本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)外文翻譯

1、華南理工大學(xué)本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）翻譯班級(jí)姓名學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師填表日期13中文譯名水溶性過度金屬咔咯配合物對(duì)DNA連接和氧化裂解的作用外文原文名DNABindingandOxidativeCleavagebyaWater-solubleCarboxylManganese(III)Corrole外文原文版出處ChineseJournalofChemistry,2013,Vl.31(10)譯文：吸收光譜，熒光光譜和CD光譜，以及粘度測(cè)量已經(jīng)研究了小牛胸腺DNA(ct-DNA)與鉆的咔咯配合物一一5,10,15-三(4-竣基苯基)咔咯的相互作用。結(jié)果表明鈕的咔咯配合物通過外部溝與ct-DNA結(jié)合，該結(jié)合常

2、數(shù)Kb為4.67A04L?mol-1。在多種氧化劑存在下，由MnTCPC作用，ct-DNA裂解作用也被研究。在過氧化氫或叔BuOOH存在下，MnTCPC可以以缺口和線性形式切割超螺旋質(zhì)粒pBR322,然而以KHSO5作為氧化劑卻并沒有觀察到核酸酶的活性。抑制劑試驗(yàn)表明，羥基自由基，單線氧沒有參與Mn“TCPC為介質(zhì)的DNA氧化裂解。在這種氧化裂解反應(yīng)中，氧代鈕(V)的咔咯配合物是可能的活性中間體。關(guān)鍵詞：咔咯，鈕，DNA聯(lián)接，核酸酶活性引言在自然中，經(jīng)由水解磷酸二酯是金屬酶催化的DNA高效裂解的途徑。在過去幾十年里，作為探索生物醫(yī)藥的工具和抗癌藥物，旨在結(jié)合并切割DNA的過渡金屬配合物已被廣泛

3、研究。嚇咻及其金屬配合物在生命系統(tǒng)中無處不在并發(fā)揮了重要的作用，例如細(xì)胞色素P450,過氧化物酶和過氧化氫酶。為追求潛在的應(yīng)用，在光動(dòng)力療法，月中瘤顯像，人工核酸酶中，許多水溶性嚇咻，如陽(yáng)離子型嚇咻，磺化嚇咻，竣酸嚇咻已經(jīng)合成，它們中的一些甚至被用在臨床診斷和治療中。類似的研究已擴(kuò)大到其他類似嚇咻的分子。咔咯大環(huán)化合物與嚇咻是有許多相似之處。咔咯金屬配合物的許多性能與嚇咻的比較已經(jīng)引起了人們極大的興趣。水溶性磺化咔咯及其金屬配合物的合成可以被視為咔咯在生物無機(jī)化學(xué)的最有價(jià)值的應(yīng)用?；腔强┛梢耘c人血清白蛋白(HSA)和轉(zhuǎn)鐵蛋白緊密結(jié)合，而且，它是白蛋白共腕鐵與鉆配合物產(chǎn)生的一個(gè)非常簡(jiǎn)單卻非常有

4、效的仿生氧化系統(tǒng)。以前的工作證明，該磺化咔咯可以與小牛胸腺DNA(ct-DNA)通過外部結(jié)合模式綁定并且表現(xiàn)出氧化裂解或光切割pBR322DNA的活動(dòng)。陽(yáng)離子叱噬基取代咔咯形成另一個(gè)類水溶性咔咯。這種帶正電的咔咯可以穩(wěn)定G-四鏈體DNA并由于具有良好的核酸酶活性而表現(xiàn)出的與帶負(fù)電負(fù)的DNA更好的親和力，鈕(III)配合物在KHSO5存在下與非雙螺旋區(qū)選擇性作用，并且能選擇性地靠近雙鏈DNA環(huán)形及凸起部位的鳥喋吟?？⒒鶉樳菀衙黠@表現(xiàn)出與DNA結(jié)合和裂解的良好活性。與此相反，水溶性竣基咔咯化合物與DNA的相互作用仍未報(bào)道，而且，由鈕的咔咯配合物引起的DNA氧化裂解機(jī)制仍不清楚。本論文要闡述鈕的咔咯

