腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)指導(dǎo)原則(征求意見(jiàn)稿)

1、腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)指導(dǎo)原則(征求意見(jiàn)稿一、前言本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資 料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)、 讓申請(qǐng)人明確在注冊(cè)申報(bào)過(guò)程中應(yīng)該關(guān)注的重點(diǎn)內(nèi)容、 解決在本類產(chǎn)品的 注冊(cè)申報(bào)過(guò)程中遇到的一些共性問(wèn)題、最大限度減少技術(shù)審評(píng)過(guò)程的發(fā)補(bǔ)率。本指導(dǎo)原則是對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的 特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 申請(qǐng)人還應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具 體內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件,但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政 事項(xiàng), 亦不作為法規(guī)

2、強(qiáng)制執(zhí)行, 如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法, 也可以采用,但 是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn) 的不斷完善,以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。二、范圍腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑是指利用各種方法學(xué)對(duì)人血清、血漿或其它體液中的腫 瘤標(biāo)志物進(jìn)行體外定量分析的試劑。 本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)的腫瘤標(biāo)志物類定 量檢測(cè)試劑。從方法學(xué)考慮,本文主要指利用酶免疫法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨熒光法或微粒子 酶免法等基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)

3、行定量檢測(cè)的體外診斷試劑, 不包括組織受體檢測(cè)、生物化學(xué)方法、免疫組化染色法、 分子生物學(xué)方法類檢測(cè)試劑, 但有 利之處可參考執(zhí)行。三、注冊(cè)申報(bào)要求(一綜述資料綜述資料應(yīng)包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總 結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。 下面著重介紹腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑預(yù)期用 途有關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況, 其它內(nèi)容應(yīng)符合 體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法 (試行 (以 下簡(jiǎn)稱辦法的相關(guān)要求。理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)具有以下特性:靈敏度高,便于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn);特異性好, 便于良、惡性腫瘤的鑒別;良好的器官特異性;與病情嚴(yán)重程度、 腫瘤大小或分期有直接 關(guān)系; 監(jiān)測(cè)治療效

4、果,腫瘤標(biāo)志物濃度增高或降低與治療效果密切相關(guān);預(yù)測(cè)復(fù)發(fā),疾病復(fù) 發(fā)時(shí)腫瘤標(biāo)志物水平明顯升高。但至今尚沒(méi)有一種腫瘤標(biāo)志物能完全滿足上述要求。目前, 臨床常用腫瘤標(biāo)志物在用于惡性腫瘤的臨床管理時(shí) , 靈敏度和特異性都不高,絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的濃度高低與腫瘤的大小、生長(zhǎng)、惡性程度以及分級(jí) /分期雖有一定關(guān)聯(lián)但并無(wú)直接 關(guān)系。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)主要用于惡性腫瘤患者病情的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),不宜用于早期診斷或普通 人群篩查等目的。 其濃度逐漸升高常意味著疾病處于不斷進(jìn)展期或療效不佳, 濃度降低則意 味著對(duì)治療有反應(yīng)或療效較好, 而穩(wěn)定的抗原水平則常常暗示疾病處于穩(wěn)定期。 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的 另一目的是判斷殘留病灶、 預(yù)測(cè)復(fù)

5、發(fā), 腫瘤標(biāo)志物濃度持續(xù)低水平地高于正常意味著可能有 殘留病灶的存在, 而短期內(nèi)迅速升高則往往是疾病復(fù)發(fā)的前兆。 由于目前應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物 不能完全區(qū)分良惡性疾病,即使血清水平低于正常參考值也并不能排除惡性疾病的可能性, 而在許多良性疾病卻可見(jiàn)這些標(biāo)記物水平的升高, 故在對(duì)惡性病患者的臨床管理中, 應(yīng)結(jié)合 患者的癥狀 /體征、其它實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)以及治療情況等綜合考慮。(二產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息, 是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、 臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù), 因 此, 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。 產(chǎn)

