精品資料（2021-2022年收藏）霍亂弧菌食品中毒案例.總結(jié)

1、一起O139群霍亂弧菌引起的食源性疾病暴發(fā)疫情分析【案例】事件概況：2012年7月，在甲、乙、丙三個市陸續(xù)出現(xiàn)劇烈腹瀉和嘔吐病例，腹瀉糞便為水樣便、患者無腹痛、里急后重和發(fā)熱癥狀；首例患者出現(xiàn)在甲市，經(jīng)省、市疾病預(yù)防控制中心聯(lián)合處置，判定為一起由來自丙市農(nóng)貿(mào)市場甲魚污染O139群霍亂弧菌引起的食源性疾病暴發(fā)疫情。事件經(jīng)過：7月某日，乙市村民張XX家舉辦壽宴，來自甲、乙、丙市的親朋好友參加。宴請食物中有用從乙市農(nóng)貿(mào)市場購買并來自丙市農(nóng)貿(mào)市場的甲魚加工的菜品，第二天甲市朱XX發(fā)病，并出現(xiàn)上述癥狀，疾控中心接報后進行處置，最終確認了本起疫情?！居懻擃}】請復(fù)述省市疾控中心從接到第一例患者發(fā)病報告后開始

2、進行的診斷處理過程（不包括對疫情的控制措施），并簡述如何確認致病病原和污染食品來源的方法和步驟?！緟⒖即鸢浮渴∈屑部刂行膹慕拥降谝焕颊甙l(fā)病報告后首先對病人采取緊急處理，采取病人標本，以備送檢；對病人的急救治療；其次對中毒食品的控制：保護現(xiàn)場，封存中毒食品或疑似中毒食品；追回已售出的中毒食品或疑似中毒食品；最后對中毒場所采取消毒處理。當甲、乙、丙三個市陸續(xù)出現(xiàn)類似癥狀的腹瀉病例時，CDC需要調(diào)查病例之間有無流行病學(xué)聯(lián)系，并考慮是否存在其他病例沒有就診以及沒有被發(fā)現(xiàn)。同時立即調(diào)集流行病學(xué)、食品衛(wèi)生學(xué)、微生物檢驗、理化檢驗等學(xué)科專業(yè)人員前往現(xiàn)場調(diào)查。開展調(diào)查的主要工作流程和工作內(nèi)容如下圖：接到報告

3、調(diào)查準備核實病例排出調(diào)查終止調(diào)查病例的定義、范圍確定確認人群調(diào)查危險因素調(diào)查密切搜索密切接觸者搜索個案調(diào)查發(fā)現(xiàn)帶菌者描述性分析病因假設(shè)、調(diào)查與驗證控制措施制定、持續(xù)調(diào)查評估、疫情形勢研判總結(jié)一、現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查：調(diào)查應(yīng)包括流行病調(diào)查和衛(wèi)生學(xué)調(diào)查 CDC在暴發(fā)疫情調(diào)查處理過程中要進行主動搜索，及時發(fā)現(xiàn)感染者。首先要核實診斷，對病例和帶菌者進行詳細的個案調(diào)查，將獲得得臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)史、病原學(xué)檢測等信息填入個案調(diào)查表，并對密切接觸者進行調(diào)查，要求進行詳細的飲食史、接觸史、活動史，注意不能僅詢問是否飲用生水、食用生菜，而且要將有關(guān)可疑飲食種類、食用地點、購買地點等涉及污染來源追蹤所需信息，均進行詳

4、細詢問和記錄。找出傳染來源、傳播因素，評價擴散危險程度，并采集腹瀉患者標本、相關(guān)食品標本、環(huán)境標本（水體、家居環(huán)境）等。1、個案調(diào)查：詢問患者共同食物接觸史，接觸時間，了解中毒發(fā)生的時間、經(jīng)過、中毒人數(shù)及嚴重程度，初步確定可疑餐次和食品。詢問患者72小時內(nèi)吃過哪些食物，進食量、進食時間、地點、烹飪方式、購買食品地點。調(diào)查宴席中患者吃過的哪些食物，統(tǒng)計患者共同吃過的食物，調(diào)查發(fā)現(xiàn)患者均接觸過甲魚做的那道菜及其他幾個菜，而未發(fā)病的人吃了其他幾個菜沒有發(fā)病，所以高度懷疑污染源是甲魚。（需要患者仔細回憶，盡可能減少偏倚）2、病因假設(shè)與驗證：基于調(diào)查獲得得已知事實、數(shù)據(jù)和信息，進行病因假設(shè)的推斷。驗證病

