分析方法的確認(rèn)

1、2. 對已確認(rèn)方法的驗(yàn)收( Verification for previously validated methods )對于像 ASTM,US EPA,ISO 和IP這些已通過合作研究 (collaborative studies)進(jìn)行確認(rèn)的方法， 且能夠適用于方法所要求的范圍之內(nèi)，對于這類的方法則不需要向內(nèi)部方法(in-housemethod )那樣的嚴(yán)格驗(yàn)證，同樣適用于出版的帶有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的科學(xué)文獻(xiàn)。鑒于此，對于使用這些方法的實(shí)驗(yàn)室，大體上能夠驗(yàn)證(verify )操作者按照方法中要求操作且能夠獲得相同的結(jié)果即可。方法的驗(yàn)收(verification of method)必須包括對現(xiàn)有已驗(yàn)

2、證方法使用前所進(jìn)行 統(tǒng)計纟糾正(statistical correlation)。但需要注意的是，由于不同標(biāo)準(zhǔn)機(jī)構(gòu)或公認(rèn)的技術(shù)組織對于方法標(biāo)準(zhǔn)的文件化 (documentation )差異，如果組織在所發(fā)布的方法中沒有驗(yàn)證報告或缺乏部分性能(performanee characteristics)或僅對部分性能確認(rèn)(verify )，則實(shí)驗(yàn)室不能夠直接使用方法，需要確認(rèn)。在使用條件下的方法驗(yàn)收不僅僅是要驗(yàn)收體系符合于方法的要求，同樣也驗(yàn)收了方法準(zhǔn)確 度、精確度或其它參數(shù)的符合性。常用以下方式證明方法性能(method performa nee):l空白，評定污染l實(shí)驗(yàn)控制樣品(e.g.化學(xué)分析

3、加標(biāo))，評定準(zhǔn)確性l重復(fù)測定，評定精確度l定量的、批次的分析，需要定期驗(yàn)證校準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)溶液l監(jiān)控質(zhì)量控制樣品，常通過使用控制表( SPC)l參與能力驗(yàn)證，這些組織可提供與方法要求一致的樣品，具有選擇代表性的濃度值、基體、分析參數(shù)等。如對原內(nèi)部方法(in-house method )做了微小的改變(換成不同生產(chǎn)商生產(chǎn)的色譜柱，選擇 不同的生長基質(zhì)等)，則也需要對方法做驗(yàn)收。驗(yàn)收程序中關(guān)鍵參數(shù)依賴于方法的性質(zhì)和所可能遇到樣品的類型。足夠用于統(tǒng)計分析數(shù)量的樣品，樣品濃度類型需要涵蓋所要評定/測定結(jié)果范圍之內(nèi)。對于定量分析，至少評定方法偏差和測量精密度，痕量分析則需要考慮方法檢出限LOD和LOQ，以確

4、定滿足需求。定性方法，對現(xiàn)有已確認(rèn)方法或與已經(jīng)結(jié)果對比進(jìn)行糾正研究(correlation studies )是需要的。如果一個機(jī)構(gòu)要對標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行重大的修改，則需要全面的驗(yàn)證。當(dāng)然，難以確定哪些因素的改變會導(dǎo)致重大的變化，除非標(biāo)準(zhǔn)中有說明哪些修改會影響測試結(jié)果。但是一般以下幾種情形，可視作為重大改變，如使用不同的溶劑、使用HPLC代替GLC、不同的介質(zhì)、影響繁殖的關(guān)鍵溫度或時間。如果客戶需要比已確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)更加詳細(xì)的說明，則需要附加的確認(rèn)。3. 方法確認(rèn)和確認(rèn)參數(shù)非標(biāo)準(zhǔn)方法和內(nèi)部開發(fā)方法需要方法確認(rèn)。方法性能基于方法的有意使用(in te nded use)。如果一個方法用于定性分析，那么就不

5、需要對在設(shè)備整個動態(tài)范圍內(nèi)確認(rèn)方法的線性。在進(jìn)行驗(yàn)證之前應(yīng)對方法范圍和確認(rèn)準(zhǔn)則進(jìn)行界定和文件化。這些包括但不局限于以下問題：a) 測量目的(要鑒定什么和為什么要鑒定)？b) 樣品的基體可能是什么？c) 是否有干擾存在，如有，這些干擾物質(zhì)需要測試嗎？d) 測量范圍多少(期望測試濃度含量范圍)？e) 是否特別法律或法規(guī)要求？f) 是否要對儀器設(shè)備和環(huán)境條件特別考慮嗎？g) 使用什么類型的設(shè)備？方法是否需要特定的儀器或是否其它同類型的儀器也能夠 用？h) 是否有樣品制備、抽樣、處理程序和包括使用設(shè)備的方法？以下工具用于證明有能力滿足方法性能的具體要求：1. 空白：使用各種各樣的空白評價分析物對分析信

