乳腺癌中Bcl-2和Ki-67表達(dá)及其臨床病理意義

1、乳腺癌中Bcl-2和Ki-67表達(dá)及其臨床病理意義                    作者：許東哲，金哲洙，李瑞永【摘要】  目的 研究乳腺癌Bcl-2和Ki-67蛋白表達(dá)及臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)50例隨訪5年以上的乳腺癌患者標(biāo)本中Bcl-2和Ki-67的表達(dá)情況，分析其臨床病理特性以及相關(guān)性關(guān)系。結(jié)果 Bcl-2和Ki-67蛋白表達(dá)的陽性率分別為64%（32/50）和60%（30/5

2、0）。Bcl-2高表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期呈顯著負(fù)相關(guān)，與生存期呈正相關(guān)。Ki-67的高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、腫瘤的大小，腋淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（P0.05）。結(jié)論 （1）乳腺癌Bcl-2蛋白表達(dá)陽性提示腫瘤分化程度高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移少。（2）Ki-67表達(dá)陽性提示腫瘤分化程度低，惡性度高，病期較晚，復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移多。兩種標(biāo)志物反映乳腺癌病理參數(shù)特性有不同意義。 【關(guān)鍵詞】  乳腺癌；Bcl-2；Ki-67；免疫組織化學(xué)；病理   【Abstract】   Objective   To study th

3、e expression and clinical significance of Bcl-2 and Ki-67 in breast carcinoma.Methods   The expression of Bcl-2 and Ki-67 were detected by immunohistochemical S-P methods in tissue samples from 50 cases of breast carcinoma.Results   The overall positive rate of Bcl-2 and Ki-67 wa

4、s 64%（32/50）and 60%（30/50）respectively.The high expression of Bcl-2 showed to be negative correlation with histological grade and axilla lymph node metastasis,and to be positive correlation with survival period.The high expression of Ki-67 was positively related to the tumor size ,axilla lymph node

5、metastasis,histological grade , recurrence and metastasis （P0.05）. Inverse correlation was found between the expression of Bcl-2 and Ki-67 （P0.05）.Conclusion   （1） The positive expression of Bcl-2 occurs more in well differentiated breast cancer and negative lymph node state. （2） The posit

6、ive expression of Ki-67 revealed the low differentiation of tumor and with high recurrence and metastasis as well as a later clinical stage.  Both Bcl-2 and Ki-67 could act as a marker to evaluate different biological behavior of breast cancer.   【Key words】   breast carcino

7、ma;  Bcl-2 ; Ki-67;  immunohistochemistry;  pathology   Bcl-2是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡抑制基因，在細(xì)胞凋亡調(diào)控過程中起著關(guān)鍵作用。Ki-67是細(xì)胞增殖和合成代謝相關(guān)的非組合蛋白，有關(guān)對(duì)Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中表達(dá)的研究提示，對(duì)評(píng)估乳腺癌特性有意義。但其表達(dá)的觀點(diǎn)不一，本文檢測(cè)乳腺癌Bcl-2和Ki-67，探討其表達(dá)與乳腺癌臨床病理特性關(guān)系。   1   材料與方法   1.1   材料 &

8、#160; 材料來自我院1992-1997年資料完整的乳腺癌根治標(biāo)本50例,患者均為女性，年齡2367歲，平均年齡為47.6歲。其中朝鮮族20例，漢族30例。組織學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌23例，單純癌11例，其他癌16例。組織學(xué)分級(jí)：級(jí)16例，級(jí)19例，級(jí)15例，TNM分期中期48例，期2例。   1.2   試劑   鼠抗人Bcl-2 單克隆抗體、 鼠抗人Ki-67核抗原單克隆抗體和通用型SP kit 均為美國ZYMED公司產(chǎn)品。   1.3   染色方法   篩選出50例乳腺

9、癌簡化根治標(biāo)本癌組織蠟塊，做4厚的組織切片，脫蠟后放入盛有枸櫞酸緩沖液（工作液）的容器中，置微波爐內(nèi)（95，15min）行抗原修復(fù)，取出冷卻至室溫。經(jīng)PBS沖洗后用通用型SP kit中的正常山羊血清封閉，室溫孵育10min，棄血清分別滴加1:50濃度的Bcl-2-抗和Ki-67-抗，置冰箱過夜。PBS沖洗后，滴加通用型SP kit中的生物素標(biāo)記二抗，室溫30min，PBS沖洗后滴加通用型SP kit中的生物標(biāo)記二抗，室溫30min；PBS沖洗后滴加通用型中的辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，室溫30min。PBS沖洗后DAB顯色劑顯色，自來水沖洗后，蘇木素復(fù)染，中性樹膠固定，封片。對(duì)照：以PBS代替一抗

10、作為陰性對(duì)照。用已知陽性切片作陽性對(duì)照。   1.4   陽性結(jié)果的判斷   Bcl-2陽性著色組織學(xué)特征為以癌細(xì)胞胞漿著色為主，胞膜和核膜上呈現(xiàn)棕黃色顆粒， 而Ki-67為細(xì)胞核成深棕色。根據(jù)陽性細(xì)胞在同類細(xì)胞中所占的比例判定結(jié)果。著色細(xì)胞10%為（-）；10%25為（）；2550為（）；50為（）。   1.5   統(tǒng)計(jì)學(xué)分析   采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行2檢驗(yàn)、Fisher精確檢驗(yàn)和相關(guān)分析。    2   結(jié)果

11、   21   Bcl-2、Ki-67蛋白在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)情況   Bcl-2蛋白位于癌細(xì)胞的胞漿、胞膜和核膜，以胞漿為主，總陽性率為64%。Ki-67的陽性標(biāo)記位于細(xì)胞核內(nèi)，呈棕色顆粒，胞漿陰性?？傟栃月蕿?0%。   22   Bcl-2、Ki-67蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理關(guān)系   Bcl-2 、Ki-67的陽性表達(dá)與患者的年齡、民族、絕經(jīng)前后無關(guān)，差異無顯著性（P0.05）。腫瘤2cm 組Ki-67蛋白表達(dá)陽性率為28.6%，明顯低于2cm組Ki-67蛋白表達(dá)（72.

