培養(yǎng)基母液的配制方法

1、頁(yè)眉內(nèi)容培養(yǎng)基母液的配制方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解無(wú)菌操作2.掌握培養(yǎng)基母液的配制方法二、實(shí)驗(yàn)原理配制培養(yǎng)及時(shí)，為了使用方便和用 量準(zhǔn)確，通常采用母液法進(jìn)行配制，即將所選培養(yǎng)基配方中各試劑的用量，擴(kuò) 大若干倍后再準(zhǔn)確稱量，分 別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí) 按比例吸取母液進(jìn) 行稀釋配制即可。三、實(shí)驗(yàn)器材和藥品 器材：電子天平、燒杯、容量瓶、細(xì)口瓶、藥勺、玻璃棒、 電爐。藥 品：NH4N0、KN03CaCI2 2H20 MgS04 7H2QH3B03KH2P0、 KI、MnS044H20 ZnS047H20Na2Mo04?H20 CuS045H20CoCI26H20FeS04 7H20

2、 Na2-EDTA2H20肌醇、煙酸、鹽酸毗哆醇（維生素B6）、鹽酸硫胺素（維生素B1）、甘氨酸。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、大量元素母液的配制各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大10倍用天平稱取，用蒸憾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸憾水定容到1000ml的容量瓶中,即為10倍的大量元素母液。到入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配1L培養(yǎng)基取此液100ml O表1 MS培養(yǎng)基大量元素母液制備序號(hào)藥品名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大10稱量(mg)1NHN01650165002KN01900190003CaC12 2H2C44044004MgSO. 7H2C37037005KHPO1701700

3、注意:(1)配制大量元素母液時(shí)，某些無(wú)機(jī)成分如Ca2+ S042-、Mg 2+和H2P04-等在一起可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時(shí)要用純度高的重蒸憾水溶解，藥品采用等級(jí)較高的分析純，各種 化學(xué)藥品必須先以少量重蒸館水使其充分溶解后才能混合，混合時(shí)應(yīng)注意先后順 序。特別應(yīng)將Ca2+、S042、Mg2十和H2P04 一等離子錯(cuò)開混合，速度宜慢， 邊攪拌邊混合。(2)CaCI2 - 2H20要在最后單獨(dú)加入，在溶解CaCI2 2H20時(shí)，蒸館水需加熱沸騰，除去水中的C02以防沉淀。另外，CaCI2 - 2H20放入沸水中易沸騰，操作時(shí)要防止其溢出。2、微量元素母液的配制M

4、S培養(yǎng)基的微量元素?zé)o機(jī)鹽由7種化合物(除Fe )組成。微量元素用量較少，特 別是CuS04- 5H20 CoCI2 - 6H20,因此在配制中分微量I、n配制。按照表2,表3配方，用電光天平稱量，其它同大 量元素。配制 培養(yǎng)基時(shí)，每配制1L培養(yǎng)基，取微量I lOml,微量H擴(kuò)大10000倍稱序號(hào)表20. Imlo序號(hào)化合物名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大100倍稱量(mg)1MnSO- 4h2022322302ZnSO 7H08.68603HBO6.26204KI0. 83835NaMoO 2H00 2525MS培養(yǎng)基微量n的配制化合物名稱培養(yǎng)基濃度MS培養(yǎng)基微量I的配制(mg/L)量(mg)1

5、CuSO 5H200. 0252502C0CI2 - 6H200 025250用完以后，用吸耳球注意:使用電子分析天平時(shí)注意不要把藥品撒到稱盤上, 將天平內(nèi)的臟物清理干凈。3、鐵鹽母液的配制鐵鹽不是都需要單獨(dú)配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即 可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合 物，必須單獨(dú)配成母 液。這種螯合物使用起來(lái)方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直 接用蒸鐳水加熱攪拌溶解，定容至ILo配制培養(yǎng)基時(shí)，配制1L取此液lOnil。表4 MS鐵鹽母液的配制序號(hào)化合物名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大100倍稱量(mg)1Na-EDTA37.337302

6、FeSO 7H2027.82780注意:在配制鐵鹽時(shí)，如果加熱攪拌時(shí)間過短，會(huì)造成FeS04和Na2-EDTA鰲合不徹 底，此時(shí)若將其冷藏，F(xiàn)eS04會(huì)結(jié)晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液 時(shí)，F(xiàn)eS04和Na2-EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌 至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調(diào)pH值至55,室溫放置冷卻 后，再冷藏。4、有機(jī)母液的配制MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸毗哆素。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨(dú)配制。配制直接用蒸憾水溶解，定容至1L,注意稱量時(shí)用電子分析天平。配制培養(yǎng)基時(shí),每配1L培養(yǎng)基取此液5nil。被菌類

7、污染的維生注意:由于維生素母液營(yíng)養(yǎng)豐富，因此貯藏時(shí)極易染菌。素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避 免此現(xiàn)象 發(fā)生的方法是：配制母液時(shí)用無(wú)菌重蒸館水溶解維生素，并貯存在棕色無(wú)菌瓶 中，或縮短貯藏時(shí)間。MS培養(yǎng)基有機(jī)物質(zhì)母液的制備序號(hào)化合物名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大200倍稱量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003鹽酸硫胺素(Vbi)051004鹽酸毗哆素(Vb6)0.51005煙酸051005、激素母液配制植物組織培養(yǎng)中使用的激素種類及含量需要根據(jù)不同的研究目的而 定。一般激 素母液的配制的終濃度以0. 5mg/m 1為好，需要注意的是：(1)配制生長(zhǎng)素類, 例如IAA、NAA 24-D、6BA應(yīng)先用少量95沱醇或無(wú)水乙醇充