人纖溶酶原Ｋ５體內(nèi)抑制Ｌｅｗｉｓ肺癌腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移

1、人纖溶酶原體內(nèi)抑制肺癌腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移     【摘要】  通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討人纖溶酶原 （）對(duì)小鼠肺癌移植瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的抑制作用?！痉椒ā?采用腋下接種腫瘤細(xì)胞的方法建立肺癌細(xì)胞皮下種植瘤小鼠模型，分為對(duì)照組和治療組，觀察各組腫瘤生長(zhǎng)情況，測(cè)量腫瘤大小，制備小鼠體質(zhì)量-時(shí)間曲線和腫瘤體積-時(shí)間曲線；采用皮下種植瘤剔除術(shù)建立肺癌自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型，術(shù)后分為對(duì)照組和治療組，觀察各組小鼠肺組織轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量，取肺組織進(jìn)行病理學(xué)分析?！窘Y(jié)果】 在皮下種植瘤模型中，與對(duì)照組相比，治療組小鼠腫瘤體積-時(shí)間曲線變化平緩，腫塊增長(zhǎng)緩慢，腫瘤質(zhì)量明顯降低分別為（

2、77; ） 和 （ ± ） ，；在肺癌轉(zhuǎn)移瘤模型中，治療組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)分別為（ ± ） 個(gè)和 （ ± ） 個(gè)，以及肺濕質(zhì)量明顯少于對(duì)照組，高倍鏡下治療組肺微轉(zhuǎn)移灶數(shù)目亦較少?！窘Y(jié)論】 人纖溶酶原能顯著抑制小鼠肺癌移植瘤的生長(zhǎng)，并能明顯抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。 【關(guān)鍵詞】  纖溶酶原 肺癌 腫瘤轉(zhuǎn)移： 【】 （） （） 【】 ， ， （） - - ， ， ， ， 【】 - ， （ ± ） ， （ ± ） ， ， - ， （ ± ± ， ） ， - 【】 ， ： ； ； 是人纖溶酶原（）分子中與血管抑素（）相連的另

3、一個(gè) 結(jié)構(gòu)域，是抗血管增生活性最強(qiáng)的纖溶酶原裂解片段。我們?cè)谝暰W(wǎng)膜血管增生大鼠模型以及兔角膜新生血管增生模型中觀察到能預(yù)防和阻斷新生血管形成，。由于 的高活性、高穩(wěn)定性以及在體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出的顯著效果，我們分析 應(yīng)具備潛在的抑制惡性腫瘤新生血管形成的作用，最近我們?cè)?肝癌皮下種植瘤模型上觀察到 能顯著降低腫瘤組織中微血管密度（ ）和抑制腫瘤生長(zhǎng)。為了進(jìn)一步探討 抗瘤作用機(jī)制，我們?cè)隗w外觀察了 對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接影響，發(fā)現(xiàn) 能明顯抑制多種腫瘤細(xì)胞株的遷移和侵襲。本研究在前期工作基礎(chǔ)上，在小鼠肺癌（ ， ）移植瘤模型和自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移模型上觀察體內(nèi)抗腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移作用，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 材料

4、與方法  主要試劑（）重組體由本課題構(gòu)建并保存，重組蛋白的獲取以及功能鑒定方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)；高糖培養(yǎng)基購(gòu)自公司；為天津?yàn)笊锕井a(chǎn)品；水合氯醛為天津市大茂化學(xué)試劑廠產(chǎn)品； 多聚甲醛、伊紅和蘇木素均購(gòu)自北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司。  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 級(jí) 周齡小鼠，雄性，體質(zhì)量 ，由中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，許可證號(hào)：（粵）-，粵監(jiān)證字。  細(xì)胞的體外培養(yǎng)與保存鼠源性細(xì)胞由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所趙清正教授惠贈(zèng)。細(xì)胞在含 的高糖培養(yǎng)基、 、   環(huán)境中培養(yǎng)，隔日換液， 傳代次。常規(guī)方法凍存和復(fù)蘇細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，常收集復(fù)蘇后細(xì)胞或處于對(duì)數(shù)

5、生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用生理鹽水重懸至細(xì)胞數(shù)為 × ，以 只的劑量接種于小鼠的方式保種。接種 后可形成大小約 腫塊，無(wú)菌條件下取瘤塊按參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行原代培養(yǎng)，染色觀察培養(yǎng)細(xì)胞純度，并收集培養(yǎng)細(xì)胞重新接種小鼠以證實(shí)其成瘤性。通過(guò)這種方法即可獲得生長(zhǎng)旺盛、體內(nèi)成瘤率高的腫瘤細(xì)胞。  細(xì)胞皮下種植瘤模型的建立及藥物處理 細(xì)胞皮下種植方式如前述。取接種腫瘤 后的荷瘤小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和處理組。處理組用藥總劑量為 ，將重組蛋白用無(wú)菌稀釋至所需濃度，每次腹腔注射 ，隔 給藥次，連續(xù)次，對(duì)照組每次注射 ，末次給藥后的第天處死小鼠。于接種腫瘤前記錄小鼠原始體質(zhì)量。接種后第天開(kāi)始每隔兩天記錄小鼠

6、體質(zhì)量、測(cè)量腫瘤大小，計(jì)算體質(zhì)量增長(zhǎng)率和腫瘤體積，公式分別為：體質(zhì)量增長(zhǎng)率（測(cè)定體質(zhì)量原始體質(zhì)量）原始體質(zhì)量 × ；腫瘤體積（ × ）（、分別為腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑）。處死小鼠后，剝?nèi)∧[瘤，稱瘤質(zhì)量。  細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型的建立及藥物處理參照等的實(shí)驗(yàn)方法，稍加改進(jìn)：取接種 的荷瘤小鼠（約 ），腹腔注射 水合氯醛 ，小鼠深度麻醉后遵守?zé)o菌原則分離出完整腫瘤，縫合前向皮下創(chuàng)面推加 青霉素（萬(wàn)單位），將小鼠轉(zhuǎn)移至清潔處，常規(guī)飼養(yǎng)。每天觀察小鼠狀態(tài)。小鼠復(fù)蘇后即隨機(jī)分為組和處理組。以無(wú)菌的為溶劑，按總劑量為 將重組蛋白適當(dāng)稀釋，隔 給藥次，連續(xù)次，每次腹腔注射 ，對(duì)照組以相同方式給 。于接