實(shí)驗(yàn)12透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白ppt課件

1、全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）北華大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院趙云冬北華大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院趙云冬實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 12 12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C C反響蛋白反響蛋白 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?v掌握：透射比濁法測(cè)定掌握：透射比濁法測(cè)定C反響蛋白反響蛋白CRP原理。原理。v熟習(xí)：透射比濁法測(cè)定熟習(xí)：透射比

2、濁法測(cè)定CRP試劑成分。試劑成分。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 光線(xiàn)經(jīng)過(guò)渾濁介質(zhì)溶液時(shí)，一部分被混濁顆光線(xiàn)經(jīng)過(guò)渾濁介質(zhì)溶液時(shí)，一部分被混濁顆粒吸收，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比，這粒吸收，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比，這種測(cè)定光吸收量的方法稱(chēng)為透射比濁法。種測(cè)定光吸收量的方法稱(chēng)為透射比濁法。 免疫透射比濁法是利用抗原和抗體的特異性免疫透射比濁法是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合構(gòu)成復(fù)合物，經(jīng)過(guò)測(cè)定復(fù)合物構(gòu)成量

3、的多少結(jié)合構(gòu)成復(fù)合物，經(jīng)過(guò)測(cè)定復(fù)合物構(gòu)成量的多少對(duì)抗原或抗體進(jìn)展定量的方法。對(duì)抗原或抗體進(jìn)展定量的方法。 運(yùn)用抗運(yùn)用抗CRP抗體和樣品中的抗體和樣品中的CRP進(jìn)展抗原進(jìn)展抗原-抗抗體反響。反響完成后，用透射比濁法檢測(cè)吸光度體反響。反響完成后，用透射比濁法檢測(cè)吸光度的變化反映的變化反映CRP濃度。濃度。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白試劑與器材試劑與器材 1試劑試劑R1 100 mmol/L Tris緩沖液緩沖液pH7.5； 聚

4、乙二醇；聚乙二醇； 0.95g/L疊氮鈉。疊氮鈉。2試劑試劑R2 100 mmol/L Tris緩沖液緩沖液pH8.0； 羊抗人羊抗人CRP抗血清；抗血清； 0.95g/L疊氮鈉。疊氮鈉。 3儀器儀器 自動(dòng)生化分析儀。自動(dòng)生化分析儀。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白操作步驟操作步驟 按表按表3-5操作操作加入物加入物(l)空白管（空白管（B）測(cè)定管（測(cè)定管（U）血清標(biāo)本血清標(biāo)本15生理鹽水生理鹽水15試劑試劑 250250混合

5、，混合， 375 min，在波長(zhǎng)，在波長(zhǎng)340nm，生理鹽水調(diào)零，生理鹽水調(diào)零，讀各管吸光度讀各管吸光度(A1B，A1U)試劑試劑5050混合，混合， 375 min，在波長(zhǎng)，在波長(zhǎng)340nm，生理鹽水調(diào)零，生理鹽水調(diào)零，讀各管吸光度讀各管吸光度(A2B，A2U)表表3-5 免疫透射比濁法測(cè)定免疫透射比濁法測(cè)定C反響蛋白操作步驟反響蛋白操作步驟全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白計(jì)算計(jì)算 式中式中265/315是進(jìn)展體積校正參數(shù)，

6、是進(jìn)展體積校正參數(shù)，265為參為參與試劑與試劑前體積，前體積，315為參與試劑為參與試劑后體積。后體積。 按照試劑配套規(guī)范品運(yùn)用要求，用按照試劑配套規(guī)范品運(yùn)用要求，用5個(gè)不同個(gè)不同程度的規(guī)范液，并以生理鹽水為空白，經(jīng)校準(zhǔn)程度的規(guī)范液，并以生理鹽水為空白，經(jīng)校準(zhǔn)測(cè)定，儀器自動(dòng)對(duì)規(guī)范品呼應(yīng)量經(jīng)過(guò)適宜的數(shù)測(cè)定，儀器自動(dòng)對(duì)規(guī)范品呼應(yīng)量經(jīng)過(guò)適宜的數(shù)學(xué)模型如學(xué)模型如Logit-Log，擬合成校準(zhǔn)曲線(xiàn)。校準(zhǔn)儀，擬合成校準(zhǔn)曲線(xiàn)。校準(zhǔn)儀器后，儀器直接報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。器后，儀器直接報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。)A315265(A )A315265(AA1B2B1UU2U全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

