淺談中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的特點(diǎn)與常見問題

1、. . . . 淺談中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的特點(diǎn)與常見問題 周躍華(國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心, 100038)中藥新藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究是新藥研究的重要組成部分。中藥新藥是未曾在中國境上市銷售的中藥,主要包含新的有效成分、有效部位以與復(fù)方制劑等。其中,有效成分新藥的藥用物質(zhì)基本清楚；與化學(xué)藥類似,不同點(diǎn)是：中藥有效成分中的雜質(zhì)大多為主成分的結(jié)構(gòu)類似物,理化性質(zhì)與生物活性大多相似,故對限度控制的要求相對較低；有效部位新藥的原料藥中一般至少含有50%以上一樣結(jié)構(gòu)類型的有效成分,其余部分的成分大多不清楚,而中藥復(fù)方制劑是由多個原料經(jīng)提取加工制成的,其中有效成分大多不明確,且所含成分的種類多、含量

2、低,在對相關(guān)成分進(jìn)行分析時,分離難、干擾大。這些使中藥新藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究具有與化學(xué)藥不同的特點(diǎn)。1 中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的特點(diǎn)1.1 探索性1.1.1 相關(guān)基礎(chǔ)研究 如需明確特定中藥致含有哪些成分或哪些結(jié)構(gòu)類型的成分、該藥品中什么成分是可能的活性成分、什么分析技術(shù)和方法適合于中藥的成分分析等,這些工作屬新藥研究中基礎(chǔ)性研究的疇,也是探索性的工作。有了充分的相關(guān)基礎(chǔ)研究的支撐,才能建立起可控性較強(qiáng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。回顧中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的發(fā)展歷史,可以看出,是基礎(chǔ)研究建立起來的新技術(shù)、新方法、新指標(biāo)推動著中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的水平不斷提高。1.1.2 質(zhì)控指標(biāo)的選擇 選擇質(zhì)控指標(biāo)時需考慮以下問題：哪些成分與藥品

3、的安全性或有效性相關(guān)？擬分析成分是否具有代表性和專屬性？對照品是否能夠獲得、現(xiàn)有技術(shù)條件是否適合？需盡可能將質(zhì)控指標(biāo)與中藥的安全性與有效性關(guān)聯(lián)起來,不斷探索新的質(zhì)控指標(biāo)。如婦科腔道用固體制劑,可在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立pH 檢查項(xiàng),避免因藥物的酸堿性偏離正常生理狀態(tài)過多而產(chǎn)生不良影響。擬采用苷元類成分為質(zhì)控指標(biāo)的,需考察因苷類成分的不穩(wěn)定而帶來的影響。1.1.3 分析方法的研究 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分析方法的研究也是探索性的工作。中藥所含成分較復(fù)雜,需要根據(jù)產(chǎn)品的特點(diǎn)進(jìn)行研究,盡可能排除干擾,建立具專屬性的分析方法。從歷年來新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)所收載的分析方法看,紫外分光光度法、薄層掃描法等不斷減少,而高效液相色譜、氣

4、相色譜法不斷增加,中藥分析方法的專屬性與準(zhǔn)確性增強(qiáng)。同時,一些新的方法也在中藥分析中得到應(yīng)用,如用于多糖類成分的分子量與分子量分布檢查、用于注射劑的指紋圖譜等。1.1.4 生物學(xué)方法研究 近年來,為提高中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性,有人參考藥物活性篩選、體外藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)等方法,在生物效價用于中藥的質(zhì)量評價方面進(jìn)行了一些有益的探索。如有人采用對感染1 型單純皰疹病毒(HSV-1)的細(xì)胞保護(hù)作用等為指標(biāo),對中藥的生物效價進(jìn)行了考察1-2。氏等3采用縮宮素作為對照,以子宮平滑肌的收縮幅度為指標(biāo),建立了益母草制劑的生物檢定方法。此外,薄層色譜-生物自顯影(TLC-Bioautography)法是一種將薄

