儀器分析實習(xí)指導(dǎo)_38733

1、第五章現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)第一節(jié)高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素一、實驗?zāi)康?掌握高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素的原理 熟悉高效液相色譜法測定蜂蜜中殘 留的四環(huán)素的實驗方法了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)與使用方法二、實驗原理（一）四環(huán)素是一種廣譜抗菌素，可用于治療和預(yù)防一些動物性疾病，但如果長期使用，將導(dǎo)致四環(huán) 素類藥物在動物類組織中的殘留。殘留在動物類組織中的四環(huán)素類藥物會影響食用者的健康。四環(huán)素類藥 物的毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等，還會造成過敏反應(yīng)、二重感染、致畸胎作 用。因此應(yīng)嚴格控制其在食品中的殘留量。（二）用酸性的Na2EDTA-Mcllvaine緩

2、沖溶液將蜂蜜中蛋白質(zhì)沉淀，同時將四環(huán)素提取出來，以草酸與乙睛為流動相，C8柱作為色譜柱，反相分離，紫外檢測器檢測，在四環(huán)素的標準曲線的線 性圍，依據(jù)其測得的峰面積與其含量間的線性關(guān)系進行定量分析。三、儀器和試劑（一）儀器1.高效液相色譜儀2紫外檢測器3-渦旋混合器4 -離心機5 天平（二）試劑6 -甲醇2 -乙睛3-乙酸乙酯4-磷酸二氫鈉5 -鹽酸6 -檸檬酸7-乙二胺四乙酸二鈉8 -草酸四、操作步驟1 提?。? ）稱取5g試樣，置于50mL離心管中，加入30mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine溶 液，快速混 合1min,以3500r/min離心10min，上清液倒入另一離

3、心管中。（2）將上清液通過固相萃取柱，用 2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液沖洗，再用20mL水洗，棄去全部流出液，減壓抽干10min，用4mL流動相洗脫，定容至4mL，供液相色譜紫外檢測器測 定。2標準溶液的配制(1)稱取四環(huán)素10mg,用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得四環(huán)素儲備液(0.1mg/mL )。準確移取該溶液1mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得0.01 mg/mL。準確移取該溶液0，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80mL于10 mL量瓶中，用 甲醇稀釋至刻度，推 勻。得四環(huán)素標準溶液的濃度分別為0.05, 0.10，0.2

4、0，0.40，0.80 g/mL。3.測定(1)色譜條件：色譜柱：。8色譜柱，150mmX 4.6mm, 5 m ；流動相：0.01mol/L草酸 溶液 (pH=2.5) 乙睛(80： 20);流速：1mL/min;柱溫：室溫；紫外檢測器：檢測波長：355nm。(2)將上述已制備好的不同濃度的四環(huán)素標準系列溶液一次進樣20 L，依據(jù)四環(huán)素的峰面積定量。以標準系列溶液的濃度為橫坐標，其相應(yīng)的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線， 并計算回歸方程。(3)樣品的測定：取已處理好的樣品溶液 20 L進樣分析，根據(jù)峰面積帶入回歸方程 中計算。五、結(jié)果計算按下式可計算出蜂蜜中四環(huán)素的含量X=CXV/m式中：X為試

5、樣中四環(huán)素的含量，單位為g/g; C為從標準曲線計算得到的被測組分溶液濃度，單位為 g/mL； V為試樣溶液定容體積，單位為mL ； m為試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為g。六、注意事項(-) 流動相使用前必須經(jīng)過脫氣。如果流動相中含有氣體，在較高的柱壓下會產(chǎn)生氣 泡，使流動 相流動受阻，對分離樣品產(chǎn)生不利影響。(二)固相萃取柱使用前應(yīng)用5mL甲醇和10mL水活化。(凌云)第二節(jié)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中的氟苯尼考一、實驗?zāi)康?一)基本熟悉現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)中高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的測定方法和特點；(二)了解液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的基本原理以及在食品安全檢測中的重要性。二、實驗原理氟苯尼考又