5、配合物一一5,10,15-三（4-竣基苯基）咔咯及其與ct-DNA的相互作用，以及通過凝膠電泳實(shí)驗(yàn)證明，在氧化劑的存在下，其對(duì)pBR322DNA的氧化裂解活性，所采用方法已顯示在方案1中。方案一鉆的5,10,15-三（4-竣基苯基）咔咯的合成實(shí)驗(yàn)所有購(gòu)買的試劑，均為分析純并且未經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。小牛胸腺DNA買自Sigma-Aldrich,pBR322DNA購(gòu)買自上海生工公司。三羥甲基甲氨（Trisbase）,澳化乙錠（EB）,氯化鈉，硼酸酸，二甲亞碉（DMSO）,30%過氧化氫（也。2）,瓊脂糖凝膠加樣緩沖液，和乙二胺四乙酸（EDTA）均來自購(gòu)買。所有水溶液由去離子水制備。小牛胸腺DNA的

6、儲(chǔ)液（貯存于4c和所用時(shí)間不超過5天），制備緩沖液I與ct-DNA溶液，ct-DNA的濃度根據(jù)其在260nm處的吸光度和摩爾消光系數(shù)值（6600M-1cm-1）進(jìn)行計(jì)算。若A260/A280介于1.8和1.9之間，說明該DNA溶液蛋白質(zhì)含量足夠低，無需做進(jìn)一步處理。緩沖溶液I（5mMTris/50mMNaCl,pH=7.2）,所有涉及到ct-DNA的實(shí)驗(yàn)均在該溶液中進(jìn)行。緩沖溶液II（50mMTris/18mMNaCl,pH=7.4）,配合物的核酸酶活性研究反應(yīng)在此溶液中進(jìn)行。緩沖溶液III（89mMTris/89mMH3BO3/2mMEDTA,pH=8.3）,凝膠的制備和電泳液均使用該TBE

7、電泳緩沖溶液。物理測(cè)量Hitachi（日立）3900H型紫外可見光譜儀；Hitachi（日立）F-4500熒光分光光度計(jì)；JASCO（日本分光）J-810圓二色光譜儀；烏氏粘度計(jì)；北京六一31-CN凝膠電泳儀；Bio-rad凝膠自動(dòng)成像分析儀。5,10,15-三（4-甲氧基染基-苯基）咔咯的合成在250mL圓底燒瓶中加入200mL甲醇/水（體積比1:1）,820mg4-（甲氧基染基）苯甲醛（5mmol）和670mg叱咯（10mmol）,完全溶解后加入2.1mL37%HCl（0.25mmol）溶液,室溫下攪拌反應(yīng)3h;反應(yīng)結(jié)束后用DCM萃取，收集有機(jī)相并水洗3次，用Na2SO4干燥后過濾,加入1

8、gDDQ反應(yīng)45min。按照方法一中步驟純化，得純凈產(chǎn)物220mg,產(chǎn)率達(dá)19%UV-Vis（CH2CI2）而ax:420,581,617,647nm;1HNMR（400MHz,CDCI3）占8.73（s,4H）,8.59（s,6H）,8.45(d,J=12Hz,4H),8.33(s,4H),8.18(s,2H),3.37(s,9H);ESI-MS(THF,negativem/z699.1M-H鈕(III)的5,10,15-三(4-甲氧基染基-苯基)咔咯的合成將5,10,15-三(4-甲氧基染基-苯基)咔咯(50毫克)溶于甲醇溶液(20毫升)中，混合物在乙酸鈕四水合物(100毫克)存在下在回流