6、品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合 體 外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則 的要求, 境外試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外, 其內(nèi)容應(yīng) 盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性,翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。結(jié)合 體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則 的要求, 下面對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑說(shuō)明 書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明,以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書(shū)編制。1.【預(yù)期用途】 應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容:1.1說(shuō)明試劑盒用于定量檢測(cè)血清、血漿和 /或其它體液中的某腫瘤標(biāo)志物濃度; 1.2簡(jiǎn)單介紹該腫瘤標(biāo)志物的特征,如分子結(jié)構(gòu)、分子量、主要產(chǎn)生和代謝途徑、 半衰期等;1.3 腫瘤標(biāo)志物水平升高常見(jiàn)于哪些良惡性疾病, 組織 /器官特異

7、性如何, 其升高或 降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。1.4強(qiáng)調(diào):主要用于對(duì)已確診的惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以輔助判斷疾病進(jìn)程或 治療效果,但其濃度高低與腫瘤的大小、生長(zhǎng)、惡性程度以及分級(jí) /分期并無(wú)直接關(guān)系。在 某些良性疾病(舉例亦可見(jiàn)該指標(biāo)的升高, 該指標(biāo)不宜用于一般人群的腫瘤篩查、早期診 斷等用途。2.【樣本要求】 重點(diǎn)明確以下內(nèi)容:樣本類型、處理、保存期限及保存條件(短 期、長(zhǎng)期,運(yùn)輸條件等。如有血漿樣本,應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。冷藏 /冷凍樣本檢測(cè)前 是否須恢復(fù)室溫,凍融次數(shù)。特殊體液標(biāo)本還應(yīng)詳細(xì)描述對(duì)采集條件、 保存液、容器要求等 可能影響檢測(cè)結(jié)果的要求。3.【適用機(jī)型】 注明所有適用的儀器型

8、號(hào), 并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。4.【檢驗(yàn)方法】 詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟,包括:4.1試劑配制方法、注意事項(xiàng);4.2試驗(yàn)條件:溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng);4.3校準(zhǔn):校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。需專用儀器的產(chǎn)品應(yīng) 注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。4.4質(zhì)量控制:質(zhì)控品的使用方法、 對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等; 建議在本部分注明以下字樣:如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符, 提示檢測(cè)結(jié)果不可靠, 不應(yīng)出具檢 測(cè)報(bào)告。5.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo):5.1最低檢出限(分析靈敏度:說(shuō)明試劑的最低檢出濃度或不高于某濃度水平, 簡(jiǎn)單介紹確定方法,對(duì)

9、功能靈敏度如有研究可一并注明。5.2 檢測(cè)范圍:本試劑盒可達(dá)到的線性范圍、檢測(cè)范圍或可報(bào)告范圍、儀器報(bào)告結(jié) 果的高限和低限要求(如有等;5.3 精密度:簡(jiǎn)要說(shuō)明精密度評(píng)價(jià)的方法, 建議以列表的方式列出批內(nèi) /批間、 日內(nèi) /日間、運(yùn)行內(nèi) /運(yùn)行間精密度等信息,以標(biāo)準(zhǔn)差(SD 和變異系數(shù)(CV 的形式表示; 5.4 特異性:有關(guān)干擾或交叉反應(yīng)的研究。 常見(jiàn)的特異性研究包括:對(duì)溶血、 高脂、 黃疸等干擾因子研究(結(jié)果應(yīng)量化表示,禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述,有關(guān)自身抗體、易 共存或結(jié)構(gòu)相似的不同腫瘤標(biāo)志物間、抗腫瘤藥物特異性的研究5.5 Hook(鉤狀 效應(yīng):說(shuō)明不會(huì)產(chǎn)生 Hook 效應(yīng)的濃度上限或相

10、關(guān)研究, 如需稀釋, 應(yīng)注明對(duì)稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。5.6 對(duì)比試驗(yàn)研究(如有:簡(jiǎn)要介紹參比試劑的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法等, 對(duì)比結(jié)果可以回歸方程、判定系數(shù)的形式表示。5.7 對(duì)腫瘤標(biāo)志物濃度的表述建議采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)濃度單位表示,如涉及不同單位, 如 U/ml、 ng/ml、 mg/l等,應(yīng)注明不同單位間的換算關(guān)系。6.【參考值(范圍】應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值(范圍,簡(jiǎn)單介紹設(shè)定該參考值(范圍所選 健康人群的區(qū)域特征,建議注明以下字樣 “由于地理、人種及年齡等差異, 建議各實(shí)驗(yàn)室建 立自己的參考值(范圍”。7.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:7.1 本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床