6、名氟洛芬、氟甲碉霉素，分子式為C2H14cl2FNO4S;分子量為358.2127 ;結(jié)構(gòu)式為。氟苯尼考是一種獸用抗菌藥，用于敏感細菌所致的豬、雞及魚的細菌性疾病，尤其對呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著。 樣品中的氟苯尼考在堿性條件下，用乙酸乙酯提取，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干，殘渣以水溶解，經(jīng)正己烷液液萃取脫脂。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，以笊代氯霉素(d5氯霉素)為標，MRM離子對方 式檢測，標法定量。三、試劑和儀器 甲醇（HPLC ）、乙酸乙酯（AR ）、正己烷（AR ）、氨水（AR，25%28%）、無水硫酸 鈉（AR ）、氟苯尼考和笊代氯霉素（d5氯霉素）標準物質(zhì)（純度>99% ）、超純水。液相

7、色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（API 4000 Qtrap），配電噴霧電離離子源（ESI）;分析天平，感量0.01mg和 0.001g ;離心機，4000r/min小型臺式離心機，> 13000r/min組織搗碎機；勻漿機；減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；渦旋振蕩器；聚丙烯離心管：帶蓋，50mL, 1.5mL ;雞心瓶：25mL ;具塞比色管 等。四、操作步驟（1） 標準溶液配制1. 100 p g/mL標準儲備液的配制：稱取適量氟苯尼考標準物質(zhì)，用甲醇配成100 P g/mL的標準儲備液，于-18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.1 P g/m標準儲備液的配制：準確吸取1.00mL 100 p g/八標準儲備液于100mL容量

8、瓶中，用甲醇稀釋至刻度，于18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.標標準溶液：笊代氯霉素（d5一氯霉素）700 口 g/mL溶劑為乙睛，笊化度98%4.1 P g/m標標準儲備液：準確吸取1.00mL標標準溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋、定容至刻度，于18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.20ng/mL標標準中間液：準確吸取1.00mL標標準儲備液于50mL容量瓶中，以超純 水稀釋至刻 度，于4c冰箱保存?zhèn)溆谩?.標準工作溶液的配制：分別準確吸取一定量的標準儲備液和標標準中間液，以空白基 質(zhì)溶液配成10、50、100、200、500ng/mL,含標10ng/mL的標準工作溶液。（2） 樣品的制備1 .標記：從所取

9、樣品中，取出有代表性的可食部分約500g，用組織搗碎機充分搗碎均勻，裝入潔凈 容器，密封，并標明標記。2 .提取：稱取5g充分搗碎均勻的試樣，精確至0.001g，置于50mL聚丙烯離心管中，加入標標準中間液75.0 L加入25mL乙酸乙酯，0.75mL氨水，3g無水硫酸鈉，勻漿提取30s, 4000r/min 離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL比色管中。另取一 50mL離心管，加入20mL乙酸乙酯，0.60mL氨水，洗 滌勻漿刀10s,洗滌液轉(zhuǎn)移至第一支離心管中，用玻棒攪動殘渣，渦旋振蕩提取1min，超聲波振蕩提取5min , 4000r/min離心5min，上清液合并至50mL比色管，乙酸乙

10、 酯定容至50.0mL。推勻后移取10.0mL乙酸乙酯提取液于25mL雞心瓶，45C減壓旋轉(zhuǎn)濃縮至千。3 .凈化：雞心瓶中的殘渣用2.00mL水溶解，渦旋振蕩混勻，超聲5min，加入3mL正己烷渦旋振 蕩混合30s,靜置分層，棄掉上層的正己烷，再加3mL正己烷渦旋振蕩混合30s,靜置分層，移取部分下層 的水相至1.5mL的聚丙烯離心管中，13000r/min離心5min , 0.2 （im濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 測定。4 .空白基質(zhì)溶液的制備：稱取5g空白樣本，精確至0.001g，除不加入標標準中間液，其它按照樣品制備、凈化的步驟進行。（三）液相色譜條件1 .色譜條件色譜柱：安捷倫Z

