土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)ppt課件

1、思索：如何研討細菌的分別與計數(shù)，他的研討思緒是什么呢？思索：如何研討細菌的分別與計數(shù)，他的研討思緒是什么呢？ 挑選菌株；統(tǒng)計菌落數(shù)目；設(shè)置對照。挑選菌株；統(tǒng)計菌落數(shù)目；設(shè)置對照。 提出的問題提出的問題 ？ 處理問題處理問題的思緒？的思緒？ 處理問題的原理處理問題的原理 ？ 高溫高溫 其他菌，選出耐高溫細其他菌，選出耐高溫細菌，從菌，從 菌種提取耐高溫酶。菌種提取耐高溫酶。 如何尋覓耐高溫的酶？如何尋覓耐高溫的酶？尋覓什么環(huán)境？尋覓什么環(huán)境？ 挑選的方法：挑選的方法：利用選擇培育基進展分別利用選擇培育基進展分別以尿素為以尿素為獨一氮源獨一氮源的培育基的培育基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培育基培育基

2、是分別分別尿素尿素細菌細菌作對照作對照判別實驗判別實驗組培育基組培育基有無選擇有無選擇性性實驗組實驗組對照組對照組培育基類型培育基類型能否能否接種接種 目的目的 結(jié)果結(jié)果只生長分解只生長分解尿素的細菌尿素的細菌生長多種生長多種微生物微生物是是配置好培育基后，該實驗流程的下一步是什么？優(yōu)點：直觀、快速，能察看微生物的形狀特征且技優(yōu)點：直觀、快速，能察看微生物的形狀特征且技術(shù)簡單術(shù)簡單1操作方法：稀釋涂布平板操作方法：稀釋涂布平板統(tǒng)計菌落數(shù)統(tǒng)計菌落數(shù)2原理：原理： 1個菌落推測個菌落推測1個活菌個活菌3統(tǒng)計原那么：統(tǒng)計原那么：思索：為了保證結(jié)果準確，普通選擇多少數(shù)目的菌落思索：為了保證結(jié)果準確，普

3、通選擇多少數(shù)目的菌落數(shù)的平板上進展計數(shù)？數(shù)的平板上進展計數(shù)？ 他如何知道該平板中培育出的菌落在他如何知道該平板中培育出的菌落在30 300個？個？ 測細菌數(shù)：普通用測細菌數(shù)：普通用104、105、106稀釋液稀釋液 測放線菌：普通用測放線菌：普通用103、104、105稀釋液稀釋液 測真菌數(shù)：普通用測真菌數(shù)：普通用102、103、104稀釋液？稀釋液？ 他如何使統(tǒng)計菌落的結(jié)果更具有準確性？他如何使統(tǒng)計菌落的結(jié)果更具有準確性？ 例：兩位同窗用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣例：兩位同窗用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)。從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為品中的細菌數(shù)。從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106106的培育基中，的

4、培育基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。 1 1、甲同窗在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的、甲同窗在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為菌落數(shù)為230230。 2 2、乙同窗在該濃度下涂布了、乙同窗在該濃度下涂布了A A、B B、C C三個平板，三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為2121、212212、256256，該同窗以這三，該同窗以這三個平板上菌落數(shù)的平均值個平板上菌落數(shù)的平均值163163作為統(tǒng)計結(jié)果。作為統(tǒng)計結(jié)果。 他以為這兩位同窗的作法正確嗎？假設(shè)有問題，他以為這兩位同窗的作法正確嗎？假設(shè)有問題，錯在哪？錯在哪？ 甲：沒有反復(fù)實驗至少涂布甲：沒有反復(fù)實驗至

5、少涂布3 3個平板個平板 乙：乙：A A組結(jié)果誤差過大，不運用于計算平均值。組結(jié)果誤差過大，不運用于計算平均值。 他從中得到什么啟示？他從中得到什么啟示？ V:所用稀釋液的體積；所用稀釋液的體積； M:稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)。 利用選擇培育基進展尿素分解菌的分別利用選擇培育基進展尿素分解菌的分別過程中，從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為過程中，從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106106的培育基中，的培育基中，A A、B B兩同窗分別得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。兩同窗分別得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。 1 1、A A同窗挑選出同窗挑選出150150個菌落。個菌落。 2 2、B B同窗挑選出同窗挑選出5050個菌落。個菌落。 B B以為以為A A