11、參考, 對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀 /體征、 病 史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。7.2 由于方法學(xué)或抗體特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果, 因此, 在腫瘤監(jiān)測(cè)過(guò)程中, 用不同試劑檢測(cè)所得 結(jié)果不應(yīng)直接相互比較, 以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋; 建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告 注明所用試劑特征。 系列監(jiān)測(cè)中如果改變?cè)噭╊愋? 則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試 劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。7.3 有關(guān)人源組份的警告,如:試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其它人源組份,雖已 經(jīng)通過(guò)了 HBs-Ag 、 HIV1/2-Ab、 HC

12、V-Ab 等項(xiàng)目的檢測(cè),但截至目前, 沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以 確保絕對(duì)安全,故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對(duì)待。7.4 樣本:1采集時(shí)間要求、與用藥的先后順序或用藥后時(shí)間間隔等; 2對(duì)所有 樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待7.5 其它有關(guān)不同腫瘤標(biāo)志物特性的注意事項(xiàng)(三擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說(shuō)明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合辦法和關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料形式與基本 要求的公告(國(guó)食藥監(jiān)械 2007609號(hào)的相關(guān)要求。另外,對(duì)于國(guó)產(chǎn)第三類體外診斷試 劑產(chǎn)品,應(yīng)參考中國(guó)生物制品規(guī)程(2000年版,將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn) 工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后, 并在正文的 “產(chǎn)品分類” 項(xiàng)中

13、引出該附 錄內(nèi)容。(四注冊(cè)檢測(cè)根據(jù)辦法要求,首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn) 可的、 具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。 據(jù) 關(guān) 于實(shí)施體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法(試行有關(guān)問(wèn)題的通知(國(guó)食藥監(jiān)辦 2007230號(hào) 的相關(guān)規(guī)定,已經(jīng)按照醫(yī)療器械批準(zhǔn)注冊(cè)且依據(jù)辦法確定為第三類的產(chǎn)品,在辦法 實(shí)施后重新注冊(cè)時(shí), 應(yīng)當(dāng)經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所進(jìn)行注冊(cè)檢測(cè)。 對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品 的腫瘤標(biāo)志物項(xiàng)目,在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行。作為定量檢測(cè)試劑, 腫瘤標(biāo)志物產(chǎn)品的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo):準(zhǔn)確度、 精密度、最低檢測(cè)限(分析靈敏度、線

14、性范圍等。如果擬申報(bào)試劑屬于中國(guó)生物制品規(guī) 程(2000年版收錄的項(xiàng)目或已有相應(yīng)的國(guó)家 /行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布,則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低 于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。(五主要原材料研究資料主要原材料(包括抗原、抗體及其它主要原料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn) 證研究資料;質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料;校準(zhǔn)品的溯源性文 件,包括具體溯源鏈、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。(六主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料著重介紹以下內(nèi)容:1.主要生產(chǎn)工藝介紹,可以圖表方式表示;2.反應(yīng)原理(如雙抗體夾心法介紹3.有關(guān)固相載體、顯色(發(fā)光系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹4.確定抗原抗體反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間、 pH

15、值等的研究資料5.確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量(校準(zhǔn)品、樣本、包被物、酶標(biāo)物、底物等的研究資料6.酶催化底物(發(fā)光或變色的最適條件7.其它:如清洗次數(shù)、基質(zhì)液的選擇、樣本的最大稀釋比例等8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。(七分析性能評(píng)估資料基于預(yù)期用途、方法學(xué)特征、樣本類型等方面的差異,不同腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑的 性能評(píng)估亦有所不同, 但是, 我們要求企業(yè)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有有 關(guān)性能驗(yàn)證的研究資料, 包括具體研究方法、 試驗(yàn)數(shù)據(jù)、 統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。用于定量分 析的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑,應(yīng)著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)依次包括:與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(和 /或國(guó)