11、orbax XDB C-18 , 5八m, 150mM 2.1mm ；柱溫：40 C ;流動相：甲醇冰（4/1 ）； 流速：0.40mL/min ;進樣量：10八。2 .質(zhì)譜條件3 子源：電噴霧電離離子源（ESI）;掃描方式：負離子；檢測方式：多反應(yīng)選擇離子檢測（MRM ）;質(zhì)譜條件的優(yōu)化：以1 口 g/mL的氟苯尼考和笊代氯霉素標溶液，針泵直接進樣，流速5 fl L/min分別12進行MS、MS的優(yōu)化，確定相應(yīng)質(zhì)譜參數(shù)，選擇合適的檢測離子對。電噴霧電壓（IS） : -4200V ;輔助氣溫度（TEM ） ： 600C,其它參數(shù)見下表5-2-1 ：表5-2-1氟苯尼考、笊代氯霉素（d5一氯霉素

12、）質(zhì)譜參數(shù)名稱定性離子對（m/z）7E量離子對（m/z）采集時間（ms）去簇電壓DP（V）碰撞能量CE（V）氟苯尼考356.0/336.0356.0/336.0-75-15356.0/185.0-25笊代氯200霉素326.0/157.0326.0/157.0-55-26五、結(jié)果計算以標法定量，在優(yōu)化的最佳條件下，對基質(zhì)標準工作溶液進樣， 以標準溶液中被測組分的峰面積與笊代氯霉素峰面積的比值為縱坐標，標準溶液中被測組分的濃度（或被測組分濃度與笊代氯霉素濃度的比值）為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，得提取液的 含量C。按下式計算出蔬菜中被測組分的含量V 1000XC-m10

13、00式中：X 試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（P g/kg ;C 從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ n g/mL）；V樣品溶液最終的定容體積，單位為毫升（ mL）； m稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g ）。六、注意事項（1） 樣品采集要均勻、具有代表性；（2） 試樣要搗碎、勻漿徹底；（3） 流動相要過濾、脫氣，并現(xiàn)時配制；（四）避免樣品污染；（5） 色譜柱要充分平衡。（馬安德）第三節(jié)電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測茶葉中鉛、碑及鎘含量一、實驗?zāi)康模?）掌握電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）測定元素含量的原理、分析過程中的各項干擾情況 及其消除方法、基本分析步驟（二）熟

14、悉電感耦合等離子體質(zhì)譜儀的基本構(gòu)造及操作（三）掌握元素（總量）分析的樣品前處理方法二、實驗原理ICP-MS由進樣系統(tǒng)、離子源和質(zhì)譜儀三個主要部分構(gòu)成。樣品溶液經(jīng)過霧化由載氣送入ICP炬焰 中，經(jīng)過蒸發(fā)、解離、原子化、電離等過程，轉(zhuǎn)化為帶正電荷的正離子，經(jīng)離子采集系統(tǒng)進入質(zhì)譜儀，質(zhì) 譜儀根據(jù)質(zhì)荷比進行分離。對于一定的質(zhì)荷比，質(zhì)譜積分面積與進入質(zhì)譜儀中的離子數(shù)成正比。即樣品 的濃度與質(zhì)譜的積分面積成正比，通過測量質(zhì)譜的峰面積來測定樣品中元素的濃度。三、試劑和儀器（一）試劑硝酸（優(yōu)級純）H2O2 （優(yōu)級純）純水：電阻率大于18.0MQ - cm鉛（Pb）、碑（As ）、鎘（Cd）混合標準使用溶液：1

15、0 mg/Lo錯（Ge）、錮（In ）、胡（Bi）標溶液：100 p g/L（二）儀器Thermo fisher XSeriesll電感耦合等離子體質(zhì)譜儀Millipore超純水制備儀美國CEM Mars微波消解儀及配套消解管和架子精確控溫電熱消解器千分之一天平100 L、1 mL、5 mL可調(diào)移液器各一支，以及相應(yīng)吸頭若干100 mL容量瓶11個、1000 mL燒杯1個、10 mL量筒1個、1000 mL量筒1個四、操作步驟（一）儀器開機預(yù)熱（以下步驟基于實驗老師將儀器預(yù)先調(diào)整到Vacuum ready狀態(tài)下進行）檢查Ar氣壓力是否在0.60.7MPa圍，排風(fēng)是否正常，電源是否穩(wěn)定；打開計算

