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1、病毒保存液和細(xì)胞保存液的區(qū)別展開全文一、病毒保存液病毒保存液適用于新型冠狀病毒、流感病毒、手足口病毒等常見病毒樣本采集保存運輸工作,是采樣管內(nèi)浸末采樣拭子病毒樣本一種保護病毒的被檢測物質(zhì)的液體,可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位組織樣本,儲存的樣本可用于后續(xù)的核酸提取或純化等臨床實驗。通常分為兩種,一種是非滅活型,能夠保護病毒的蛋白和核酸,另一種是滅活型,通常含有滅活病毒的裂解鹽,裂解蛋白而保護核酸。1、滅活型:添加有裂解鹽的病毒保存液就是滅活型的病毒保存液,里面含有的Tris、裂解鹽、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸,從而通過后續(xù)的實時熒光RT-PCR進行核酸檢測,以此判斷樣本是否含有病
2、毒特征核酸,即是否感染病毒。核酸是由許多核甘酸聚合成的生物大分子化合物,包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩類,是生命的最基本物質(zhì)之一。病毒結(jié)構(gòu)單一,就只含有一種核酸和蛋白質(zhì),因此檢測出特征核酸就檢測除了病毒。病毒屬于寄生生物,采樣后體外無法存活,如果不能及時檢測,就需要放入病毒保存液中。為了保護病毒檢測環(huán)境的安全性,就需要加入裂解鹽來滅活病毒,釋放出可以被檢測的核酸即可。2、非滅活型:除了滅活型的病毒保存液,德晟研發(fā)生產(chǎn)的還有非滅活型病毒保存液,不含裂解鹽,但是保存的病毒完整性更好,檢出率更高,除了核酸檢測外還可以用于其他研究。滅活型病毒保存液則使用上更安全,操作環(huán)境要求也不用那
3、么嚴(yán)格,各有各的優(yōu)勢,目前研究的非滅活病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎(chǔ),在Hank's液基礎(chǔ)之上,德晟還添加了諸如慶大霉素、真菌抗生素、BSA(牛血清白蛋白第五組分)、生物緩沖劑HEPES、氨基酸、冷凍保護劑、甘油等多種組分:3、病毒樣本采集方法:a.鼻拭子:將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處,停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3成采樣液的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。b.咽拭子:用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁,將拭子頭浸入含3ml病毒保存液(也可使用等滲鹽溶
4、液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液)的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。c.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物:用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管,接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采樣液沖洗收集器1次(亦可用小兒導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器)。二、細(xì)胞保存液:通常所說的細(xì)胞保存液是一種通用型的細(xì)胞凍存液,可用于凍存人和各種動物細(xì)胞株;細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保
5、種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候,細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,如果沒有原始細(xì)胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。細(xì)胞保存液優(yōu)點:目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞碉作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷;非程序降溫,-80低溫冰箱凍存長達5年,可以確保凍存細(xì)胞安全;可孔板(細(xì)胞培養(yǎng)板)凍存,可用于雜交瘤細(xì)胞的凍存液.細(xì)胞保存液具有稀釋作用,能分離出大量包埋在粘液中的有效細(xì)胞,使更多有檢驗價值的細(xì)胞被保存下來,提供充足的細(xì)胞數(shù)量,為檢驗結(jié)果的準(zhǔn)
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