16、際標(biāo)準(zhǔn)品的偏差分析、 回 收實(shí)驗(yàn)、方法學(xué)比對(duì)等方法,企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。1.1 與國(guó)家(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)研究如果研究項(xiàng)目有相應(yīng)國(guó)家(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品,則使用國(guó)家(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證, 重點(diǎn)觀察對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果的偏差情況。1.2 回收試驗(yàn)用于評(píng)估定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確測(cè)定加入純分析物的能力,結(jié)果用回收率表示。通常對(duì) 樣本進(jìn)行 3-5次回收試驗(yàn),取平均值即平均回收率。回收試驗(yàn)注意事項(xiàng):1.2.1 加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的 10%;1.2.2 盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測(cè)物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平;1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高,以得到不同濃度的回收樣本;1.2.4 注意基

17、質(zhì)效應(yīng),盡量采用與臨床待測(cè)樣本接近的基質(zhì)。1.3 方法學(xué)比對(duì)采用參考方法或國(guó)內(nèi) /國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑作為參比方法, 與擬申報(bào)試 劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品, 從測(cè)定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。 如偏 倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi), 說(shuō)明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符, 對(duì)同一份臨 床樣本的醫(yī)學(xué)解釋,擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前,應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和參比試劑進(jìn)行初步評(píng)估,只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、 樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2. 精密度測(cè)量精密度

18、的評(píng)估應(yīng)至少包括二個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行,兩個(gè)濃度都應(yīng)在試劑盒的 測(cè)量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義 (醫(yī)學(xué)決定水平 , 通常選用該檢測(cè)指標(biāo)的臨界值附近和異 常高值樣本。兩個(gè)濃度都選用高值樣品,可能致 CV 偏小,也不能選用接近最低檢出限的樣 品,可能致 CV 偏大,而且絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的極低值并無(wú)實(shí)際臨床意義。測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依,可根據(jù)不同的試劑特征或企業(yè)的研究 習(xí)慣進(jìn)行, 前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。 具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的 CLSI-EP 文件 或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。3. 線性范圍建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似,理

19、想的樣 本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清, 且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。 建立一種定量測(cè)定方法的線性范圍時(shí),需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇 7-11個(gè)濃度水平。例如, 將預(yù)期測(cè)定范圍加寬至 130%,在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平,然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減 少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系,可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。4. 最低檢測(cè)限(分析靈敏度最低檢測(cè)限的確定常使用同批號(hào)試劑對(duì)零濃度校準(zhǔn)品(或樣品稀釋液進(jìn)行至少 20次重復(fù)檢測(cè),平均值加 2倍 SD ( 95%置信區(qū)間即試劑的最低檢測(cè)限。5. 特異性5.1 溶血、 高脂、 高膽紅素等干擾因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響及相關(guān)干擾因子的高限值。 5.2 自身抗

20、體影響,如 RF 、 ANA 等。5.3 樣本中存在的某些與待測(cè)抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的分子,可能與試劑 中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測(cè)結(jié)果, 如易共存的其它腫瘤標(biāo)志物抗原、 某些激素、 近期使用的抗腫瘤藥物、人抗鼠抗體(HAMA 等。6. 高濃度 Hook 效應(yīng)及樣本稀釋Hook效應(yīng)通常指在雙抗體夾心實(shí)驗(yàn)中,由于標(biāo)本中受檢抗原的含量過(guò)高,過(guò)量抗原 分別與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成“夾心復(fù)合物”,從而影響檢測(cè)結(jié)果,將高濃 度錯(cuò)誤報(bào)告為低濃度,出現(xiàn)高濃度后帶現(xiàn)象,又稱“鉤狀效應(yīng)”,在一步法操作更常見(jiàn)。 企業(yè)應(yīng)對(duì)一些極高值樣本進(jìn)行相關(guān)研究, 以驗(yàn)證產(chǎn)生 Hook 效應(yīng)的高限值。

21、 過(guò)度稀釋 可能產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng), 企業(yè)應(yīng)對(duì)樣本稀釋液、 合理的稀釋比例做相關(guān)研究以確認(rèn)最佳稀 釋條件。7. 其它需注意問(wèn)題對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品,應(yīng)提供如產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號(hào) 儀器的性能評(píng)估資料。試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本, 則應(yīng)對(duì)二者進(jìn)行相關(guān)性研究以確認(rèn)二者檢測(cè)結(jié)果 是否完全一致或存在某種相關(guān)性 (如系數(shù)關(guān)系 。 對(duì)于血漿樣本, 企業(yè)應(yīng)對(duì)不同的抗凝劑 (肝 素、 EDTA 、枸櫞酸鈉等進(jìn)行研究以確認(rèn)最適的抗凝條件。(八參考值(范圍確定資料參考值(范圍確定所采用的樣本來(lái)源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。建議采用受 試者工作特征(ROC 曲線方法確定擬申報(bào)腫瘤標(biāo)志物