12、2%），差異有顯著性（P0.01），呈正相關(guān)，但Bcl-2表達(dá)與腫瘤大小無關(guān)。Bcl-2的表達(dá)陽性率級(jí)明顯高于級(jí)和級(jí)，差異有顯著性（P0.05）。Ki-67表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)，Ki-67的表達(dá)陽性率級(jí)高于級(jí)和級(jí)，差異有顯著性（P0.05）。而Bcl-2、Ki-67蛋白表達(dá)與病理臨床分期無關(guān)（P0.05）。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組Bcl-2的陽性表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組的表達(dá)率（P0.05），其陽性表達(dá)與生存期呈正相關(guān)。但Bcl-2表達(dá)與腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移無關(guān)。Ki-67的陽性表達(dá)與腋淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的Ki-67的表達(dá)率（81.8%）明顯高于陰性表達(dá)率（42.9%），差異

13、有顯著性（P0.01）。Ki-67的陽性表達(dá)與腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移腫瘤中的Ki-67的陽性表達(dá)率為90%，明顯高于無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的表達(dá)（52.5%）（P0.05）。 見表1。   23   Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)的相關(guān)關(guān)系   經(jīng)相關(guān)檢驗(yàn)，Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P0.05），見表2。表1   Bcl-2和Ki-67表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系表2   Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中表達(dá)的關(guān)系    

14、60;        3   討論   Bcl-2是抑制細(xì)胞凋亡的重要的凋亡調(diào)控基因,在多種癌中表達(dá)1。Bcl-2的表達(dá)提示腫瘤的惡度較低，是一個(gè)可靠的臨床預(yù)后好的指標(biāo)2，3。本組Bcl-2表達(dá)在分化級(jí)組明顯高于級(jí)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性中的Bcl-2的表達(dá)明顯高于陽性的表達(dá)，其表達(dá)與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。在腫瘤大小和分期中的表達(dá)，盡管有報(bào)道顯示Bcl-2表達(dá)與腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)4，5，但多數(shù)報(bào)道與之無關(guān)6。Ki-67是反映細(xì)胞增殖活性的一種標(biāo)記，半衰期短，在細(xì)胞周期中，除G0期和G1早期外，其他各期均

15、有表達(dá)，期達(dá)到高峰7。Ki-67在腫瘤的良惡性的區(qū)分、惡性程度的確定及評(píng)估預(yù)后等方面有較廣泛的應(yīng)用。在乳腺癌的預(yù)后研究表明，Ki-67與c-erbB-2、P53等一同被列為僅次于激素受體、組織學(xué)級(jí)別的乳腺癌第二類預(yù)后指標(biāo)8。本組Ki-67的陽性表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移差異有顯著性（P0.05），呈正相關(guān)，而Bcl-2的表達(dá)隨Ki-67表達(dá)增多明顯減少，呈負(fù)相關(guān)，但復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與文獻(xiàn)報(bào)道不一致911，可能與復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移后帶瘤生存以及實(shí)驗(yàn)條件不同等多因素有關(guān)。臨床分析這些指標(biāo)時(shí)應(yīng)分別對(duì)待，為乳腺癌高危病理參數(shù)特性的了解有一定幫助?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1

16、 Soini Y，Paakko P，lehto VP. Histopathological evaluation of apoptosis in cancer. Am J Patho，1998，153（4）：1041-1053.2 Homma A，F(xiàn)uruta Y，Oridate N，et al.Correlation of clinico-pathological parametcrs and biological markers related to apoptosis and proliferative activity with a clinical outcome in squamo

17、us cellcarcinoma of the larynx，treated with concurrent chemoradiotherapy.Auris nasus larynx，2001，28：87-94. 3 Kylmionis GD，Dimitrakakis CE，Konstadoulakis MM，et al.Can expression of apoptosis genes，Bcl-2 and bax，Predict survival and responsiveness to chemotherapy in node negative breast cancer patient

18、s？J Surg Res，2001，99（2）：161-168.4 van Slooten HJ,Clahsen PC,van Dierendonck JH,et al.Expression of Bcl-2in node-negative breast cancer is associated with various prognostic factors,but does not predict response to one course of perioperative chemotherapy.Br J Cancer,1996,74:78-85.5 Kobayashi S,Iwase

19、 H,Ito Y,et al.Clinical significance of bcl-2 gene expression in human breast cancer tissues.Breast Cancer Res Treat,1997,42:173-181.6 Joensuu H,Pylkkanen L,Toikkanen S.Bcl-2 protein exepression and long-term survival in breast cancer.Am J Pathol,1994,145:1191-1198. 7 Inden MD，Torres FX，Kubus J，et al.Clinical application of morphologic and immunocytochemical assessments of cell proliferation.Am J Clin Pathol，1992，97（suppl 1）：4-13.8 Patric L，F(xiàn)itzgibbons MD，David L，et al.Prognostic factor in breast carcinoma.Arch Path