9、下2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，然后用CH2cl2/H2O(200毫升，1:1)洗滌。有機(jī)相收集并用去離子水洗滌兩次。將粗產(chǎn)物通過色譜法純化(堿性氧化鋁，CH2cl2/CH3CN=100:5),通過氯仿/己烷結(jié)晶后得到綠色產(chǎn)物。產(chǎn)物產(chǎn)率為91%。UV-Vis(CH2cl2)加ax:414,427,595,648nm;MS(MALDI-TOF,negative)m/z:752.023M-H-.鈕(III)的5,10,15-三(4-竣基苯基)咔咯的合成將上述合成的竣酸酯咔咯金屬配合物溶解在100mL甲醇/THF(2:1)溶液中，加入6mL40%的氫氧化鉀水溶液，在40c下攪拌反應(yīng)，TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)度，

10、原料點(diǎn)完全消失后停止反應(yīng)，用5%鹽酸酸化后用THF/DCM/H2O(1:1:2)萃取，收集有機(jī)相并水洗3次，由Na2SO4干燥。減壓蒸儲(chǔ)后得到粗產(chǎn)物，以丙酮/正己烷(1:4)重結(jié)晶，得到純凈的5,10,15-三(4-竣基苯基)咔咯金屬配合物，產(chǎn)率為87%。UV-Vis(Tris-HClbufferI,pH=7.2)儲(chǔ)ax:402,432,656nm;MS(MALDI-TOF,negative)m/z709.981M-H-.DNA氧化裂解實(shí)驗(yàn)紫外一一可見光譜顯示Mn(III)咔咯配合物在Tris-鹽酸緩沖溶液是非常穩(wěn)定的，并且可以使用3天(圖S8)在緩沖溶液I中，Mn(III)咔咯配合物吸收滴定

11、使用3mL濃度為2X10-5mol?L-1的咔咯溶液，并且加入微升的ct-DNA溶液。連續(xù)加入DNA溶液并溫育5分鐘后，記錄其吸收值。熒光光譜測(cè)定了澳化乙錠(EB)-DNA系統(tǒng)的發(fā)光強(qiáng)度。在3mL含有5叱mol?L-1EB溶液和30仙mol?L-1DNA溶液的混合溶液中加入微升的濃縮咔咯配合物溶液，并進(jìn)行熒光光譜測(cè)定。每次加入Mn(III)咔咯配合物后記錄熒光光譜數(shù)據(jù)。所有樣本的激發(fā)光譜波長(zhǎng)為370nm,發(fā)射光譜在500-700nm處記錄。ct-DNA(1.5X10-4mol?L-1)的圓二色光譜測(cè)定時(shí)，在25c下，使用氮?dú)饬鞔祾咝鈨x，在1cm比色皿中，測(cè)定不加入以及加入不同濃度Mn(III

12、)咔咯配合物(r=0,0.1,0.2,0.5,其中r是Mn(III)咔咯配合物與ct-DNA的摩爾比)的數(shù)值。CD光譜以500nm/min掃描220600nm作為背景，之后所有樣品掃描后自動(dòng)扣除該背景。CD光譜記錄三次掃描的平均值。ct-DNA的CD譜的記錄作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)。黏度測(cè)定時(shí)采用烏氏粘度計(jì)，測(cè)定時(shí)將烏氏粘度計(jì)浸沒在30.0士0.1C的恒溫水浴槽中。加入不同濃度的混合溶液后(r=0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1其中r是Mn(III)咔咯配合物與ct-DNA的摩爾比)，恒溫培育5min后，使用秒表測(cè)得ct-DNA溶液流動(dòng)的5次時(shí)間并求平1均值。所得的相對(duì)粘度以。/”寸咔口#

