雄黃的研究進(jìn)展(1)

1、雄黃的研究進(jìn)展(1)        【摘要】 綜述了雄黃的化學(xué)成分、炮制工藝、藥代動力學(xué)、藥理作用、臨床應(yīng)用及毒副反應(yīng)，并對雄黃的制劑工藝進(jìn)行了展望。 【關(guān)鍵詞】 雄黃; 化學(xué)成分； 炮制工藝； 藥理作用； 臨床應(yīng)用    雄黃是中醫(yī)內(nèi)治外用常用藥之一，最早收載于神農(nóng)本草經(jīng)，距今已有幾千年歷史。雄黃又名石黃,其性辛溫、味苦,有毒。2005年版中國藥典收載含雄黃的中成藥共26種，約占藥典成方總數(shù)的4.6%1。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為雄黃具有解毒、殺蟲、燥濕、祛痰、截瘧等功能。自20世紀(jì)50

2、年代以來，國內(nèi)醫(yī)者將含雄黃的復(fù)方制劑或單方用于治療血液系統(tǒng)疾病、惡性淋巴系統(tǒng)疾病甚至實體瘤，取得了明顯的治療效果，引起人們廣泛的關(guān)注。本文就雄黃的化學(xué)成分、炮制工藝、藥理作用機制、臨床應(yīng)用及毒副作用進(jìn)行綜述。1 化學(xué)成分    雄黃的主要化學(xué)成分是As4S4 或As2S2，另外還含有少量三氧化二砷(As2O3)及五氧化二砷(As2O5)。長期以來，關(guān)于雄黃的主要成分的討論一直沒有中斷，2000版中國藥典規(guī)定雄黃的主要成分為As2S2，其含量不得少于90%。梁國剛等2認(rèn)為雄黃的主要成分是As4S4，只有在550800時才分解成As2S2。陳憲平等3利用電鏡

3、&-能譜儀對雄黃進(jìn)行分析，掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，雄黃為柱狀晶體或不規(guī)則晶體；能譜儀測定發(fā)現(xiàn)，雄黃中的主要元素為砷和硫，其中砷與硫的重量百分比為1.27:1。2 炮制工藝    由于雄黃在臨床上的特殊功效及其毒性反應(yīng)，自古就很重視它的炮制處理，僅古籍記載就有十余種4。其中，使用歷史較久的是漢代的干研法和宋代的水飛法5。1990年及1995年版藥典的炮制方法為將雄黃粗品研成細(xì)粉或水飛,可以保留某些可溶性成分。而2000年版藥典規(guī)定應(yīng)將可溶性成分全部除去,只剩下不溶于水的As2S2，并且規(guī)定了雄黃不得顯示游離砷反應(yīng)。但大量的研究表明，As2O3在治療

4、白血病等血液系統(tǒng)疾病時可有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，提示雄黃的毒性成分可能是它的有效成分之一；另外，陸道培等6 也研究發(fā)現(xiàn)As4S4同樣對腫瘤細(xì)胞有抑制作用，但難溶性As4S4藥理活性的發(fā)揮需要一個更長的過程，在解決難溶性雄黃的生物利用度問題上，王曉波等7采用球磨法制備納米級雄黃粉體，發(fā)現(xiàn)納米雄黃與傳統(tǒng)雄黃比較，生物利用度等方面具有明顯優(yōu)勢。寧凝等8采用溶劑接力法制備雄黃納米混懸液有誘導(dǎo)HL-60和K562細(xì)胞凋亡和壞死的雙重作用。詹秀琴等9應(yīng)用微射流法制備超細(xì)微雄黃顆粒與水飛法、氣流粉碎制備的雄黃顆粒從粉體表征、藥代動力學(xué)參數(shù)、體內(nèi)外抑瘤作用等方面進(jìn)行了比較，得出微射流法制備的超細(xì)微雄黃顆粒優(yōu)于

5、其它兩種方法。3 藥化動力學(xué)    雄黃為砷類礦物中藥，砷作為微量元素存在于正常人體內(nèi)。砷在生物體內(nèi)的存在形式主要包括四類：無機砷、有機砷小分子、砷的有機化合物、含砷的生物大分子1012。程增江等13對Wistar大鼠持續(xù)5周灌胃不同劑量的雄黃，結(jié)果顯示，大鼠灌服雄黃后攝入的砷幾乎在所有組織器官中都有分布。其中，砷在血液中的蓄積量最高。汪金華等14研究正常大鼠和腦缺血大鼠在灌胃服用安宮牛黃丸的實驗結(jié)果中顯示，砷在正常和腦缺血大鼠的體內(nèi)分布未見明顯差異，從而推斷As2S2在體內(nèi)未被吸收，實驗中檢出的砷可能來自雄黃中少量的可溶性砷。汪寶琪等15測定了六神丸和