5、層色譜分離和生物活性測定相結(jié)合的藥物篩選方法,也有人嘗試用于中藥的質(zhì)量控制4。1.2 階段性1.2.1 藥物發(fā)現(xiàn)階段 需要參考相關(guān)文獻(xiàn),根據(jù)中藥中所含成分的理化性質(zhì),為工藝路線、工藝參數(shù)的選擇等提供初步的定量分析指標(biāo)和方法,此時的分析方法不要求非常準(zhǔn)確,一般不需進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。1.2.2 臨床前研究階段 需研究建立完整的臨床研究用藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),用于臨床用藥的質(zhì)量檢驗(yàn)與初步穩(wěn)定性考察。此時,應(yīng)進(jìn)行必要的方法學(xué)驗(yàn)證,并關(guān)注藥材質(zhì)量、工藝參數(shù)的變化對制劑質(zhì)控指標(biāo)的影響,關(guān)注藥效與毒理研究用樣品在質(zhì)控指標(biāo)上的差異,關(guān)注多批次中試樣品檢驗(yàn)結(jié)果的差異。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某些小的缺陷可以放在臨床研究期間完成,如某些

6、藥材的鑒別方法研究等。1.2.3 臨床試驗(yàn)階段 需在臨床試驗(yàn)用藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善,根據(jù)臨床研究與基礎(chǔ)研究進(jìn)展,對新發(fā)現(xiàn)的有效成分、毒性成分等進(jìn)行研究,并將其質(zhì)控方法補(bǔ)充到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。此時,應(yīng)關(guān)注臨床試驗(yàn)用樣品與藥效與毒理研究用樣品在質(zhì)控指標(biāo)上的差異,并注意觀察藥品的臨床療效與不良反應(yīng)與質(zhì)控指標(biāo)的相關(guān)性。1.2.4 批準(zhǔn)生產(chǎn)上市后 應(yīng)關(guān)注期臨床試驗(yàn)中臨床療效與不良反應(yīng)與質(zhì)控指標(biāo)的相關(guān)性；關(guān)注藥材質(zhì)量的波動對制劑質(zhì)量的影響；關(guān)注大規(guī)模生產(chǎn)后生產(chǎn)工藝參數(shù)與設(shè)備等的波動對質(zhì)控指標(biāo)的影響；必要時應(yīng)結(jié)合藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)(GMP)認(rèn)證與工藝驗(yàn)證工作,強(qiáng)化生產(chǎn)過程管理,并在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加質(zhì)控指標(biāo)

7、,以保證藥品質(zhì)量的穩(wěn)定。此外,還需要結(jié)合現(xiàn)代研究的進(jìn)展,采用新方法、新技術(shù)、新指標(biāo),不斷完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。1.3 針對性1.3.1 有效成分 中藥有效成分新藥是從動植物中提取的天然的單一成分,其含量大于提取物的90%。此類中藥質(zhì)量研究的重點(diǎn)在于：有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體、晶型(不同晶型的溶出行為、吸收程度等可能不同,溶解度低的成分需重點(diǎn)考察)等,口服固體制劑還需對溶出度等進(jìn)行考察。1.3.2 有效部位 中藥有效部位是從單一動植物中提取的一類或數(shù)類成分組成的,其有效部位的含量應(yīng)占提取物的50%以上。建議對提取物中構(gòu)成有效部位的成分進(jìn)行研究,如采用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)等方法,說明提取物中有效的一類或數(shù)類結(jié)構(gòu)類型的成

8、分含量之和大于50%。此外,還需對共存雜質(zhì)成分的性質(zhì)進(jìn)行研究,避免其對有效部位含量測定的干擾。1.3.3 復(fù)方制劑 中藥復(fù)方制劑所含成分復(fù)雜,且有效成分不夠明確,難以通過終點(diǎn)的質(zhì)量檢驗(yàn)來全面反映產(chǎn)品的質(zhì)量,需要研究建立藥材、中間體、制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),從影響藥品質(zhì)量的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)入手,進(jìn)行全過程的質(zhì)量控制。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中應(yīng)采用多種質(zhì)控指標(biāo),從不同的角度、不同的層面反映藥品的質(zhì)量。除對單一成分進(jìn)行控制外,還需要對多成分進(jìn)行整體的質(zhì)量控制(如指紋圖譜、生物學(xué)方法等),并盡可能選擇與有效性、安全性相關(guān)聯(lián)的指標(biāo)。1.4 關(guān)聯(lián)性1.4.1 與藥材的關(guān)聯(lián) 藥材的質(zhì)量與制劑密切相關(guān),只有采用質(zhì)量穩(wěn)定的藥材投料,才