13、與DNAS成的混合物進(jìn)行分析，其中和*分別為加入以及未加入樣品時(shí)的DNAf對(duì)黏度，又1照樣品在EB溶液中以相同方法處理。超螺旋pBR322DNA(0.1微克)的裂解反應(yīng)是在37C,體積為10口的緩沖液II中進(jìn)行的。pBR322DNA(0.1微克)的10微升混合以及，氧化劑和不同濃度的混合物在黑暗培育中30分鐘，然后加入2微升緩沖液。得到的反應(yīng)混合物通過瓊脂糖凝膠(1%)電泳進(jìn)行分析，以70V為參數(shù)電泳2h后將凝膠放入EB(1mg/L)中染色，用水沖洗去EB后放入凝膠成像系統(tǒng)中成像并分析。結(jié)果與討論DNA結(jié)合方式吸收光譜研究電子吸收光譜是最方便的為確定復(fù)合體和DNA之間結(jié)合的工具。DNA堿基對(duì)和

14、芳香族發(fā)色團(tuán)之間插入的結(jié)合方式通常導(dǎo)致較大的減色效應(yīng)和紅移現(xiàn)象。而外部結(jié)合的方式則會(huì)引起較小的減色現(xiàn)象和較弱的紅移。在ct-DNA存在下的Mn(III)咔咯配合物的吸收光譜的變化如圖1。在Mn(III)咔咯配合物溶液中加入ct-DNA導(dǎo)致7.6%增色和一個(gè)小的紅移(從432至435納米)。這一結(jié)果表明Mn(III)咔咯配合物與DNA的結(jié)合強(qiáng)弱為中等，二者應(yīng)該以外部結(jié)合的方式進(jìn)行作用。波長(zhǎng)/nm圖1Mn(III)咔咯配合物(2.0X10-5mol?L-1)與ct-DNA相互作用的UV-Vis光譜(pH=7.2,5mmol?L-1一-1-6-6-6Tris-HCland50mmol?LNaCl緩沖

15、溶牛丁加入ct-DNA溶遮濃度(1:0;2:2.010;3:4.010;4:6.01(X;5:-6-5-5-5-18.010;6:1.010X;7:1.210X;8:1.410mol?L).箭頭萬向是隨著ct-DNA溶收濃度增加吸收度變化Mn(III)咔咯配合物與DNA的內(nèi)在結(jié)合常數(shù)Kb可以根據(jù)從增加在432nm測(cè)定的吸光度的變化并使用吸收光譜滴定數(shù)據(jù)結(jié)合下列公式計(jì)算：D7A/(&Yf)=DNA.(b-f)+L及Yf)(1)式中，后是配合物與DNA結(jié)合時(shí)的摩爾消光系數(shù)，f和b分別為配合物未與DNA結(jié)合以及完全與DNA結(jié)合的摩爾消光系數(shù)。以DNA/|右-f|對(duì)DNA作圖，擬合直線的斜率與截距的比

16、值即為結(jié)合常數(shù)Kb。經(jīng)計(jì)算，Mn(III)咔咯配合物與DNA的內(nèi)在結(jié)合常數(shù)Kb為4.67X04L?mol-1。這一結(jié)合常數(shù)比鈕的陽(yáng)離子咔咯配合物小，但要大于鉆的磺化咔咯配合物。1IIII2463101214DNAx Wmoll -L-1)0X?至VNQ 一圖2是DNA/Ha-f|與DNA的關(guān)系圖熒光光譜研究無論與ct-DNA結(jié)合與否，鈕咔咯配合物并未在熒光光譜窗口中觀察到明顯熒光現(xiàn)象，為了研究鈕咔咯配合物與ct-DNA的結(jié)合，通過改變加入的咔咯配合物的濃度，進(jìn)而測(cè)得EB-DNA系統(tǒng)的熒光發(fā)射光譜。單獨(dú)的EB是一個(gè)弱熒光試劑，但當(dāng)它與DNA結(jié)合后，其發(fā)射光譜強(qiáng)度會(huì)大大增加。當(dāng)一些小分子加入EB-