6、牛黃清心丸中砷在家兔體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù),發(fā)現(xiàn)復(fù)方中的砷在體內(nèi)吸收速度快，消除速度極慢，同時還發(fā)現(xiàn)砷的分布在心、肺中的含量高于肝、腎含量。湯毅珊等16將安宮牛黃丸及復(fù)方中的單味藥與雄黃混合用人工胃液處理，測得的可溶性砷含量均比單味雄黃在人工胃液中的溶出量低。鐵步榮等17對健康志愿者服用牛黃解毒片后尿砷濃度檢測表明雄黃經(jīng)腎臟由尿液排出體外的量很少可能大部分由糞便排出。房圣民等18報道家兔經(jīng)陰道連續(xù)7 d給藥僅在肝和脾臟中檢測到少量的砷。Cui X等19研究發(fā)現(xiàn)砷在膽汁和尿中的排泄形式受給藥途徑、劑量和化學(xué)形態(tài)的影響，其中GSH起重要作用。由于藥物進(jìn)入機體后，其變化是一個復(fù)雜的過程，難溶性雄黃在含有大

7、量酶的體液環(huán)境中可以溶解，在酶催化下進(jìn)行氧化還原、生物甲基化等生物合成，產(chǎn)生亞砷酸、砷酸、甲基胂酸、二甲基胂酸等物質(zhì)。由此可見，體外可溶的As2O3和難溶的As4S4進(jìn)入體內(nèi)后，都可以進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，發(fā)揮其藥理作用。4 藥理作用4.1 抗腫瘤作用4.1.1 雄黃誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡鐘璐等 20，21，郝紅纓等22 應(yīng)用雄黃作用于NB4細(xì)胞，使PML融合蛋白降解, 快速調(diào)變PML-RAR融合蛋白的亞細(xì)胞定位。劉延方等23將As2S2處理NB4細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3酶活性增加,突變型p53蛋白表達(dá)下降。caspase的活化級聯(lián)形式是砷劑誘導(dǎo)凋亡的重要通路。陳思宇等24研究雄黃作用于K562細(xì)

8、胞后， Bax蛋白表達(dá)量增加,其凋亡機制可能與Bax上調(diào)有關(guān)。經(jīng)雄黃作用后的耐藥K562ADM細(xì)胞,細(xì)胞攝取DNR的量增加,從而增加了DNR的細(xì)胞毒性作用,并且使Bcl-2和P-gP顯著下調(diào)25。另外，As2S2能增加K562及K562ADM細(xì)胞膜HSP70蛋白表達(dá),且與時間及濃度成正相關(guān),從而影響細(xì)胞凋亡26。高曉東等27用雄黃作用HL-60/ADR細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)雄黃可抑制HL-60/ADR細(xì)胞生長,逆轉(zhuǎn)其耐藥性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且與劑量呈依賴性,其機理可能與P- gP表達(dá)下降有關(guān)。顧春紅等28應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片研究，推測細(xì)胞骨架和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的改變可能參與As2S2促進(jìn)U937細(xì)胞凋亡的過程。張晨等

9、29將雄黃處理Raji細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生染色質(zhì)凝集、核固縮和核碎裂,FCM檢測此細(xì)胞處于G2/M期阻滯。李靜等30用不同濃度雄黃作用于K562細(xì)胞發(fā)現(xiàn)雄黃可顯著抑制細(xì)胞端粒酶活性和細(xì)胞增殖,并呈劑量相關(guān)，端粒酶活性下降是雄黃誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的機制之一。4.1.2 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞成熟、分化陳思宇等31研究發(fā)現(xiàn)，雄黃對NB4細(xì)胞有不完全的分化誘導(dǎo)作用。表現(xiàn)為部分細(xì)胞出現(xiàn)核凹陷、核漿比例減少,酷似中、晚幼粒細(xì)胞,但細(xì)胞不向末端分化。4.1.3 抑制腫瘤細(xì)胞核酸的合成、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長及直接殺瘤作用周靄祥等32用青黃散治療白血病時發(fā)現(xiàn)青黃散對L615，S180細(xì)胞的DNA，RNA合成有不