9、能保證不同批次中藥制劑質(zhì)量的穩(wěn)定。在中藥新藥的研究中,建議固定藥材產(chǎn)地、采收期與質(zhì)量要求等,并完善藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。如當(dāng)制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立某成分的質(zhì)控項(xiàng)目時,需在相關(guān)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加相應(yīng)的項(xiàng)目。1.4.2 與工藝的關(guān)聯(lián) 工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究密切相關(guān),如采用水提工藝的制劑,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)以水溶性成分為含量測定指標(biāo),若以脂溶性成分為指標(biāo)會使提取的目標(biāo)物與質(zhì)控對象錯位,使質(zhì)控失去意義。復(fù)方中藥制劑采用多個工藝路線的,應(yīng)分別建立質(zhì)控指標(biāo)。如采用有機(jī)溶劑萃取的工藝,需要在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立有機(jī)溶劑殘留量的檢查方法。1.4.3 與有效性的關(guān)聯(lián) 對于中藥有效成分以與有效部位新藥,應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立有效成分或有效部位

10、的含量測定項(xiàng),并規(guī)定其合理的含量圍,以保證制劑的有效性。對于有效成分不明確的中藥復(fù)方制劑,可在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立指標(biāo)成分的質(zhì)控方法,以保證不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的相對穩(wěn)定,從而保證藥品有效性的相對穩(wěn)定。1.4.4 與安全性的關(guān)聯(lián) 對于含明確毒性成分的中藥,應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立毒性成分的質(zhì)控方法,并規(guī)定其合理的限度,以保證臨床用藥的安全性。對于既有毒又有效的成分,需在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其合理的含量圍,使其在發(fā)揮藥效的同時保證用藥的安全性。2 存在的問題與對策2.1 質(zhì)控指標(biāo)的選擇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中質(zhì)控指標(biāo)選擇的常見問題是：質(zhì)控指標(biāo)與藥品的安全性、有效性脫鉤；質(zhì)控指標(biāo)的專屬性較差。質(zhì)量控制應(yīng)盡量選擇與藥品的安全性、有效性

11、相關(guān)的指標(biāo)。若有效成分或毒性成分明確,并具備檢測條件的,可在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立相應(yīng)成分的質(zhì)控方法,如士的寧、烏頭堿、芍藥苷、黃芩苷等；若有效成分或毒性成分明確,但不具備檢測條件的,可將理化性質(zhì)相似的指標(biāo)成分作為質(zhì)控指標(biāo),如風(fēng)濕定膠囊處方中八角楓所含毒黎堿難以獲得對照品,可測定總生物堿含量；若有效成分與毒性成分均不明確,可考慮結(jié)合工藝、處方藥味等選擇有代表性的指標(biāo)成分為質(zhì)控指標(biāo),如水提工藝的可選擇極性大的指標(biāo)成分,醇提工藝的可選擇極性小的指標(biāo)成分,同時應(yīng)考慮優(yōu)先測定君臣藥所含成分。此外,還可以采取其他的質(zhì)控方法,如治療胃潰瘍胃酸過多的中藥,可以將制酸力檢查列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),將藥品制酸的作用大小與體外消耗

12、鹽酸的量關(guān)聯(lián)起來。質(zhì)量控制指標(biāo)也可采用與安全性、有效性相關(guān)的生物學(xué)方法。 質(zhì)量控制指標(biāo)應(yīng)具有專屬性。如綠原酸廣泛存在于多種植物中,據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),有20 多種藥材含有綠原酸,如吳茱萸、金銀花、貫葉連翹、烏骨藤、菊花、杜仲、忍冬藤、蒲公英、桑葉、石韋、茵、小薊、白茅根、紅毛五加、烏梅、杏香兔耳風(fēng)等。如果在含有以上藥材的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中都以綠原酸為質(zhì)控指標(biāo),不考慮綠原酸與適應(yīng)癥的關(guān)聯(lián),就很可能使質(zhì)控指標(biāo)偏離藥品的有效性,并降低質(zhì)控的專屬性。需根據(jù)品種的特點(diǎn)進(jìn)行研究,如百令膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中,建立了對照藥材、腺苷、尿苷同時對照的色譜鑒別方法,提高了質(zhì)控的專屬性。2.2 含量測定限度的確定 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量

