小鼠骨髓微核試驗(yàn) - 中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心網(wǎng)站

1、小鼠骨髓微核試驗(yàn)小鼠骨髓微核試驗(yàn)In vivo Mouse Bone Marrow Cytogenetics Test:Micronucleus Assay中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)系預(yù)防醫(yī)學(xué)系肖勇梅肖勇梅（一）目的（一）目的學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細(xì)胞（學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細(xì)胞（PCE）微）微核測(cè)定方法。核測(cè)定方法。（二）原理（二）原理微核（微核（micronucleus）大小相當(dāng)于細(xì)胞直徑大小相當(dāng)于細(xì)胞直徑1/201/5，呈圓形或杏，呈圓形或杏仁狀，其染色與細(xì)胞核一致，在間期細(xì)胞中仁狀，其染色與細(xì)胞核一致，在間期細(xì)胞中可以出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)。可以出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)。（二）

2、原理（二）原理微核實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)化學(xué)毒物或物理因素誘導(dǎo)產(chǎn)微核實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)化學(xué)毒物或物理因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的生的染色體完整性改變?nèi)旧w完整性改變和和染色體分離改變?nèi)旧w分離改變兩兩種遺傳學(xué)終點(diǎn)。種遺傳學(xué)終點(diǎn)。凡能使染色體發(fā)生斷裂或使染色體和紡錘體凡能使染色體發(fā)生斷裂或使染色體和紡錘體聯(lián)結(jié)損傷的化學(xué)物，都可用微核試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。聯(lián)結(jié)損傷的化學(xué)物，都可用微核試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。（二）原理（二）原理有核細(xì)胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以有核細(xì)胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。鑒別。嗜多染紅細(xì)胞的主核已排出，胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，姬嗜多染紅細(xì)胞的主核已排出，胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，姬姆薩染色呈灰藍(lán)色；成熟紅細(xì)胞（姆薩

3、染色呈灰藍(lán)色；成熟紅細(xì)胞（NCE）的核糖體已）的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。骨髓中嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量充消失，被染成淡桔紅色。骨髓中嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量充足，微核容易辨認(rèn)，而且微核自發(fā)率低，因此，骨髓足，微核容易辨認(rèn)，而且微核自發(fā)率低，因此，骨髓中嗜多染紅細(xì)胞成為微核試驗(yàn)的中嗜多染紅細(xì)胞成為微核試驗(yàn)的首選細(xì)胞群首選細(xì)胞群。（三）器材與試劑（三）器材與試劑器材：器材： 手術(shù)刀、手術(shù)剪、無(wú)齒鑷、小型彎止手術(shù)刀、手術(shù)剪、無(wú)齒鑷、小型彎止血鉗、干凈紗布、帶橡皮頭吸管、晾片架、血鉗、干凈紗布、帶橡皮頭吸管、晾片架、玻璃蠟筆、玻璃染色缸、載玻片及推片、定玻璃蠟筆、玻璃染色缸、載玻片及推片、定時(shí)鐘、帶油鏡頭顯微鏡

4、、細(xì)胞計(jì)數(shù)器時(shí)鐘、帶油鏡頭顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)器試劑：甲醇（分析純）、甘油（分析純）、試劑：甲醇（分析純）、甘油（分析純）、小牛血清、生理鹽水、小牛血清、生理鹽水、Giemsa貯備液、磷酸貯備液、磷酸鹽緩沖液（鹽緩沖液（pH6.8）陽(yáng)性對(duì)照物：環(huán)磷酰胺或絲裂霉素陽(yáng)性對(duì)照物：環(huán)磷酰胺或絲裂霉素C（四）操作步驟（四）操作步驟1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與處理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與處理動(dòng)物選擇：常用大、小鼠動(dòng)物選擇：常用大、小鼠染毒途徑：經(jīng)口、經(jīng)皮、經(jīng)呼吸道、注射染毒途徑：經(jīng)口、經(jīng)皮、經(jīng)呼吸道、注射染毒次數(shù)及取樣時(shí)間：染毒次數(shù)及取樣時(shí)間：劑量選擇：劑量選擇：35個(gè)或更多劑量組個(gè)或更多劑量組2.骨髓微核觀察的步驟骨髓微核觀察的步驟骨

5、髓制取骨髓制取涂片涂片固定固定染色染色觀察與計(jì)數(shù)觀察與計(jì)數(shù)正染紅細(xì)胞正染紅細(xì)胞 嗜多染紅細(xì)胞及微核嗜多染紅細(xì)胞及微核正染紅細(xì)胞正染紅細(xì)胞嗜多染紅細(xì)胞及微核嗜多染紅細(xì)胞及微核染色太淺染色太淺（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 微核率指含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以千微核率指含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以千分率（分率（）表示）表示 若一個(gè)嗜多染紅細(xì)胞中出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上若一個(gè)嗜多染紅細(xì)胞中出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上微核，仍按一個(gè)有微核細(xì)胞計(jì)數(shù)微核，仍按一個(gè)有微核細(xì)胞計(jì)數(shù)（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)正常的正常的PCE/NCE比值約為比值約為1（正常范圍（正常范圍0.61.2）；）；PCE/NC

6、E0.1，陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組的微核發(fā)生率陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組的微核發(fā)生率多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法（多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法（Poinsson分布、二項(xiàng)分布、分布、二項(xiàng)分布、X2檢驗(yàn)等）均有人應(yīng)用檢驗(yàn)等）均有人應(yīng)用（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（五）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)注意：本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟是制作注意：本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟是制作良好的骨髓涂片及優(yōu)質(zhì)的染色。良好的骨髓涂片及優(yōu)質(zhì)的染色。 （六）試驗(yàn)報(bào)告（六）試驗(yàn)報(bào)告 受試物名稱、理化性狀、配制方法、所用溶劑受試物名稱、理化性狀、配制方法、所用溶劑動(dòng)物種屬和品系、體重、數(shù)量、性別、來(lái)源（注明合格證號(hào)和動(dòng)動(dòng)物種屬和品系、體重、數(shù)量、性別、來(lái)源（注明合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）物級(jí)別）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來(lái)源、室溫、相對(duì)濕度、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來(lái)源、室溫、相對(duì)濕度、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)室合格證號(hào)劑量分組，染毒途徑和方式劑量分組，染毒途徑和方式試驗(yàn)方法：簡(jiǎn)述操作步驟，所用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法：簡(jiǎn)述操作步驟，所用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果：以列表方式報(bào)告受試物對(duì)動(dòng)物骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率（表結(jié)果：以列表方式報(bào)告受試物對(duì)動(dòng)物骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率（表1）結(jié)論結(jié)論組別組別動(dòng)物數(shù)動(dòng)物數(shù)受檢細(xì)胞數(shù)受檢細(xì)胞數(shù)含微核細(xì)含微核細(xì)胞數(shù)胞數(shù)微核率微核率P值值（只