17、DNA系統(tǒng)后，小分子可以取代EB,發(fā)光強(qiáng)度降低。EB與Mn(III)咔咯配合物結(jié)合后引起的熒光猝滅示于圖4?？梢钥闯?，一旦加入Mn(III)咔咯配合物，發(fā)射強(qiáng)度將會(huì)減小，這意味著加入Mn(III)咔咯配合物將會(huì)釋放EB。根據(jù)經(jīng)典的Stern-Wlmer方程：2o/T=l+svQ(2)式中，I0和I分別代表EB-DNA自身熒光強(qiáng)度以及與咔咯結(jié)合時(shí)的熒光強(qiáng)度，Q代表配合物的濃度，以Io/I對(duì)Q作圖，線性擬合的斜率即為Ksv。由圖四可知，MnIIITCPC的Ksv為7.22X104L?mol-1。這一結(jié)果與電子滴定譜結(jié)果相同，這兩類實(shí)驗(yàn)都證明MnIIITCPC與DNA以外部結(jié)合模式結(jié)合。600熒光強(qiáng)

18、度a.u.波長(zhǎng)/nm1S24303642圖3.EB與ct-DNA結(jié)合的發(fā)射光譜(pH=7.2,5mmol?L-1Tris-HCland50mmol?L-1NaCl緩沖溶液，r=MnIIITCPC/DNA,EB=5.0科mol?L-1,DNA=30mol?L-1,晟=370nm)箭頭表示隨著MnIIITCPC濃度增加熒光強(qiáng)度的變化圖四Io/I對(duì)咔咯濃度作的線性圖圓二色光譜研究在化合物與DNA結(jié)合時(shí)，圓二色光譜是一種高效的探究DNA形態(tài)改變的方法。ct-DNA一般顯示兩個(gè)峰，由于右旋螺旋性導(dǎo)致在246納米產(chǎn)生負(fù)峰值；由于基堆疊，在272納米產(chǎn)生正峰值。在DNA與小分子作用時(shí)，其圓二色光譜的觀測(cè)值的

19、改變通常與DNA結(jié)構(gòu)變化有關(guān)：簡(jiǎn)單的外部溝結(jié)合方式和化合物的靜電作用對(duì)基堆疊（272nm）和螺旋性（246nm）并沒有明顯的作用；而內(nèi)部插入方式會(huì)加強(qiáng)兩個(gè)波段的強(qiáng)度并且穩(wěn)定ct-DNA右手B的構(gòu)型。一般說來，還原嚇咻與ct-DNA的結(jié)合會(huì)導(dǎo)致圓二色光譜的減弱，這一特性被用來檢驗(yàn)還原口卜咻與DNA的結(jié)合方式：負(fù)ICD帶證明是內(nèi)部插入結(jié)合，而正ICD帶證明是外部勾結(jié)合。而雙功能結(jié)合模式（又稱混合模式），會(huì)產(chǎn)生一個(gè)正的ICD峰和一個(gè)負(fù)的ICD峰。隨MnTCPC濃度增加，DNA的圓二色光譜結(jié)果示于圖5。正峰和負(fù)峰都證明強(qiáng)度有明顯的減弱，并且當(dāng)MnTCPC濃度增加時(shí)，最大的峰值出現(xiàn)一個(gè)微小的紅移。然而，

20、當(dāng)MnTCPC與DNA結(jié)合時(shí)，無論是正的還是負(fù)的ICD帶都沒有觀測(cè)到。這些結(jié)果強(qiáng)有力的證明了外部結(jié)合方式。圓二色光譜同時(shí)說明當(dāng)ct-DNA與MnTCPC結(jié)合時(shí)，其結(jié)構(gòu)并沒有明顯改變。波長(zhǎng)/nm圖5.ct-DNA（1.5x10-4mol?L-1）的圓二色光譜（pH=7.2,5mmol?L-1Tris-HCland50mmol?L-1NaCl緩沖溶液，r=MnITCPC/DNA）,箭頭表示隨著MnTCPC濃度增加強(qiáng)度的變化黏度研究為了進(jìn)一步說明ct-DNA與MnTCPC的結(jié)合方式，同時(shí)進(jìn)行了黏度實(shí)驗(yàn)，這是在沒有結(jié)晶以及NMR數(shù)據(jù)的情況下，最明確也是最重要的方法來確定DNA的結(jié)合方式。通常情況下，當(dāng)