13、測定限度確定的常見問題有：限度確定考慮的因素不全面、限度確定不合理、限度表述不規(guī)等。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有效成分或指標(biāo)成分含量限度的確定,一般需考慮以下因素：臨床用藥的要求、確定工藝條件下的轉(zhuǎn)移率、藥材中的含量、成分的穩(wěn)定性、多批中試產(chǎn)品的實(shí)際含測數(shù)據(jù)等。對于生物活性較強(qiáng)的成分,建議規(guī)定其合理的含量圍,以保證臨床用藥的安全性和有效性。在確定的工藝條件下,中藥成分的轉(zhuǎn)移率應(yīng)基本穩(wěn)定。藥材中相應(yīng)成分的含量狀況直接影響到制劑的含量高低,需在研究的基礎(chǔ)上,確定適宜的產(chǎn)地、采收期、質(zhì)量要求等,并采用與大生產(chǎn)要求一樣的藥材進(jìn)行中試研究,以此為確定限度的參考。對于穩(wěn)定性相對較差的成分,應(yīng)關(guān)注擬定包裝材料與貯存條件

14、下的穩(wěn)定性考察結(jié)果。如丹參酚酸在一定條件下會轉(zhuǎn)變?yōu)榈⑺?若在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定丹參素含量的低限,難以真實(shí)反映藥品的穩(wěn)定性,所以,應(yīng)規(guī)定丹參素的合理含量圍。 目前,大多數(shù)中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測定項(xiàng)下,僅規(guī)定有效成分或指標(biāo)成分的含量低限,若能夠在中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其含量的上下限,將有利于保證不同批次藥品質(zhì)量的相對穩(wěn)定。當(dāng)然,中藥復(fù)方制劑中,有效成分或指標(biāo)成分含量限度圍可以根據(jù)具體情況適當(dāng)放寬。在實(shí)際生產(chǎn)中,可以采用加強(qiáng)藥材質(zhì)量控制、藥材混批勾兌投料、強(qiáng)化生產(chǎn)過程管理等方式,減少不同批次藥品質(zhì)量的波動。2.3 分析方法研究2.3.1 鑒別試驗(yàn) 鑒別研究的常見問題是鑒別藥味數(shù)少,鑒別方法

15、的專屬性較低。研究中有的未嚴(yán)格按制法制備陰性樣品,難以排除處方中其他藥味的干擾；有的顯微鑒別特征不明顯。此外,大多未對與鑒別藥味一樣科屬的其他藥材或混淆品進(jìn)行比較研究,建立的鑒別方法難以對處方藥味與同科屬藥材或混淆品進(jìn)行區(qū)分,建議進(jìn)行比較研究,找出特定藥味的特征,提高鑒別的專屬性。2.3.2 含量測定 由于中藥成分復(fù)雜,在采用高效液相色譜、氣相色譜等方法進(jìn)行含量測定研究時,需對待測成分的峰純度進(jìn)行檢查,以避免可能的干擾。分光光度法目前多用于有效部位類成分的含量測定,該方法應(yīng)用中應(yīng)加強(qiáng)樣品的前處理,合理選擇陰性樣品,盡可能排除其他成分的干擾。如待測成分為總黃酮的,可用聚酰胺柱處理；為總生物堿的,

16、可用離子交換樹脂處理。此外,總多糖的含量測定應(yīng)排除單糖的干擾；采用定氮法進(jìn)行總蛋白的含量測定時,也應(yīng)排除非蛋白氮的干擾。2.3.3 方法驗(yàn)證 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中需要進(jìn)行驗(yàn)證的分析方法有：鑒別試驗(yàn)、限量檢查、含量測定,以與其他需控制成分(如殘留物等)的測定。中藥制劑的溶出度等檢查中,其溶出量等檢測方法也應(yīng)做必要的驗(yàn)證。此外,微生物限度檢查、無菌檢查等,必要時也應(yīng)進(jìn)行方法驗(yàn)證。2.3.4 自檢與省所復(fù)核 我們曾統(tǒng)計(jì)過121 個申請注冊中藥品種的自檢含量測定數(shù)據(jù)與同批號樣品的省所復(fù)核數(shù)據(jù),并對二者的差異進(jìn)行了分析。采用的指標(biāo)為自檢與省所復(fù)核數(shù)據(jù)的偏差程度(n)(2x1x2/x)100%(x1：省所復(fù)核數(shù)據(jù)；2：自檢數(shù)據(jù)；x：省所復(fù)核數(shù)據(jù)x1與自檢數(shù)據(jù)x2 之和)。結(jié)果,n5 的品種數(shù)為40 個,