所致肝損傷小鼠的ALT及AST (P0.01)。模型組肝組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為碎片狀壞死；護肝片組可見散在點狀及小碎片狀壞死；地格達(dá)-4味湯組可見散在點狀壞死，有炎細(xì)胞浸潤。結(jié)論地格達(dá)-4味湯對以上不同肝損傷模型有一定的防治作用,

2、本研究為該藥的功效及應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】 地格達(dá)-4味湯; D-GlaN; TAA; 急性肝損傷Abstract：ObjectiveTo observe the protective and treatment action of Digeda-4 powder for D-GlaN and liver lesion of mice induced by TAA.MethodsPositively controlled with Huganpian, the above-noted liver-toxic agents were administered to make acute

3、 liver lesion of mice to measure the relative indices of animal serum.Method of t-test was used to check the difference between the groups.ResultsDigeda-4 powder decreased the serum ALT and AST of liver lesion mice induced by D-GlaN(P0.05);and obviosly lowered the the serum ALT and AST of liver lesi

4、on micen induced by TAA(P0.01). The change of hepatic tissues in model groups showed the piecemeal necrosis;the hepatic tissues in positive control groups showed scattered punctiform and dimin piecemeal necrosis;the hepatic tissues in Digeda-4 powder groups showed scattered punctiform and dimin piec

5、emeal necrosis;also it was infiltrated phlegmonosis cell.ConclusionDigeda-4 powder has protective and treatment action on the above mentioned different liver lesion models to some extent.The test is likely to provide the experimental basis for the effect and application of this herb.Key words：Digeda

6、-4 powder ; D-GlaN; TAA; Acute Liver Lesion 地格達(dá)-4味湯（又叫肋柱花四味湯）是蒙醫(yī)常用方劑之一。本復(fù)方由肋柱花、瞿麥等蒙藥材組成, 具有清血熱、分解精華與糟粕等功效。主要用于紊亂血熱癥，血熱相搏，肝膽濕熱，咽喉腫痛，口渴干燥等多種病證1。該實驗主要觀察了地格達(dá)-4味湯對D-GlaN和TAA所致肝損傷的保肝降酶作用。1 材料1.1 動物昆明小鼠,體質(zhì)量1822 g,雌雄各半。合格證書：SCXK(遼)2003-0016，由沈陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。1.2 藥品及儀器地格達(dá)-4味湯，內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院內(nèi)蒙古自治區(qū)教育廳重點實驗室提供。D-半乳糖胺

7、（D-GlaN），SIGMa公司，批號：58461。硫代乙酰胺（TAA），中國醫(yī)藥集團上海化學(xué)試劑公司，批號：458666。天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)：中生北控生物科技股份有限公司，批號：080120。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司，批號：080122。全自動生化儀(PRONTO-E型號),離心機(LD4-40),精密電子天平(BS210S型)。2 方法2.1 地格達(dá)-4味湯對D-GlaN所致小鼠急性肝損傷的影響2取小鼠48只，隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組、地格達(dá)-4味湯組等4組，每組12只。正常對照組和模型組給予0.9%生理鹽水20 ml/kg灌

8、胃；陽性對照組給予護肝片0.6 gkg-1灌胃；地格達(dá)-4味湯組給予地格達(dá)-4味湯4.3 gkg-1灌胃，1次/d，連續(xù)1周。于末次給藥后1h，除空白組外，其余3組小鼠均腹腔注射D-GlaN 800 mgkg-1之后禁食不禁水，24 h后斷頭處死動物，2 500 rmin-1離心10 min,取血清測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）。取肝大葉相同部位組織，用10 福爾馬林固定，切片，HE染色，光鏡觀察組織變化。 2.2 地格達(dá)-4味湯對TAA所致小鼠急性肝損傷的影響3取小鼠48只，隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組、地格達(dá)-4味湯組等4組，每組12只。正常對照組和

9、模型組給予0.9%生理鹽水20 ml/kg灌胃；陽性對照組給予護肝片0.6 gkg-1灌胃；地格達(dá)-4味湯組給予地格達(dá)-4味湯4.3 gkg-1灌胃，1次/d，連續(xù)1周。于末次給藥后1h，除空白組外，其余3組小鼠均腹腔注射TAA 80 mgkg-1之后禁食不禁水，24 h后斷頭處死動物，2 500 rmin-1離心10 min,取血清測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）。取肝大葉相同部位組織，用10 福爾馬林固定，切片，HE染色，光鏡觀察組織變化。2.3 統(tǒng)計學(xué)處理各組數(shù)據(jù)均用SPSS10.0統(tǒng)計軟件做統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果以s表示,應(yīng)用兩樣本均數(shù)的t檢驗判定其差異,以P0.

