系膜增生性腎炎患兒腎組織中核因子-κB的活化及其意義

1、    系膜增生性腎炎患兒腎組織中 核因子-B的活化及其意義        關(guān)鍵詞系膜增生性腎小球腎炎核因子-B細胞外基質(zhì) 核因子-B（NF-B）是一種與炎癥性細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生、細胞增生、細胞外基質(zhì)（ECM）交聯(lián)和細胞凋亡有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，參與多種炎癥介質(zhì)的信號傳導(dǎo)過程1。本研究采用免疫組化染色及真彩色醫(yī)學(xué)像分析系統(tǒng)，觀察系膜增生性腎小球腎炎（MsPGN）患兒腎組織中NF-B的活化，為闡明MsPGN的發(fā)病機制及防治MsPGN的發(fā)生、發(fā)展提供實驗依據(jù)。1對象和方

2、法11研究對象MsPGN患兒22例，男16例，女6例，平均年齡8.5歲，均排除紫癜性腎炎、狼瘡性腎炎等繼發(fā)性腎小球腎炎。所有患兒均經(jīng)腎穿刺活檢，按WHO1982年制訂的腎小球疾病分類標(biāo)準(zhǔn)及分度標(biāo)準(zhǔn)診斷為MsPGN(不包括IgA腎病)，其中輕度MsPGN 6例，中度MsPGN 10例，重度MsPGN 6例。對照組2例，為腎腫瘤手術(shù)切除的正常腎組織。12免疫組織化學(xué)染色采用改良ABC法，免疫組化試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，按說明書操作。山羊抗人NF-B p65抗體及兔抗山羊IgG均為SANTACRUZ產(chǎn)品。13計算機像分析應(yīng)用真彩色醫(yī)學(xué)像分析系統(tǒng)由計算機自動單盲法計算每例腎小球染色區(qū)域的平

3、均吸光度。陽性小管則以高倍視野下每100個小管中的陽性小管所占的百分數(shù)表示。另外常規(guī)方法對患兒腎組織病理切片進行PASM染色，并對病理切片上的腎小球進行嗜銀結(jié)構(gòu)的掃描定量，計算出其平均積分吸光度，以表示系膜基質(zhì)擴大的程度。14統(tǒng)計學(xué)處理實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗和相關(guān)分析進行統(tǒng)計學(xué)處理。2結(jié)果21MsPGN患兒與正常對照組腎組織中NF-B的活性比較MsPGN患兒腎小球及腎小管中NF-B表達均較對照組顯著增強，見表1。表1MsPGN患兒與正常對照組腎組織中NF-B活性比較分組n腎小球（A）腎小管（）正常對照組20.17±0.0617.04±7.84MsP

4、GN組220.33±1.12*39.95±21.80*與正常對照組比較，P0.01 22MsPGN中系膜細胞增生程度與腎組織中NF-B活性的相關(guān)關(guān)系由表2可見，隨系膜細胞增生程度的加重，腎小球及腎小管中NF-B的表達亦逐漸增強。表2MsPGN患兒系膜細胞增生程度與腎組織中NF-B活性比較分組n腎小球（A）腎小管（）正常對照組20.17±0.0617.04±7.84輕度MsPGN組60.23±0.08?30.57±15.23*中度MsPGN組100.34±0.08*38.83±22.45*重度MsPGN組60.42&

5、#177;0.10*50.43±23.14*?與正常對照組比較，P0.05，*與正常對照組比較，P0.01與輕度MsPGN比較，P0.01，與中度MsPGN比較，P0.01 23MsPGN患兒伴新月體形成組與無新月體形成組腎組織中NF-B的活性比較如表3所示，MsPGN伴新月體形成組腎小球中NF-B的表達顯著高于無新月體形成組，而腎小管中NF-B的表達在兩組間無顯著差異。表3MsPGN伴新月體形成組與無新月體形成組腎組織中NF-B活性比較分組n腎小球（A）腎小管（）無新月體組190.33±0.1236.80±23.20伴新月體組30.40±0.10*40

6、.85±21.59*與無新月體組比較，P0.05 24MsPGN患兒伴腎小球節(jié)段硬化組與無硬化組腎組織中NF-B的活性比較MsPGN伴腎小球節(jié)段硬化組腎小球及腎小管中NF-B的表達均較無硬化組顯著增高，見表4。表4MsPGN伴腎小球節(jié)段硬化組與無硬化組腎組織中NF-B活性比較分組n腎小球（A）腎小管（）無節(jié)段硬化組150.32±0.1135.73±20.74伴節(jié)段硬化組70.40±0.10*56.43±18.34*與無節(jié)段硬化組比較，P0.01 25MsPGN患兒伴腎小管間質(zhì)單核細胞浸潤組與無單核細胞浸潤組腎組織中NF-B的活性比較MsPGN伴