16、機，啟動Windows，打開循環(huán)冷卻水的電源；雙擊“ Plasma Lab ”圖標，進入操作軟件主窗口。檢查蠕動泵、ICP炬管、霧化室，關(guān)閉ICP等離子體發(fā)生器窗門；點擊on點火；待儀器點火后，預(yù)熱；（二）標準溶液系列的制備1 .于1000 mL燒杯中加入594 mL去離子水，再定量吸取6 mL濃硝酸加入燒杯中，攪拌、冷卻， 配制成（1+99）的硝酸溶液；2 .于5個100 mL的容量瓶中分別加入0、50 L、200 L、1 mL和2.5 mL的鉛（Pb）、碑（As ）、鎘（Cd）混合標準使用溶液（10 mg/L）,用（1+99 ）的硝酸溶液定容至刻度，配制成濃度濃度分 別為0、5、20、10

17、0、250 g/L標準溶液系列；（三）樣品處理1 .稱取0.5g茶葉樣品，記下樣品具體重量（精確到小數(shù)點后第三位），平行樣品數(shù)為三份2 .將稱量好的三份平行樣分別放入3支微波消解管中，再取3支微波消解管作制備試劑空白用；每支 消解管中分別加入5 mL濃硝酸和1 mL H2O2，蓋上消解管瓶塞及蓋子；6支消解管對稱放入微波消解架 上，放入微波消解儀中，按照表5-3-1消解程序進行樣品消解；表5-3-1茶葉樣品微波消解程序功率爬升時間溫度保持800 W5 min178 c5 min3微波消解程序結(jié)束后，將消解管放到精確控溫電熱消解器上進行趕酸操作，溫度設(shè)定100 C,加熱10 h；4.趕好酸的試劑

18、空白及樣品分別轉(zhuǎn)入6個100 mL容量瓶中，每支消解管用少量超純水清洗35 次，清洗液也轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，制備成樣品溶液劑試劑空白。（四）測定1 .使用調(diào)諧液調(diào)整儀器各項指標，使儀器靈敏度、氧化物、雙電荷分辨率等各項指標達到測定要求，儀器參考條件如下：RF功率為1400 W，載氣流量為0.93 L/min，采樣深度為150 mm，霧化器為同心霧化器、采樣錐類型為銀錐，具體儀器條件應(yīng)該以實際調(diào)整所獲 條件為主；2 .編輯測定方法、干擾方程、選擇各測定元素及標元素、選擇校準方法、輸入標準系列濃度；3 .引入在線標溶液，觀測標靈敏度、待標信號穩(wěn)定后分別測定試劑空白、標準系列、樣

19、品溶液；4 .繪制標準曲線、計算回歸方程、獲取試劑空白及樣品溶液濃度（五）關(guān)機測定完畢，分別用5%硝酸溶液、超純水沖洗樣品管和標管直至儀器響應(yīng)值回到基線；點擊of熄火， 關(guān)閉循環(huán)水及Ar氣，將進樣系統(tǒng)的蠕動泵管放松，關(guān)閉計算機。五、結(jié)果計算茶葉樣品中各待測元素的含量由以下公式計算：（C 樣 C 空）1001000 m其中，w為茶葉樣品中各待測元素的含量（g/g ） ； C樣為儀器所測定的樣品溶液濃度（g/L） ; °空為儀器所測定的試劑空白濃度的平均值（g/L ） ; m為茶葉樣品重量（g）W最終茶葉樣品中各待測元素的含量應(yīng)以三個平行樣品的含量均值來表示：SD。其中W為茶葉樣品中各待

20、測元素的含量均值；SD為標準偏差。六、注意事項（-）干擾及其消除電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定復(fù)雜樣品時常存在以下干擾，在試驗過程中應(yīng)該注意消除干擾影響。1同量異位素干擾相鄰元素間的異位素有相同的質(zhì)荷比，不能被四極質(zhì)譜分辨，可能引起異位素嚴重干擾，選擇待測元素時應(yīng)避免選擇有同量異位素干擾的元素。2 .豐度較大的同位素對相鄰元素的干擾豐度較大的同位素會產(chǎn)生托尾峰，影響相鄰質(zhì)量峰的測定?？烧{(diào)整質(zhì)譜儀的分辨率以減少這種干擾。3 .多原子（分子）離子干擾由兩個或三個原子組成的多原子離子，并且具有和某些待測元素相同的質(zhì)荷比所引起的干擾，本實驗中可能存在的多原子（分子）離子干擾見表5-3-2。多原子（分子）離