5、因假設(shè)的調(diào)查應(yīng)根據(jù)前期調(diào)查信息和實驗室診斷可利用程度確定。根據(jù)實驗室診斷和流行病學(xué)調(diào)查可推斷發(fā)病病因是患者均吃過甲魚那道菜，所以致病病原和污染食品來源是甲魚。3、危險因素調(diào)查：根據(jù)病因假設(shè)提出或通過分析流行病學(xué)獲知的危險因素，組織開展實驗室驗證，查明污染，以獲得支撐流行病學(xué)調(diào)查的重要實驗證據(jù)。主要類型包括水污染調(diào)查、食品因素調(diào)查和環(huán)境因素調(diào)查等。（1）水污染狀況調(diào)查：患者飲用水源、廚房用水及直接關(guān)聯(lián)的水體。（2）食品相關(guān)因素調(diào)查：A、烹飪過程的污染調(diào)查：通過仔細詢問了解可疑食品從采購到餐桌的全過程、廚房衛(wèi)生狀況（包括儲存方法、餐廚具清潔方法、食品加工工具如砧板、刀具、碗碟等）、廁所衛(wèi)生狀況及污

6、水管理情況。B、食品加工人員的健康調(diào)查：詢問相關(guān)人員是否有健康證，近期手上有無創(chuàng)口以及最近的健康狀況C、水產(chǎn)品污染調(diào)查：如甲魚（3）環(huán)境因素調(diào)查：患者居住環(huán)境，飲用水類型等二、實驗室檢測分析實驗室檢測流程圖1、樣品采集（1）采集急性期患者糞便、嘔吐物、洗胃水、尿液、血液及肛拭子，采集后盡快送檢。A、糞便：盡可能在使用抗生素前采集患者自然排出的新鮮水樣便，約5mL。B、嘔吐物和洗胃水：用無菌壓舌板或棉拭子挑取少量嘔吐物作為檢材，放入自封塑料袋中并封好袋口或置于滅菌帶蓋瓶中，然后蓋緊瓶蓋，立即置于冷藏箱中。洗胃水置于滅菌容器內(nèi)冷藏送檢。C、血液：采血前要核對病人姓名、年齡、性別、編號及檢驗項目等，

7、按試驗項目要求，準備好相應(yīng)的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。病人應(yīng)取坐位或臥位，采血部位通常是前臂肘窩的正中靜脈。按靜脈穿刺法抽取所需血量。采血后，取下針頭，將血液順管壁緩緩注入已選擇好的標本瓶。D、肛拭法：先用無菌甘油水或生理鹽水濕潤棉簽，多余的液體緊靠管壁擠出；再用棉拭或肛門采便管由肛門插入直腸內(nèi)約3cm-5cm處，輕輕旋轉(zhuǎn)360°，擦取直腸表面黏液后取出。避免采便量過少。E、尿液：隨機尿。（2）、采集甲魚加工人員和廚房人員肛拭子、創(chuàng)口樣品、宴席剩余食物、烹飪過程用過的廚房用具、未經(jīng)烹飪的的食材、調(diào)味品、末梢水、加工用具、宰前甲魚、宰后甲魚、魚的食餌等標本進行檢測。采集標本時

8、注意事項：針對不同的可疑食品，采集整體或部分標本，帶至實驗室。注意采集過程中不同食品不能交叉污染。物體表面：用滅菌棉拭蘸以滅菌生理鹽水涂擦與甲魚相關(guān)物體表面，放入到裝有少量生理鹽水的采樣管中，立即冷藏。甲魚：選取海水產(chǎn)品或涂抹拭子置于塑料袋內(nèi)，盡快送往實驗室。如在一箱甲魚中可采取數(shù)只甲魚的體表作為一個標本送檢，這比只做一只甲魚體內(nèi)檢查其陽性檢出機會可能更多。3、血液常規(guī)檢查：主要觀察紅細胞、白細胞血象改變。同時可觀察血清鉀、鈉、氯化物、PH等數(shù)量變化。4、尿液常規(guī)檢：主要觀察尿液是否有蛋白質(zhì)、紅細胞、白細胞及管型。5、快速診斷：（1）動力試驗：用接種環(huán)或滴管取1滴水樣便在玻片上然后蓋上蓋玻片，