22、的參考值(范圍。(九穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、上機(jī)穩(wěn)定性及開(kāi)瓶穩(wěn)定性等,對(duì)于 酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑,還應(yīng)進(jìn)行 37加速破壞穩(wěn)定性研究。穩(wěn)定性研究資料 應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、 具體方法及過(guò)程。 對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究, 應(yīng)提供至少 3批樣品 在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。(十臨床試驗(yàn)研究1. 研究方法1.1 已有同類產(chǎn)品上市的臨床研究選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑,采用擬申 報(bào)產(chǎn)品 (以下稱考核試劑 與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究, 證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上 市產(chǎn)品。 建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、 線性范圍及

23、精密度等性能接近的同類試劑作為參比 試劑。1.2 新腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑的臨床研究對(duì)于無(wú)法選擇參比試劑的新腫瘤標(biāo)記物而言,其臨床研究應(yīng)選擇多個(gè)相關(guān)的良惡性 疾病組及部分正常人群, 驗(yàn)證新標(biāo)記物的臨床靈敏度和特異性, 并利用 ROC 曲線確定合適的 參考值 (范圍。 另外,還應(yīng)對(duì)至少 100例特定的惡性腫瘤患者進(jìn)行治療前后的隨訪監(jiān)測(cè)研 究, 以驗(yàn)證新腫瘤標(biāo)記物濃度變化與患者病情變化的相關(guān)性。 臨床隨訪監(jiān)測(cè)研究應(yīng)結(jié)合臨床 治療措施的選擇 (公認(rèn)有效的治療手段 、 患者治療后恢復(fù)狀況、 腫瘤標(biāo)志物代謝 (半衰期 等因素綜合考慮。患者采樣的時(shí)間點(diǎn)視臨床需要而定,申請(qǐng)人不得隨意干涉。2. 臨床研究單位的選

24、擇建議在國(guó)內(nèi)不同城市選擇臨床單位,盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性; 臨床研究單位應(yīng)具有腫瘤疾病診療的優(yōu)勢(shì), 實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各 環(huán)節(jié)(儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等,熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中,考核試劑和參比 試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下, 定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn), 最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及 可重復(fù)性。臨床試驗(yàn)實(shí)施前,研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面 考慮, 設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。 各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致, 且保證在整 個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施, 不可隨意改動(dòng)。 整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)

25、驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成, 申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外, 不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入 /排除標(biāo)準(zhǔn), 任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床 研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。 在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證 試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。 對(duì)于新試劑的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)研究, 應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化陽(yáng)性的 確定指標(biāo)(如:濃度變化超過(guò) 30%可作為陽(yáng)轉(zhuǎn)或陰轉(zhuǎn)的依據(jù)。臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類 型應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)一致, 且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。 各臨床研究 單位選用的參比試劑及所用機(jī)型應(yīng)完全一致,以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。4

26、. 臨床病例選擇如上文所述,絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物對(duì)于惡性腫瘤診斷的靈敏度和特異性較低,器官 定位及對(duì)疾病良惡性的區(qū)分能力都較差。因此,在進(jìn)行臨床研究時(shí),除選擇目的器官 /組織 惡性疾病的病例外,還應(yīng)選擇其它器官 /組織的惡性病患者、相關(guān)的良性病例等。另外,孕 婦或處于生理周期女性亦可見(jiàn)某些激素或胚胎蛋白類腫瘤標(biāo)志物的水平升高, 對(duì)于此類腫瘤 標(biāo)志物,臨床研究中應(yīng)選擇部分相關(guān)樣本作為受試對(duì)象。臨床研究應(yīng)包括對(duì)部分來(lái)自正常健康人群的樣本作為正常對(duì)照,健康人群定義為:無(wú)任何已知的良性或惡性疾病、 外表正常、 無(wú)任何可見(jiàn)疾病癥狀的人。 比較正常組和疾病組 結(jié)果,以便對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能做出全面分析。建議