21、子干擾很大程度上受儀器操作條件的影響，通過調(diào)整或者干擾校正方程可以減少這種干擾。表53-2 常見的分子離子干擾分子離子質(zhì)量受干擾兀素40Ar35CI+75AsZrO106-112CdMoO108-116Cd本實驗中，氧化物的干擾可通過調(diào)整儀器參數(shù)、降低氧化物生成來減少干擾；而A s 的干擾可以通過干擾校正方程來消除，校正方程為：75As=75M x 82M y （83M-Z 83Kr）其中，x、y、z的參考值分別為3.1285、0.8740、1.0074,具體數(shù)值以77ArCI、82Se和83Kr的實際 儀器響應(yīng)來計算。4 .物理干擾包括檢測樣品標準溶液的粘度、表面力和溶解性總固體的差異所引起

22、的干擾。用標物可校正物理干擾。5 .基體抑制（電離干擾）易電離的元素增加將大大增加電子數(shù)量而引起等離子體平衡轉(zhuǎn)變，通常會減少分析信號，稱基體抑 制。用標法可以校正基體干擾。6記憶干擾經(jīng)常清洗樣品導(dǎo)入系統(tǒng)以減少記憶干擾。（二）儀器穩(wěn)定性監(jiān)測測定過程中，應(yīng)隨時留意標元素的儀器響應(yīng)情況，如標元素儀器響應(yīng)出現(xiàn)大幅度波動，應(yīng)查明原因再 重新測定。（三）樣品制備由于樣品趕酸過程較長，樣品制備應(yīng)提前進行。（洪濤）第四節(jié)離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量一、實驗?zāi)康模?）掌握離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量的基本原理及實驗方法。（-）熟悉離子色譜儀的測定方法。（三）了解化學(xué)抑制的工作原理。二、實

23、驗原理樣品通過進樣閥注入儀器，并隨碳酸鹽 重碳酸鹽淋洗液進入離子交換柱系統(tǒng)（由保護 柱和分離柱組成），由于樣品中各種陰離子對分離柱中陰離子交換樹脂的親和力不同，移動速度亦不同， 從而進行分離。已分離的陰離子流經(jīng)陽離子交換柱或抑制器系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成具高電導(dǎo)度的強酸，淋洗液則轉(zhuǎn)變 為弱電導(dǎo)度的碳酸。由電導(dǎo)檢測器測量出各陰離子組分的電導(dǎo)率，以相對保留時間和峰高或面積定性和定量。 三、儀器和試劑（一）儀器1 .離子色譜儀2 .全自動進樣器3 .陰離子分離柱4 .超聲波清洗器5 .超純水系統(tǒng)6 .真空泵7 .過濾器8 .十萬之一分析天平9 .濾膜：0.22 m10 .聚乙烯塑料容量瓶：1000m1 >

24、100m1（二）試劑11 氟標準儲備液（1000mg/L ）12 氯標準儲備液（1000mg/L ）13 碳酸鈉：分析純14 碳酸氫鈉：分析純15 硫酸：優(yōu)級純16 去離子水四、操作步驟（一）水樣預(yù)處理吸取10mL自來水樣過0.22 m孔徑的微濾膜過濾除去渾濁物質(zhì)，然后上機待測。（二）溶液的配制1氟（10.0 mg/L）、氯（100.0 mg/L）混合標準使用液：分別吸取將氟標準貯備液1m1，氯 標準儲備液10m1，置于100mL容量瓶中，然后用去離子水稀釋至刻度，搖勻。2 .氟、氯標準溶液的繪制：準確吸取1、2、5、10、20mL氟、氯混合標準使用液分別置于100mL容量瓶中，最后用去離子水

25、稀釋至刻度，搖勻。3 .淋洗液的配制（碳酸鈉1.8101。1/1_/碳酸氫鈉1.70101。1/1_）:準確稱取碳酸鈉0.1908g/L、碳酸氫 鈉0.1428g/L （于105c下烘干2小時，并保存在干燥器），溶于去離子水中，并轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶 中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，并經(jīng)真空泵過濾、除氣，備用。4 .再生液的配制（50mmol/L ）：準確吸取3mL硫酸到1000mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻 度，搖勻。5 .沖洗液：去離子水。（三）儀器的條件1 .柱溫：室溫2 .淋洗液流速：1.0 m L/min3 .進樣量：20 I（四）樣品測定1 .裝上淋洗液，依次打開全自動進樣器