7、專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白參考范圍參考范圍 新生兒：血清新生兒：血清CRP0.6mg/L；出生后出生后l周至周至l個(gè)月嬰兒：血清個(gè)月嬰兒：血清CRP1.6mg/L；孕婦：血清孕婦：血清CRP47mg/L；成人和兒童：血清成人和兒童：血清CRP0.0688.2mg/L。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白臨床意義臨床意

8、義 CRP是機(jī)體對(duì)炎性刺激或組織損傷發(fā)生的急性是機(jī)體對(duì)炎性刺激或組織損傷發(fā)生的急性時(shí)相反響時(shí)出現(xiàn)的一種急性時(shí)相蛋白。時(shí)相反響時(shí)出現(xiàn)的一種急性時(shí)相蛋白。1各種細(xì)菌感染各種細(xì)菌感染 急性化膿性炎癥、肺炎、心內(nèi)急性化膿性炎癥、肺炎、心內(nèi)膜炎、尿路感染等，風(fēng)濕熱，傳染性單核細(xì)胞性增膜炎、尿路感染等，風(fēng)濕熱，傳染性單核細(xì)胞性增多癥等炎癥性疾病，血清多癥等炎癥性疾病，血清CRP升高。升高。2組織損傷組織損傷 心肌堵塞、外傷、燒傷等，惡性腫心肌堵塞、外傷、燒傷等，惡性腫瘤，風(fēng)濕性疾病，肉芽腫，何杰金氏病，腎移植排瘤，風(fēng)濕性疾病，肉芽腫，何杰金氏病，腎移植排異反響等疾病。異反響等疾病。 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢

9、驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白臨床意義臨床意義 3鑒別診斷鑒別診斷 CRP測(cè)定在鑒別有明顯的炎癥或組測(cè)定在鑒別有明顯的炎癥或組織損傷的疾病與無(wú)炎癥或炎癥極輕的疾病、鑒別細(xì)織損傷的疾病與無(wú)炎癥或炎癥極輕的疾病、鑒別細(xì)菌性或病毒性炎癥時(shí)很有價(jià)值。菌性或病毒性炎癥時(shí)很有價(jià)值。4評(píng)價(jià)病情及療效評(píng)價(jià)病情及療效 CRP升高標(biāo)志病情開(kāi)展，由升高標(biāo)志病情開(kāi)展，由升高變?yōu)橄陆?，?biāo)志病情趨于穩(wěn)定，是評(píng)價(jià)風(fēng)濕熱升高變?yōu)橄陆担瑯?biāo)志病情趨于穩(wěn)定，是評(píng)價(jià)風(fēng)濕熱等疾病病情活動(dòng)

10、性的最正確參數(shù)之一，也是某些疾等疾病病情活動(dòng)性的最正確參數(shù)之一，也是某些疾病治療有無(wú)效果的參考目的。病治療有無(wú)效果的參考目的。5用于器官移植排異反響的檢測(cè)用于器官移植排異反響的檢測(cè) 排異反響時(shí)血排異反響時(shí)血清清CRP程度繼續(xù)升高。程度繼續(xù)升高。 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白本卷須知本卷須知1CRP參考值范圍隨測(cè)定方法、試劑不同而異，參考值范圍隨測(cè)定方法、試劑不同而異，請(qǐng)參照不同試劑盒闡明書(shū)。請(qǐng)參照不同試劑盒闡明書(shū)。2不同的