27、對(duì)健康人群例數(shù)的選擇以不超過(guò) 150例為宜, 對(duì)于新試劑或臨床意義有待進(jìn)一步明確的試劑, 可適當(dāng)增加正常人群例數(shù)。 總體而 言,本類試劑臨床試驗(yàn)的樣本例數(shù)至少為 1000例,不管是健康人群或不同病種的患者,每 一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的基本要求。另外,建議在臨床試驗(yàn)中選擇部分含干擾物質(zhì)的標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比研究,包括高脂、溶 血、黃疸的樣本, RF 、 ANA 陽(yáng)性樣本,易共存的其它腫瘤標(biāo)志物抗原同時(shí)升高的患者標(biāo)本, 以從臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法,如相關(guān)分析、線性回歸、受試者工 作特征(ROC 曲線分析、陰 /陽(yáng)性符合率等。對(duì)

28、于對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究,最常用是對(duì)考核 試劑和參比試劑兩組檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析,應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)(r 值或判定 系數(shù)(R2、回歸擬合方程(斜率和 y 軸截距等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正 /偏態(tài)分布 情況, 建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析。 在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè),即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。6. 結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中,對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有明顯差異的樣本,應(yīng)采用臨床上普 遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn), 同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可 能結(jié)果進(jìn)行分析。根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的要求,臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)

29、試驗(yàn)的 整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述,應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、 結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述, 并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。 建議在臨床試驗(yàn)總 結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。7.1.1 臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基 本情況介紹;7.1.2病例納入 /排除標(biāo)準(zhǔn)、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標(biāo)準(zhǔn); 7.1.3樣本類型,樣本的收集、處理及保存等;7.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn);7.2 具體的臨床試驗(yàn)情況7.2.1 申報(bào)試劑和參比試劑的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息介紹;7.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)

30、、病種分布情況進(jìn)行總合,建議以列表或圖 示方式給出具體例數(shù)及百分比;7.2.3 質(zhì)量控制,試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況,對(duì) 檢測(cè)精密度、質(zhì)控品回收(或測(cè)量值、抽查結(jié)果的評(píng)估;7.2.4 具體試驗(yàn)過(guò)程,樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、結(jié)果不一致樣本的校 驗(yàn)等。7.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析7.3.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理、 差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、 對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其 95%(或 99%的置信區(qū)間。以交叉表的 形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果, 對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或 kappa 檢驗(yàn)

31、以驗(yàn)證兩種試 劑定性結(jié)果的一致性。對(duì)新腫瘤標(biāo)志物系列監(jiān)測(cè)研究,建議按照患者治療后病情狀況進(jìn)行逐級(jí)分組,如無(wú) 疾病證據(jù)、存在穩(wěn)定疾病、疾病進(jìn)展期(惡化、對(duì)治療有反應(yīng)等,對(duì)各組數(shù)據(jù)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,判斷被觀察腫瘤標(biāo)志物的濃度隨疾病狀況的變化情況。用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性,以 y=a+bx和 R2的形式給出回歸分析的擬 合方程,其中:y 是實(shí)驗(yàn)試劑結(jié)果, x 是參比試劑結(jié)果, b 是方程斜率, a 是 y 軸截距, R2是判定系數(shù),同時(shí)應(yīng)給出 b 的 95%(或 99%置信區(qū)間。另外考慮到在不同的樣本濃度區(qū)間試劑的性能可能存在一定差異,因此,建議對(duì)總 體濃度范圍進(jìn)行區(qū)間分層統(tǒng)計(jì), 對(duì)不同濃度區(qū)間內(nèi)的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析以更好的驗(yàn)證兩種 試劑的相關(guān)性。7.4 討論和結(jié)論對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明, 最后提出臨床試驗(yàn)結(jié)論。四、名詞解釋1.腫瘤標(biāo)志物 (Tumor Marker :是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中 , 由腫瘤細(xì)胞產(chǎn) 生或機(jī)體反應(yīng)而異常產(chǎn)生和 /或升高的,反映腫瘤細(xì)胞特性