21、化合物以插入DNA時(shí)，DNA相鄰堿基對(duì)的距離會(huì)隨之變大，導(dǎo)致DNA雙螺旋伸長(zhǎng)，使DNA溶液的粘度增大；相反的，當(dāng)化合物以部分插入模式與DNA作用時(shí)，可能會(huì)使DNA的雙螺旋發(fā)生扭結(jié)，反而會(huì)導(dǎo)致DNA溶液黏度減??；而當(dāng)小分子化合物以靜電、溝面結(jié)合等非插入方式與DNA作用時(shí)，DNA溶液的黏度無明顯變化。當(dāng)加入MnTCPC后，DNA的黏度并沒有明顯變化（如圖6）,這說明MnTCPC與DNA以外部方式結(jié)合，這與光譜的結(jié)論一致。止匕外，內(nèi)消旋一四（4-竣基苯基）嚇咻（TCPP）已被報(bào)道與ct-DNA通過外部溝模式結(jié)合，其中TCPP內(nèi)的竣基和DNA堿基對(duì)之間氫鍵起主要作用。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及MnTCPC與TC

22、PP結(jié)構(gòu)的相似性，我們推斷出MnTCPC與ct-DNA結(jié)合方式也是外部溝模型圖 6. ct-DNATris-HCl and 50 mmol?L -1 NaCl 緩沖溶液)-1(pH =7.2,5 mmol?LpBR322DNA質(zhì)粒的氧化斷裂我們者B知道，在過氧化氫存在下，鈕的咔咯以及嚇咻配合物都能使DNA裂解。本文研究了在不同氧化劑存在下，例如過氧化氫，叔-BuOOH和KHSO5存在時(shí)，鈕咔咯配合物的核酸酶活性研究。我們使用瓊脂糖凝膠電泳研究pBR322DNA質(zhì)粒的裂解反應(yīng)。DNA鏈的斷裂發(fā)生在一條鏈還是兩條鏈上會(huì)相應(yīng)形成圓形（形式II）或者直線（形式III）。這兩種形式會(huì)慢于完整的超螺旋形式

23、（形式I）遷移，而圓形是遷移最慢的。圖7顯示了在過氧化氫，叔-BuOOH和KHSO5等氧化劑存在時(shí)，加入MnIIITCPC后，pBR322DNA質(zhì)粒的氧化斷裂。只有氧化劑（泳道2-4）和MnIIITCPC（泳道5）存在并未觀測(cè)到DNA的裂解，當(dāng)在DNA和過氧化氫或叔-BuOOH混合液中加入咔咯溶液后，從形式I和形式II可以看出DNA的裂解，同時(shí)，叔-BuOOH表現(xiàn)出更好的裂解活性（泳道6-7）。然而，加入KHSO5氧化劑后，并未發(fā)現(xiàn)DNA裂解。12345678形式I形式II圖7加入不同氧化劑MnmTCPC(15科mol?L1)對(duì)pBR322DNA(0.1科g)裂解結(jié)果(pH=7.2,50mmo

24、l?L-1Tris-HCland18mmol?L-1NaCl緩沖液).泳道1,DNA對(duì)照；泳道2,DNA+H2O2(20mol?L-1);Lane3,DNA+叔-BuOOH(20mmol?L-1);泳道4,DNA+KHSO5(150科mol?L);泳道5,DNA+MnTCPC;泳道6,DNA+H2O2(20mmol?L-1)+MnTCPC;泳道7,DNA+叔-BuOOH(20mmol?L-1)+MnTCPC;泳道8,DNA+KHSO5(150”ol?L)+Mn“TCPC形式I 形式n 形式出圖8顯示了在過氧化氫存在時(shí)，加入不同濃度MnTCPC后pBR322DNA質(zhì)粒的氧化斷裂情況。結(jié)果顯示隨著