10、同程度的抑制作用，且藥物與細(xì)胞作用存在量效關(guān)系。Deng Y等33研究相同劑量的四種不同尺寸(100500 nm)的雄黃對臍血管內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。徐輝碧等34從荷瘤種鼠抽取S180腹水瘤細(xì)胞,使用不同粒徑不同劑量的雄黃混懸液進(jìn)行體外培養(yǎng)研究,發(fā)現(xiàn)雄黃對S180腫瘤細(xì)胞具有毒殺作用。 4.1.4 增加細(xì)胞膜HSP70及MT蛋白表達(dá)湯毅珊等35將雄黃和安宮牛黃散分別灌胃于SD大鼠試驗中,發(fā)現(xiàn)用藥后8 h大鼠腦組織內(nèi)的HSP70mRNA表達(dá)顯著高于正常對照組,并能抑制外傷性腦水腫模型大鼠血清中炎性細(xì)胞因子TNF-的釋放。張晨等26采用流式細(xì)胞儀測定經(jīng)硫化砷處理的K562

11、細(xì)胞和耐藥細(xì)胞K562ADM細(xì)胞膜HSP70蛋白表達(dá)及細(xì)胞凋亡, 發(fā)現(xiàn)硫化砷能增加細(xì)胞膜HSP70蛋白表達(dá)，而其細(xì)胞凋亡率與膜HSP70的表達(dá)成一定的相關(guān)性,這種改變可能對細(xì)胞凋亡率產(chǎn)生一定影響。Romach EH.等36研究表明,砷使鼠肝內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)的MT基因表達(dá)增高,使細(xì)胞對砷的耐受性比對照組細(xì)胞增加2.5倍。Shimizu m.等37證實MT的表達(dá)在拮抗砷毒性及激活原癌基因中起重要作用。Susanto I等38研究表明砷誘導(dǎo)細(xì)胞MT量的增加不受細(xì)胞內(nèi)水平的影響且MT的抗砷毒性比GSH更重要。4.2 抗菌、抗病毒作用雄黃具有廣泛的抗菌譜，如對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色鏈珠菌、痢疾桿菌、結(jié)核

12、桿菌等有較強的抗菌作用?？涤赖?9對雄黃體外抑菌效果進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)雄黃對金黃色葡萄球菌有非常明顯的抑制作用。同時進(jìn)行了雄黃對白細(xì)胞及網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能影響的研究，表明雄黃能增強內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）的吞噬能力，且不影響白細(xì)胞總數(shù)及分類，提高機體非特異性免疫功能。另外，雄黃及含雄黃復(fù)方治療帶狀皰疹等病毒性皮膚感染與其具有解疫毒，燥濕祛風(fēng)等作用有關(guān)。一過性細(xì)胞凋亡可能是控制細(xì)胞中病毒復(fù)制的普遍機制40。5 毒副反應(yīng)    雄黃是一種含砷的化合物，在以往的研究中，關(guān)于砷及其化合物的作用和危害已有了一定的認(rèn)識。國內(nèi)早已出現(xiàn)了有關(guān)其毒性的文獻(xiàn)報道4143。砷是一

13、種細(xì)胞原漿毒，進(jìn)入機體后作用于酶系統(tǒng),可抑制含巰基酶的活性,阻止細(xì)胞的氧化和呼吸,嚴(yán)重干擾細(xì)胞代謝、染色體結(jié)構(gòu)、核分裂等。受影響的重要酶系統(tǒng)有丙酮酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶、磷酸酯酶、細(xì)胞色素氧化酶、脫氧核糖核酸聚合酶、白介素1轉(zhuǎn)化酶（ICE）等。砷可致中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺氧和功能紊亂,引起惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉；砷對腎臟也有損害作用，李國明等44用雄黃給小鼠灌胃5周，發(fā)現(xiàn)低劑量組對腎臟損害不明顯，而高劑量組對腎臟損害較為嚴(yán)重，腎小球充血較明顯，細(xì)胞數(shù)增多，腎小囊腔明顯狹窄，囊壁增厚，并有少量新月體形成。另外，砷可引發(fā)貧血及砷角化病等45，長期大量使用雄黃可致突變，致癌，致畸46。6 臨床應(yīng)用 