9、直接用暗視野顯微鏡觀察動力。如在鏡下見到魚群穿梭樣運動（像夜空中的流星）即動力試驗陽性，否則陰性。（2）涂片染色：取糞便或早期培養(yǎng)物涂片作革蘭染色鏡檢。如鏡檢為革蘭陰性稍彎曲的弧菌，且動力試驗為陽性，可初步報告為霍亂弧菌引起的暴發(fā)疫情。根據(jù)血象和糞便常規(guī)檢查結(jié)果，可推斷是細菌性食物中毒。6、病原菌檢查（1）常規(guī)鏡檢（包括性狀、顏色）糞便可見黏液和少許紅、白細胞。（2）懸滴檢查 將新鮮糞便作懸滴或暗視野顯微鏡檢，可見運動活潑呈穿梭狀的弧菌。（3）制動試驗 取急性期病人的水樣糞便或堿性胨水增菌培養(yǎng)6小時左右的表層生長物，先作暗視野顯微鏡檢，觀察動力。如有穿梭樣運動物時，則加入01群多價血清一滴，若

10、是01群霍亂弧菌，由于抗原抗體作用，則凝集成塊，弧菌運動即停止。如加01群血清后，不能制止運動，應(yīng)再用0139血清重作試驗。（4）增菌 ：將患者或者其他食品、水體、物品涂抹等標本在選擇性培養(yǎng)基上進行直接培養(yǎng)、或經(jīng)過增菌后再做培養(yǎng)。糞便、嘔吐物等標本可直接進行分離培養(yǎng)或增菌后培養(yǎng)，水和食品等標本需進行過濾、沉淀、剪碎、稀釋等處理，然后進行增菌和分離培養(yǎng)。糞便留取應(yīng)在使用抗菌藥物之前，且應(yīng)盡快送到實驗室作培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基一般用pH8.4的堿性蛋白胨水，3637培養(yǎng)68小時后表面能形成菌膜。此時應(yīng)進一步作分離培養(yǎng)，并進行動力觀察和制動試驗，這將有助于提高檢出率和早期診斷。（5）分離培養(yǎng) 常用慶大霉素

11、瓊脂平皿或堿性瓊脂平板。前者為強選擇性培養(yǎng)基，3637培養(yǎng)810小時霍亂弧菌即可長成小菌落。后者則需培養(yǎng)1020小時。（6）血清鑒定：選擇可疑或典型菌落，與O139群抗血清、O1群多價和單價做玻片凝集反應(yīng)，若在血清中很快出現(xiàn)肉眼可見的明顯凝集，在生理鹽水中不凝集者判為陽性，反之陰性。（7）生化鑒定：氧化酶試驗和粘絲試驗按以上流程同時做了沙門、空腸彎曲菌、產(chǎn)毒性大腸桿菌等其他可引起腹瀉性食物中毒的可疑菌種，但是均未出現(xiàn)與霍亂弧菌相同的實驗現(xiàn)象，可以排除其他菌的可能。7、常規(guī)PCR檢測霍亂毒素基因：i. 引物：可使用引物對5-ATT TTG AGG TGC TCC ATG TG-3和5-ATA A

12、AG CAG TCA GGT GGT CT-3ii. PCR擴增反應(yīng)體系：在0.5mL微量離心管中按順序加入以下各種成分：純水、緩沖液、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNAiii. 擴增參數(shù)：94預(yù)變性5min，94 30sec，56，40sec，72，1min，30個循環(huán)；最后72延伸7min。iv. PCR擴增結(jié)束后，在樣本管中加入溴酚藍樣液，通過瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)束后通過紫外燈觀察結(jié)果，根據(jù)擴增產(chǎn)物的有無和片段大小判斷。8、噬菌體分型（雙層瓊脂平皿法）：五株分型噬菌體主要來自患者和水體，用于增菌的菌株 。A、操作：取培養(yǎng)物200L加至已溶化并冷卻至50的半固體瓊脂中，混亂后均勻傾注于固體瓊脂平皿上，凝固后，分別滴加5L噬菌體及菌株。B、結(jié)果判定：出現(xiàn)全裂解、幾乎裂解、半全裂解、不透明裂解、弱裂解或不同數(shù)量的噬斑者均為陽性，可疑裂解與不裂解者為陰性。書是我們時代的生命別林斯基書籍是巨大的力量列寧書是人類進步的階梯高爾基書籍是人類知識的總統(tǒng)莎士比亞書籍是人類思想的寶庫烏申斯基書籍舉世之寶梭羅好的書籍是最貴重的珍