25、MnTCPC濃度增加形式II增加（泳道4-8）。當(dāng)叔BuOOH作氧化劑時(shí)也觀察到類似結(jié)果。有趣的是，在過氧化氫或叔-BuOOH存在時(shí)，當(dāng)MnIIITCPC的濃度達(dá)到30微摩爾？L-1時(shí)，形式III出現(xiàn)。因此，該竣基鈕咔咯在叔-BuOOH或過氧化氫作為氧化劑時(shí)可以有效地切割DNA。12345678圖8在H2O2(20mmol?L-1)存在下，不同濃度Mn“TCPC對(duì)pBR322DNA(0.1g)氧化裂解(pH=7.2,50mmol?L-1Tris-HCland18mmol?L-1NaCl緩沖液).泳道1,DNA對(duì)照；泳道2,DNA+H2O2;泳道3,DNA+MnmTCPC(30科mol?L);泳

26、道4,DNA+H2O2+MnmTCPC(5mol?l);泳道5,DNA+H2O2+MnmTCPC(15科mol?L);泳道6,DNA+H2O2+MnmTCPC(30科mol?L;泳道7,DNA+H2O2+Mn田TCPC(45科mol?L;泳道8,DNA+H2O2+Mn田TCPC(60科mol?L).為了估計(jì)觀察到的線性化是否表示非隨機(jī)線性的過程，我們對(duì)雙鏈裂解進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。我們根據(jù)Poisson分布公式計(jì)算在反應(yīng)切段線性DNA和質(zhì)粒后單鏈斷裂（n1）和雙鏈斷裂（n2）的平均個(gè)數(shù)。根據(jù)FreiMnlder-Trumbo關(guān)系，通過隨機(jī)斷裂過程得到1個(gè)線型DNA至少需要120個(gè)超螺旋DNA,nn

27、2越小表示配合物使DNA發(fā)生雙鏈斷裂的活性越高。MnmTCPC的nn2值在10-16之間變化（表S1）,說明是一個(gè)非隨機(jī)斷裂過程。由于MnIIITCPC的竣基與DNA的堿基對(duì)之間的氫鍵作用，在發(fā)生一次斷裂后配合物分子仍然停留在斷裂位置的附近，并催化下一次裂解反應(yīng)的進(jìn)行。在這種情況下，MnIIITCPC的活化起了重要作用。為了探究裂解機(jī)制，我們使用更多的添加劑進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。加入DMSO（二甲亞碉）、叔丁醇、羥基自由基（?OH）對(duì)DNA裂解影響很小。NaN3和L一組氨酸會(huì)限制DNA裂解，單態(tài)氧（1O2）的作用也可以忽略不計(jì)。這些結(jié)果有力地表明該DNA裂解機(jī)制與任何羥基自由基或單線態(tài)氧無關(guān)。形式I形式

28、n2345678圖9在H2O2(20mmol?L-1)存在下,MntCPC(15科mol?L1)對(duì)pBR322DNA(0.1科g)氧化裂解(pH=7.2,50mmol?L-1Tris-HCland18mmol?L-1NaCl緩沖液).泳道1,DNA對(duì)照；泳道2,DNA+H2O2;泳道3,DNA+MnIIITCPC;泳道4,DNA+H2O2+MnIIITCPC;泳道5,DNA+H2O2+MnIIITCPC+DMSO(500mol?L1);泳道6,DNA+H2O2+MnmTCPC+M-BuOH(500mol?L);泳道7,DNA+H2O2+MnmTCPC+NaN3(50mmol?L-1);泳道8,DNA+H2O2+Mn田TCPC+L一組氨酸(50mmol?L-1)在叔-BuOOH存