14、;   臨床實踐表明，含雄黃復(fù)方常外用治療病毒性皮膚感染、銀屑病、小兒腮腺炎、乳癰、尖銳濕疣，療效顯著。含雄黃的復(fù)方制劑或單方用于治療血液系統(tǒng)疾病、惡性淋巴系統(tǒng)疾病也取得了一定療效。另外，近期的一項研究表明，雄黃有望用于治療膠質(zhì)瘤47。7 展望    通過上述綜述，使我們了解到雄黃不僅可以通過各種不同途徑抑制腫瘤細(xì)胞生長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時還可以增強機體的非特異性免疫功能，提高機體抗菌和抗病毒能力。另外，雄黃對機體的毒性作用除與使用劑量有關(guān)外，還與給藥途徑、用藥時間、存在狀態(tài)及與其他物質(zhì)的拮抗或協(xié)同作用等有關(guān)。盡管人們對

15、于雄黃的藥用機理認(rèn)識仍不十分清楚,但近年來雄黃及其復(fù)方應(yīng)用于惡性血液病治療中已取得了肯定的臨床療效，相應(yīng)的基礎(chǔ)研究也展示了其廣闊的應(yīng)用前景。雄黃進(jìn)入體內(nèi)如何降低其毒性，發(fā)揮其最佳生物學(xué)效應(yīng)是我們目前亟待解決的關(guān)鍵。隨著高科技的引入，我們相信只要充分利用現(xiàn)代制劑手段如納米科技，并按國際標(biāo)準(zhǔn)的要求全面提高中藥的質(zhì)量和水平，使其成為質(zhì)量穩(wěn)定可控、療效可靠、制劑精良的現(xiàn)代中藥，雄黃必將在今后的臨床應(yīng)用過程中發(fā)揮更大的作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國家藥典委員會.中國藥典,部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:307.2梁國剛,張啟偉.朱砂、雄黃中各成分的溶解度對其藥效、毒副作用的影響J.中國中藥雜志，2002,

16、27(5):392.3陳憲平,趙武生,陳 進(jìn). 雄黃雌黃的電鏡-能譜儀分析J.中草藥，1999,30(6):435.4張靜修,原恩道,張廣強，等.中藥雄黃炮制沿革研究J.中國中藥雜志,1987,12(3):18.5中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.全國中藥炮制規(guī)范S.北京:人民衛(wèi)生出版社,1988:400.6陸道培,邱鏡瀅,陳珊珊,等.口服雄黃治療急性早幼粒細(xì)胞白血病66例J.中國實驗診斷學(xué),1998,2(6):319.7王曉波,襲榮剛,張治然,等.納米級雄黃粉體藥代動力學(xué)研究J.解放軍藥學(xué)學(xué)報,2002,18(6):324.8寧 凝,彭作富,袁 蘭,等.雄黃納米微粒對白血病細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡及壞死

17、作用J.中國中藥雜志.2005,30(2): 136.9詹秀琴，趙鳳鳴，郭立偉. 超細(xì)微雄黃顆粒的藥化動力學(xué)研究及抑瘤作用比較J.實用中醫(yī)藥雜志，2006,22（7）:397.10杜貴友.有毒中藥現(xiàn)代研究與合理應(yīng)用S.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:361.11王 夔.生命科學(xué)中的微量元素，第2版S.北京:中國計量出版社,1996:817.12歐陽津,時 彥,張新榮,等.液相色譜分離-氫化物原子吸收測定血清中不同形態(tài)的有機砷化合物J.分析化學(xué)研究簡報,1999,27(10):1151.13程增江,趙 霖，田 鶴,等.口服雄黃對大鼠臟器中銅、鋅、硒含量的影響J.中國中藥雜志,2001,47(26):3.14王金華,葉祖光,梁愛華,等.安宮牛黃丸中汞、砷在正常和腦缺血模型大鼠體內(nèi)的吸收與分布研究J.中國中藥雜志,2003,28(7):639.15汪寶琪,龐志功,涂 勤,等.六神丸中砷的研究J.分析測試學(xué)報,1996,15(6):23.16湯毅珊,王寧生.中藥復(fù)方中配伍藥物對雄黃可溶性砷含量的影響J.中華現(xiàn)代中西醫(yī)雜志,2005,3(9):769.17鐵步榮,喬