11、廠(chǎng)家，不同批號(hào)的試劑不能混用。不同的廠(chǎng)家，不同批號(hào)的試劑不能混用。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 1測(cè)定測(cè)定CRP的方法：靈敏度較低的免疫分散法、的方法：靈敏度較低的免疫分散法、火箭電泳法、膠乳凝集實(shí)驗(yàn)；高靈敏度、高精細(xì)火箭電泳法、膠乳凝集實(shí)驗(yàn)；高靈敏度、高精細(xì)度的放射免疫、酶免疫、免疫比濁等定量實(shí)驗(yàn)；度的放射免疫、酶免疫、免疫比濁等定量實(shí)驗(yàn)；其他方法如其他方法如ELISA、免疫發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法，雖、免疫發(fā)光法和化

12、學(xué)發(fā)光法，雖然靈敏度和準(zhǔn)確度都較高，但其本錢(qián)也較高。然靈敏度和準(zhǔn)確度都較高，但其本錢(qián)也較高。 免疫比濁法具有試劑穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便、流程短、免疫比濁法具有試劑穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便、流程短、反復(fù)性和準(zhǔn)確性好的優(yōu)勢(shì)，適宜反復(fù)性和準(zhǔn)確性好的優(yōu)勢(shì)，適宜CRP定量測(cè)定。定量測(cè)定。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 2前帶限制前帶限制 CRP濃度濃度2 000mg/L時(shí)無(wú)前帶景象。時(shí)無(wú)前帶景象?？乖c抗體反響時(shí)假設(shè)抗原抗體比例適當(dāng)可構(gòu)成大抗原

13、與抗體反響時(shí)假設(shè)抗原抗體比例適當(dāng)可構(gòu)成大的抗原抗體復(fù)合物，反響體系出現(xiàn)渾濁；當(dāng)待測(cè)物的抗原抗體復(fù)合物，反響體系出現(xiàn)渾濁；當(dāng)待測(cè)物質(zhì)抗原含量過(guò)高時(shí)，抗原與抗體的比例不適宜，質(zhì)抗原含量過(guò)高時(shí)，抗原與抗體的比例不適宜，所構(gòu)成的結(jié)合物少且小，反響體系不出現(xiàn)渾濁稱(chēng)為所構(gòu)成的結(jié)合物少且小，反響體系不出現(xiàn)渾濁稱(chēng)為前帶景象。前帶景象。3特異性特異性/干擾干擾 當(dāng)樣品中當(dāng)樣品中Vc濃度濃度1 704mol/L、膽紅素濃度膽紅素濃度684mol/L、血紅蛋白濃度、血紅蛋白濃度5g/L、甘、甘油三酯濃度油三酯濃度22.6mmol/L時(shí)無(wú)干擾。時(shí)無(wú)干擾。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)

14、規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) （第二版）（第二版）實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12 透射比濁法測(cè)定透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 4靈敏度靈敏度/檢測(cè)限檢測(cè)限 本試劑的檢測(cè)限為本試劑的檢測(cè)限為2mg/L。5超敏超敏C反響蛋白反響蛋白Hs-CRP 是根據(jù)測(cè)定方法是根據(jù)測(cè)定方法更敏感而命名。臨床測(cè)定更敏感而命名。臨床測(cè)定CRP的方法檢測(cè)線(xiàn)性普通的方法檢測(cè)線(xiàn)性普通為為2 mg/L 250mg/L，缺乏較高的靈敏性。膠乳加，缺乏較高的靈敏性。膠乳加強(qiáng)的免疫比濁法等技術(shù)大大提高了分析的靈敏度強(qiáng)的免疫比濁法等技術(shù)大大提高了分析的靈敏度檢測(cè)低限為檢測(cè)低限為0.005 mg/L 0.1mg/L，可檢測(cè)出低，可檢測(cè)出低程度程度0.1mg/L10mg/L的的CRP濃度。濃度。Hs-CRP可可作為一種急性炎癥的標(biāo)志物，而且可區(qū)別在正常范作為一種急性炎癥的標(biāo)志物，而且可區(qū)別在正常范圍內(nèi)低程度炎癥反響中圍內(nèi)低程度炎癥反響中CRP的程度。的程度。全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指