6、的培育基被雜菌污染了，或培育基的培育基被雜菌污染了，或培育基中混入了其他含氮物質(zhì)，因此導(dǎo)致不能分解尿中混入了其他含氮物質(zhì)，因此導(dǎo)致不能分解尿素的細菌也能在該培育基中生長。素的細菌也能在該培育基中生長。A A確認本人確認本人的操作無誤，但也拿不出能令人服氣的證據(jù)。的操作無誤，但也拿不出能令人服氣的證據(jù)。 請他協(xié)助請他協(xié)助A A同窗改良實驗，提供具有闡明同窗改良實驗，提供具有闡明了的證據(jù)。了的證據(jù)。 實驗設(shè)計實驗設(shè)計的內(nèi)容：包括對實驗方案、實驗設(shè)計的內(nèi)容：包括對實驗方案、儀器、資料、器具和藥品，詳細的儀器、資料、器具和藥品，詳細的實驗步驟及時間安排等的綜合思索實驗步驟及時間安排等的綜合思索和安排。

7、和安排。實驗設(shè)計的要求：縝密細致。實驗設(shè)計的要求：縝密細致。實驗流程土壤取樣土壤取樣 樣品稀釋樣品稀釋 取樣涂布取樣涂布 微生物的培育與察看微生物的培育與察看 細菌的計數(shù)細菌的計數(shù)實驗操作1土壤取樣：土壤取樣： 從肥沃、潮濕的土壤中從肥沃、潮濕的土壤中取樣。先鏟去表層土取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣。左右，再取樣。將樣品裝入事先預(yù)備好的信封中。將樣品裝入事先預(yù)備好的信封中。本卷須知：本卷須知： 無菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。后面無菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。后面稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在火焰旁操作。釋土壤溶液，每一步都

8、要在火焰旁操作。實驗操作2制備培育基：制備培育基： 制備牛肉膏蛋白胨培制備牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基。育基和選擇培育基。 牛肉膏蛋白胨培育基可作為對照，判牛肉膏蛋白胨培育基可作為對照，判別選擇培育基能否起到了選擇作用。將菌別選擇培育基能否起到了選擇作用。將菌液稀釋液稀釋103107倍。每個稀釋度下需求倍。每個稀釋度下需求3個選擇培育基，一個牛肉膏蛋白胨培育基。個選擇培育基，一個牛肉膏蛋白胨培育基。因此共需求因此共需求15個選擇培育基，個選擇培育基，5個牛肉膏個牛肉膏蛋白胨培育基。預(yù)備蛋白胨培育基。預(yù)備 支滅菌的試管支滅菌的試管和和 支滅菌的移液管。支滅菌的移液管。 支滴管。支滴管。實驗操作

9、3樣品稀釋：樣品稀釋： 將將10g土樣參與盛有土樣參與盛有90ml無菌生理無菌生理鹽水的錐形瓶中，充分搖勻，汲取上清液鹽水的錐形瓶中，充分搖勻，汲取上清液1ml，轉(zhuǎn)移至，轉(zhuǎn)移至盛有盛有9ml生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至107稀釋度。稀釋度。4微生物的培育與察看微生物的培育與察看 按照由按照由107103稀釋度的順序分別汲取稀釋度的順序分別汲取0.1 ml菌菌液涂布平板，按照濃度從低到高的順序涂布平板，然液涂布平板，按照濃度從低到高的順序涂布平板，然后將平板置于后將平板置于30培育箱內(nèi)培育培育箱內(nèi)培育2d。 每隔每隔24h比較一次牛肉膏蛋白胨培育基

10、和選擇培育比較一次牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基菌落的數(shù)量、形狀等，并做好記錄?；涞臄?shù)量、形狀等，并做好記錄。 挑選選擇培育基中不同形狀的菌落接入含酚紅指挑選選擇培育基中不同形狀的菌落接入含酚紅指示劑的培育基的斜面上，察看能否產(chǎn)生顏色反響。示劑的培育基的斜面上，察看能否產(chǎn)生顏色反響。本卷須知：本卷須知： 做好標志：本實驗運用的平板和試管做好標志：本實驗運用的平板和試管比較多。為防止混淆，最好在運用前就做比較多。為防止混淆，最好在運用前就做好標志。例如，在標志培育皿時，應(yīng)注明好標志。例如，在標志培育皿時，應(yīng)注明培育基種類、培育日期以及平板上培育樣培育基種類、培育日期以及平板上培育樣品的稀釋度

11、等。品的稀釋度等。 在進展系列稀釋的時候，為防止試管在進展系列稀釋的時候，為防止試管相互混淆，可以將曾經(jīng)進展過稀釋操作的相互混淆，可以將曾經(jīng)進展過稀釋操作的試管，按稀釋度遞增的順序，依次放置在試管，按稀釋度遞增的順序，依次放置在試管架的另一行。這樣，試管的位置就能試管架的另一行。這樣，試管的位置就能清楚地表示出稀釋進展到哪一步。清楚地表示出稀釋進展到哪一步。實驗操作5細菌的計數(shù)細菌的計數(shù) 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30300的平板進展計數(shù)。在同一稀釋度的平板進展計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對下，至少對3個平板進展反復(fù)計數(shù)，然后個平板進展反復(fù)計數(shù)，然后求出平均值，