6、號的大小和其它因素如干擾物對信 號貢獻(xiàn)大小?？瞻滓部捎糜跍y量檢出限評定。2. 參考物質(zhì)(Referenee materials)和有證參考物質(zhì)(certified referenee materials):利用已經(jīng)性質(zhì)或含量值的物質(zhì)評定方法準(zhǔn)確性和獲得干擾物質(zhì)的信息。當(dāng)把它們作為測量程序中一部分，它們就是我們所熟知的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。在批量分析過程中，定期將它們安插在批次測量中，可評定分析過程的穩(wěn)定性。注意：同一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，不能既用于校準(zhǔn)(配制曲線)又用于偏差測量。3. 加標(biāo)物質(zhì)(spiked materials)和溶液(solution)4. 殘留物質(zhì)Incurred materials:這類物質(zhì)關(guān)

7、注的被分析物(目標(biāo)物)也許主要來自外部。在取樣之前，目標(biāo)物就已經(jīng)在某個時段引入到樣品中。常用于加標(biāo)物質(zhì)的替代。(與加標(biāo)物質(zhì)相比，此方式引入的目標(biāo)物與基體結(jié)合得更加緊密。目標(biāo)物的值取決于與基體接觸的目標(biāo)物的量、基體捕獲和流失的比例及代謝過程的其他損失。例子：肉中的助長劑，用含有助長劑的飼料喂養(yǎng)的動物的肉制備。)5. 重復(fù)測量(Replication ):重復(fù)測定可評估測量的精密度。6. 統(tǒng)計技術(shù)(Statistical data analysis):利用統(tǒng)計技術(shù)評估方法準(zhǔn)確性、精密度、線性 范圍、檢出限和定量限和測量不確定度。比對確認(rèn)(Comparative validation )比對確認(rèn)(糾

8、正或交叉)常用于生物分析和用于證明使用兩個或以上方面測定某些測量參數(shù) 是否一致(equivale nt)。如果用原已驗(yàn)證的方法作為參考，將修規(guī)后的方法與其進(jìn)行比對。 不存在僅有單一個測試就能評估方法一致性或可接受準(zhǔn)則。一般將靈敏度高或高回收率的方法認(rèn)為是最好的。為了證明替代方法(alternative method mean)與參考方法之間是沒有統(tǒng)計學(xué)差異(顯著性差異)，則可以利用配對t-test檢驗(yàn)分析變異性和結(jié)果差異性。定性方法的比對確認(rèn)研究，可包括對操作性能的鑒定(identification )(靈敏度、選擇性、假定假陽性和假定假陰性)。確認(rèn)研究可利用外部機(jī)構(gòu)的一些附加技術(shù)研究做支持，

9、考慮利用能力驗(yàn)證的數(shù)據(jù)。當(dāng)單一研究(a simple study)要在不同地點(diǎn)或不同機(jī)構(gòu)進(jìn)行時，每一個地點(diǎn)或機(jī)構(gòu)需要利用加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和 subject samples進(jìn)行交叉驗(yàn)證確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)(in ter-laboratory )的可靠性。同樣，也可考慮使用不同分析技術(shù)的比對實(shí)驗(yàn)(如 LC-MS-MS與ELISA )。初步確認(rèn) Primary validation對于比對驗(yàn)證無法使用的情況下(如內(nèi)部開發(fā)方法，修改的標(biāo)準(zhǔn)方法可影響最終測試結(jié)果， 標(biāo)準(zhǔn)方法超出了其使用范圍，可替代分離或檢測原理使用、以及快速分析方法)，則在導(dǎo)入方法之前，必須要進(jìn)行方法初步確認(rèn)。此時， 確認(rèn)成為了確認(rèn)一個替代、新穎或其它獨(dú)立特 點(diǎn)方法的操作局限性和性能為目的的探索性工作。會對方法的性能做出大量和/或表示性的說明。第一步界定要鑒定或測量對象；包括定性表示要測定的實(shí)體(entity)和定量(如可能的話)Spike): (0.041)(10) = 0.41 0.25 ug/L OK, Meets Criteria2. Spike Level (MDLSpike): 0.041 0.25 ug/L OK, Meets Criteria3. MDL Spike): (0.041)(10) = 0.41 0.25 ug/L OK, Meets Criteria2. Spike Level (MDLSpike): 0