10、05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。3 結(jié)果3.1 地格達(dá)-4味湯對D-GlaN所致小鼠急性肝損傷血清酶變化的影響結(jié)果見表1。表1 地格達(dá)-4味湯對D-半乳糖胺所致小鼠急性肝損傷的影響（略） 由表1結(jié)果可見，地格達(dá)-4味湯組小鼠血清ALT及AST較模型組降低。表明該藥可降低因D-GlaN而造成的肝損傷升高的血清轉(zhuǎn)氨酶。3.2 地格達(dá)-4味湯對D-GlaN所致小鼠急性肝損傷組織形態(tài)學(xué)改變的影響見圖1，表2。表2 地格達(dá)-4味湯對D-半乳糖胺所致小鼠急性肝損傷組織形態(tài)學(xué)改變的影響只（略） 由組織學(xué)圖1及表2可見，模型組普遍存在肝組織碎片狀或小碎片狀壞死灶，并伴有大量淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤，壞死區(qū)周圍可見肝

11、細(xì)胞脂肪變性和嗜酸性變；護肝片組可見散在點狀及小碎片狀壞死，以被膜下及小葉中央?yún)^(qū)為著，伴有淋巴細(xì)胞，以輕度肝細(xì)胞脂肪變性和水腫為主要改變。地格達(dá)-4味湯組肝組織損傷狀況較輕，可見散在少數(shù)點狀及小碎片狀壞死，有淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤，主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性和水腫。表明地格達(dá)-4味湯對D-GlaN所致肝組織病理損傷具有保護作用。3.3 地格達(dá)-4味湯對TAA所致小鼠急性肝損傷血清酶變化的影響結(jié)果見表3。表3 地格達(dá)-4味湯對硫代乙酰胺（TAA）所致小鼠急性肝損傷的影響（略）由表3結(jié)果可見，地格達(dá)-4味湯組小鼠血清ALT及AST較模型組明顯降低。表明該藥可明顯降低因TAA而造成的肝損傷升高的血清

12、轉(zhuǎn)氨酶。3.4 地格達(dá)-4味湯對TAA所致小鼠急性肝損傷組織形態(tài)學(xué)改變的影響見圖2及表4。表4 地格達(dá)-4味湯對硫代乙酰胺（TAA）所致（略） 由組織學(xué)圖2及表4可見，模型組與正常組比較肝小葉結(jié)構(gòu)不完整，可見肝組織碎片狀壞死灶，并伴有大量淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤，壞死區(qū)周圍可見肝細(xì)胞脂肪變性和嗜酸性變；護肝片組可見散在點狀及小碎片狀壞死，以被膜下及小葉中央?yún)^(qū)為著，伴有淋巴細(xì)胞和少量再生肝細(xì)胞，以輕度肝細(xì)胞脂肪變性和水腫為主要改變。地格達(dá)-4味湯組只見少數(shù)小點狀壞死，內(nèi)有少量淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤，主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性和水腫。表明地格達(dá)-4味湯對TAA所致肝組織病理損傷具有保護作用。4 討

13、論 藥理實驗研究表明,D-半乳糖胺引起的化學(xué)性肝損傷模型,是目前國際上常用的肝炎模型之一,其中毒機制的研究也較為深入。D-半乳糖胺通過引起肝臟的代謝紊亂而導(dǎo)致肝損傷。一般認(rèn)為, D-半乳糖胺與肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸(UDP)結(jié)合而形成(UDP-半乳糖胺復(fù)合物,使尿苷三磷酸(UTP)耗竭,尿苷類化合物環(huán)化不能進行,致使RNA和蛋白質(zhì)合成受阻,質(zhì)膜結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)合成減少,使UDPG-焦磷酸轉(zhuǎn)移酶活性和數(shù)量均下降,引起糖(包括糖原和粘多糖)和磷脂代謝障礙,膜損傷加重, Ca2+內(nèi)流增加,最后細(xì)胞中毒死亡。此模型中,肝細(xì)胞破損后釋放出谷丙和谷草轉(zhuǎn)氨酶,使血清中其二者均升高3。硫代乙酰胺,干擾RNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運過程,影響蛋白質(zhì)的合成。其可能損害肝細(xì)胞膜,致使細(xì)胞的離子環(huán)境破壞,導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死3。 實驗研究表明, 地格達(dá)-4味湯對動物因D-半乳糖胺、硫代乙酰胺所造成的急性肝損傷,有一定的防護作用。該藥可降低D-半乳糖胺、硫代乙酰胺所致肝損傷小鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶。地格達(dá)-4味湯對肝組織損傷壞死、變性有明顯的改善作用。表明地格達(dá)-4味湯對D-半乳糖胺、硫代乙酰胺所致肝組織病理損傷具有保護作用, 實驗結(jié)果與該藥血熱相搏，肝膽熱