7、腎小管間質(zhì)單核細胞浸潤組腎小管中NF-B的表達顯著高于無單核細胞浸潤組，而腎小球中NF-B的表達在兩組間無顯著差異，見表5。表5MsPGN伴腎小管間質(zhì)單核細胞浸潤組與無單核細胞浸潤組腎組織中NF-B活性比較分組n腎小球（A）腎小管（）無單核細胞浸潤組140.33±0.1233.47±18.39伴單核細胞浸潤組80.34±0.1365.26±14.13*與無單核細胞浸潤組比較，P0.01 26MsPGN患兒腎小球中NF-B的活性與系膜基質(zhì)擴張相關(guān)分析腎小球中NF-B的表達與系膜基質(zhì)擴張呈顯著正相關(guān)，回歸方程為Y0.3697+12.2855X（P0.01），

8、r0.9263（P0.001）。3討論NF-B是轉(zhuǎn)錄因子家庭的重要成員，參與多種炎癥性細胞因子、趨化因子和促纖維化因子的合成、細胞增生、ECM交聯(lián)、細胞凋亡以及成纖維細胞的分化過程，在腎小球腎炎的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用1，2。我們采用免疫組化研究其在MsPGN患兒腎組織中的活化，并分析其與MsPGN病理改變的相關(guān)關(guān)系，探討其在MsPGN分子發(fā)病機制中的作用。我們的研究結(jié)果表明，MsPGN患兒腎組織中NF-B的活性較正常對照組顯著增高且與病變程度相關(guān)，即病變程度越重，腎組織中NF-B的活性越高。此外，MsPGN伴腎間質(zhì)單核細胞浸潤組腎小管中NF-B的活性亦較無單核細胞浸潤組明顯增高。Sakura

9、i等應(yīng)用凝膠電泳遷移率（EMSA）研究腎毒血清性腎炎大鼠腎組織中NF-B的活性時發(fā)現(xiàn)，腎小球內(nèi)NF-B的活性在注射腎毒血清后第一天即顯著增高，NF-B活化先于蛋白尿的出現(xiàn)。該作者進一步采用抗氧化劑PDTC抑制NF-B活性后發(fā)現(xiàn)，炎癥介質(zhì)IL-1，MCP-1，ICAM-1及一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表達顯著下調(diào)3，4。有研究證實，IL-1和TNF-可誘導(dǎo)培養(yǎng)的人腎小球系膜細胞中NF-B的活化及MCP-1和VCAM-1mRNA的表達5，6。這些研究結(jié)果表明，NF-B的活化參與了腎小球腎炎的炎癥反應(yīng)，它誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)的合成及單核細胞浸潤，而且參與炎癥介質(zhì)的病理生理過程，從而啟動腎臟損害。本研究結(jié)

10、果證實，MsPGN患兒腎組織中NF-B的活性顯著上調(diào)，且與病變的嚴重程度、ECM集聚相關(guān)，表明NF-B活化在MsPGN的發(fā)病機制中發(fā)揮著重要作用，它可能啟動了MsPGN的炎癥反應(yīng)，阻斷NF-B的活化將可能為防治MsPGN的發(fā)生和進展提供新的治療方法。張愛華（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）陳榮華（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）林娜（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）黃松明（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）郭梅（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）費莉（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）潘曉勤（

11、南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）蔡毅（南京醫(yī)科大學(xué)小兒腎臟病研究中心南京，210029）參考文獻1，Morrissey J，Klahr STranscription factor NF-B regulation of renal fibrosis during ureteral obstructionSemin Nephrol，1998，18：6032，May MJ，Ghosh SSignal transduction through NF-BImmunol Today，1998，19：803，Sakurai H，Shigemori N，Hisada Y et alSuppr

12、ession of NF-kappa B and AP-1 activation by glucocorticoids in experimental glomerulonephritis in rats：molecular mechanisms of anti-nephritic actionBiochim Biophys Acta，1997，1362：2524，Sakurai H，Hisada Y，Ueno M et alActivation of transcription factor NF-kappa B in experimental glomerulonephritis in ratsBiochim Biophys Acta，1996，1316：1325，Rovin-BH，Dickerson-JA，Tan-LC et alModulation of IL-1-induced chemokine expression in human mesangial cells through alterations in redox statusCytokine，1997，9：1786，K