12、并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。計算出樣品中細菌的數(shù)目。結(jié)果分析與評價1、培育物中能否有雜菌污染、培育物中能否有雜菌污染 對照的培育皿中無菌落生長，闡明對照的培育皿中無菌落生長，闡明培育基未被雜菌污染。反之，那么被培育基未被雜菌污染。反之，那么被雜菌污染。雜菌污染。結(jié)果分析與評價2、選擇培育基能否挑選出菌落、選擇培育基能否挑選出菌落 牛肉膏培育基上的菌落數(shù)目大于選牛肉膏培育基上的菌落數(shù)目大于選擇培育基上的數(shù)目，闡明選擇培育基擇培育基上的數(shù)目，闡明選擇培育基已挑選出一些菌落。已挑選出一些菌落。結(jié)果分析與評價3、樣品的稀釋操作能否勝利、樣品的稀釋

13、操作能否勝利 假設(shè)得到了假設(shè)得到了2個或個或2個以上菌落數(shù)目個以上菌落數(shù)目在在30300的平板，那么闡明稀釋操作的平板，那么闡明稀釋操作比較勝利，并可以進展菌落的計數(shù)。比較勝利，并可以進展菌落的計數(shù)。結(jié)果分析與評價4、反復(fù)組的結(jié)果能否一致、反復(fù)組的結(jié)果能否一致 假設(shè)不同同窗選取的是同一種土樣，假設(shè)不同同窗選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近。假設(shè)結(jié)果相差統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近。假設(shè)結(jié)果相差太遠，需求分析產(chǎn)生差別的緣由。太遠，需求分析產(chǎn)生差別的緣由。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。

14、 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 六、例題解析六、例題解析 在微生物群體生長規(guī)律的測定中，種內(nèi)斗爭最在微生物群體生長規(guī)律的測定中，種內(nèi)斗爭最顯著最猛烈的時期是顯著最猛烈的時期是A A調(diào)整期調(diào)整期 B B對數(shù)期對數(shù)期 C C穩(wěn)定期穩(wěn)定期 D D衰亡期衰亡期C C1.1.對細菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是對細菌群體生長規(guī)律測定的正確

15、的表述是 A. A.在液體培育基上進展在液體培育基上進展 B. B.至少接種一種細菌至少接種一種細菌 C. C.接種一個細菌接種一個細菌 D. D.及時補充耗費的營養(yǎng)物質(zhì)及時補充耗費的營養(yǎng)物質(zhì) 2.2.運用選擇培育基的目的是運用選擇培育基的目的是 A. A.培育細菌培育細菌 B. B.培育真菌培育真菌 C. C.使需求的微生物大量繁衍使需求的微生物大量繁衍 D. D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.3.能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分別是能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分別是( )( ) A.CO2 A.CO2和和N2 B.N2

16、 B.葡萄糖和葡萄糖和NH3NH3 C.CO2 C.CO2和尿素和尿素 D. D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A A C CD D4.4.以下說法不正確的選項是以下說法不正確的選項是 A. A.科學(xué)家從科學(xué)家從70708080度熱泉中分別到耐高溫的度熱泉中分別到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B. B.統(tǒng)計某一稀釋度的統(tǒng)計某一稀釋度的5 5個平板的菌落數(shù)依次為個平板的菌落數(shù)依次為M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值作為該樣品菌落數(shù)的估計值 C. C.設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試要設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測

17、試要素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度 D. D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。種類最多。5.5.為培育和分別出酵母菌并淘汰雜菌，常在培育基中為培育和分別出酵母菌并淘汰雜菌，常在培育基中參與參與 A. A.較多的氮源物質(zhì)較多的氮源物質(zhì) B. B.較多的碳源物質(zhì)較多的碳源物質(zhì) C. C.青霉素類藥物青霉素類藥物 D. D.高濃度食鹽高濃度食鹽B BC C例例3 320192019年江蘇抗生素作為治療細菌感年江蘇抗生素作為治療細菌感染的藥物，其高效性和宏大的經(jīng)濟價值使抗生素工業(yè)染的藥物，其高效性和宏大的經(jīng)濟價值使抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)器具有劃時代的意經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)器具有劃時代的意義。義。青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類型青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類型是是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