實(shí)驗(yàn)二十四尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù).

1、實(shí)驗(yàn)二十四尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù)一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉尿藥法在藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。2掌握尿藥法計算消除速度常數(shù)的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理藥物在體內(nèi)過程是一個整體，吸收、分布、代謝、排泄等過程既有區(qū)別，又有聯(lián)系，觀察一個方面的變化，?？砷g接地認(rèn)識另一方面的情況，所以藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測定方法較易建立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原形從尿中排除條件下，通常可用尿藥法估算消除速度常數(shù)、生物半衰期等動力學(xué)參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時排泄速度，可用下列微分式表

2、示：dXu =KeX（ 1）dtKe 為表觀一級排泄速度常數(shù)，Xu 為 t 時尿中原形藥物的累計排泄量，X 為 t時間體內(nèi)存有的藥量。在靜脈給藥時，體內(nèi)藥量的經(jīng)時過程可由下式表示：X=Xo-kt（2）eXo 為給藥劑量， K 為表觀一級消除速度常數(shù)。將（ 2）式中 X 值代入（ 1）式后得：dXu-kt（ 3）=K X edte o兩邊取對數(shù)得：logdXu=logK X -Kt（ 4）dte o2.303由（ 4 ）式可見，原形藥物排泄速度的對數(shù)對時間作圖為一直線，其斜率為K-，2.303108與血藥濃度的對數(shù)對時間作圖所求的斜率相同。 （4）式適用于靜脈給藥后求算消除速度常數(shù)。若口服給藥，

3、則體內(nèi)藥量經(jīng)時過程可由下式表示：X=KaXoF （e-Kt e-Kat）（ 5）Ka KKa 為表觀一級吸收速度常數(shù)。尿中原形藥物的瞬時排泄速度可用（5）式代入（ 1）式得：dXu = KeKaFXo （ e-Kt e-Kat ）（ 6）dtKaK當(dāng) Ka>K， t 充分大時，則 e-kat 0，（ 5）式簡化為：dXu = KeKaFXo e-Kt（ 7）dtKaK兩邊取對數(shù)得：logdXu =logKeKaFXo Kt（ 8）dtKaK2.303由上述關(guān)系式可見，若以logXu/dt對 t 作圖，可得到一條二項(xiàng)指數(shù)曲線，從其后段直線的斜率可求出一級消除速度常數(shù)K。由于尿中原形藥物排泄

4、速度的瞬時變化率是不可能用實(shí)驗(yàn)方法求算的，通過實(shí)驗(yàn)只可求出平均排泄速度，設(shè)在一段時間間隔t 內(nèi)藥物的排泄速度量為Xu，則平均排泄速度為Xu ，這樣（ 4）或（ 8）式可改寫如下：tlogXu=logK X Kt中（ 9）te o2.303logXu =logKeKaXoFKt 中（ 10）tKaK2.303由于實(shí)驗(yàn)中采取平均排泄速度代替瞬時排泄速度， 求得的消除速度常數(shù) K 會出現(xiàn)一些誤差。 但若以恒定的時間間隔集尿， 其時間間隔不大于一個藥物的半衰期時，則僅發(fā)生 2%以內(nèi)的偏差。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作（一）服藥及尿樣收集1 服藥前一天收集24 小時尿液，每次收集尿液后量體積，取10ml 保留，其

5、余倒掉。2 臨服藥前排空小便。3 早餐后立即服用核黃素片三片（5 毫克 / 片），用溫水吞服不嚼碎，記錄服藥109時間。4 按藥片服下后的第2、 4、 6、 8、10 小時收集尿液，用量筒取并記錄尿液體積，然后，將尿液倒入盛有0.2 毫升冰醋酸的刻度試管內(nèi)至20 毫升，搖勻，于陰涼避光處保存。5 注意點(diǎn)：（ 1）每次收集尿液后飲 200 毫升左右水以維持尿量。（ 2）每次大便時收集小便，切勿損失。（ 3）試驗(yàn)期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B 族維生素的藥品。（二）尿液中核黃素含量的測定1原理：核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙

6、鍵，能接受和放出氫原子，在保險粉（連二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性，可以由加入保險粉前后二次測得的吸收度（核黃素在波長444nm處有吸收） 的差值， 來計算尿液中核黃素的含量。CH2(CHOH)3CH2OHCH2(CHOH)3CH2OHCHNNOCH3NH3Na2S2O4OCH3NNHCHNHNO3O2. 方法（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取105 干燥 2 小時的核黃素對照品50 毫克于 500 毫升容量瓶中，加0.02mol/L醋酸液稀釋至300 毫升，置水浴加熱溶解后，放冷至室溫， 用 0.02mol/L醋酸液稀釋至刻度，搖勻即得， 每 1 毫升中含核黃素100

7、微克，然后加入甲苯覆蓋上面，置涼暗處保存。（2） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液 0.1 、 0.3 、 0.5 、 1.0 、 2.0 、 3.0毫升分別置于 10 毫升容量瓶中，用酸化蒸餾水（每100毫升蒸餾水中含 1 毫升冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。以酸化蒸餾水作空白，用721或 722 型分光光度計，在444nm波長處測定吸收度，然后，在每管中各加保險粉約3 毫克，搖勻。在一分鐘內(nèi)再次測定吸收度。兩次測定值之差， 即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標(biāo)， 濃度為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。110（ 3） 尿樣中核黃素含量測定尿樣測定照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法。從“以酸化蒸餾水作空白”起，依法測定吸收

8、度，以兩次測定值之差，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1 原始記錄服藥后尿液收集與測定數(shù)據(jù)表 1空白尿藥測定數(shù)據(jù)A1 （未加保險粉）A2（加保險粉）A1-A 2C空白尿體積（毫升） ：空白尿中排泄核黃素的總Xu 量：平均每 2 小時排泄核黃素的數(shù)：表 2尿樣的原始記錄試管號集尿時刻（ hr ）集尿時間間隔（ hr ）尿量（ ml）空白12345表 3尿藥測定記錄試管號A1（未加保險粉）A（2加保險粉）A1-A 2C空白12345111表 4尿藥法動力學(xué)分析記錄試管號集尿時間間中點(diǎn)時間Xu平均排泄速度logXu隔（t ）（ t 中）（ mg）（ Xu/t ）t空白123452 繪制尿藥排泄速率二項(xiàng)指數(shù)曲線