26、、主機、連接色譜工作站的電腦開關(guān)。2 .調(diào)節(jié)淋洗液和再生液流速，使儀器達到平衡，并指示穩(wěn)定的基線。3 .建立測定方法。4 .待基線走穩(wěn)后，用氟離子、氯離子的混合標準系列溶液進樣（可分別得到兩種離子的工作曲線）繪 制標準曲線。5 .將預(yù)處理后的自來水樣品注入色譜儀進樣系統(tǒng)，記錄峰高或峰面積。6 .測量完畢后，沖洗柱子。7 .關(guān)泵。五、結(jié)果計算根據(jù)測出的樣品峰面積，儀器可直接在標準曲線上查得各陰離子的質(zhì)量濃度（mg/L ）。如有稀釋需 乘以稀釋倍數(shù)。C樣=C檢X稀釋倍數(shù)式中：c樣為樣品的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升mg/L ；C檢為在標準曲線上查出的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升mg/L。六、注意事項（-）

27、由于進樣量很小，操作中必需嚴格防止純水、器皿以及水樣預(yù)處理過程中的污染，淋洗液應(yīng) 用去離子水配制，不宜配制太多、放置時間太長。（二）為了防止保護柱和分離柱堵塞，樣品必須過0.22 m孔徑的微濾膜。（三）每次開機后，觀察白色的再生液和沖洗液的廢液管是否有液體流出，是否被堵。（四）離子色譜儀長期不用時也要定期用超純水清洗或?qū)⒅有断旅芊獗４?。梅）第五?jié)氣相色譜質(zhì)譜法測定蔬菜中的敵敵畏和甲拌磷含量一、實驗?zāi)康模?）了解氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的基本結(jié)構(gòu)及原理；（二）了解氣相色譜質(zhì)譜儀使用的方法；（三）了解蔬菜中有機磷農(nóng)藥的提取方法；（四）熟悉氣相色譜質(zhì)譜法的定性、定量的方法；（五）掌握標標準曲線法的定量方

28、法。二、實驗原理樣品用乙睛勻漿后過濾，濾液鹽析后離心，取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用乙睛十甲苯 （3+1 ）洗脫，洗脫液濃縮后，用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定。氣相色譜質(zhì)譜儀的工作原理：樣品中各組份經(jīng)氣相色譜分離后進入質(zhì)譜儀，被離子源轟擊成不同質(zhì) 荷比（m/z）的碎片離子。碎片離子經(jīng)過質(zhì)量分析器后，由離子流檢測器檢測，并按照m/z的大小輸出質(zhì)譜 圖，以離子流強度為縱坐標，保留時間為橫坐標輸出色譜圖。利用組分的保留時間和質(zhì)譜圖進行定性分 析，用峰面積或者峰高進行定量分析。Ci標標準曲線法：將待測組分的純物質(zhì)配置成不同濃度的系列標準溶液（），分別加入AiAs等量的標物質(zhì)，在一定實驗條件下分析，測得待測組分的

29、峰面積及標的峰面積，以A/As對Cl作圖得標標準曲線yaxbo再將同樣量的標物加入到待測樣品中，進樣分析，測出AX/As，由標準曲線求得待測組分的含量。三、試劑和儀器（1） 儀器GC-MS （2010QPPIUS,日本島津公司）；自動固相萃取儀或手動固相萃取儀； 均質(zhì)器；離心機，電子天平（精度分別為O.OOIg和O.OOOOIg）;氨氣吹干儀；100uL/1000uL可調(diào)移液器；雞心瓶；微量進樣器。（2） 試劑乙晴、甲苯、正己烷、氯化鈉，均為優(yōu)級純。 Envi-18和Envi-Carb活性 炭固相萃取小柱(3 mL,0.5 g)。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標準品(純度>95%，國家標準物質(zhì)

30、研究中心)。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標準母液(1.0 mg/mL):精確稱取10.00 mg標準物質(zhì)于10.0 mL容量瓶中用正己烷定容。準確移取敵敵畏和甲拌磷標準母液各1 mL置10mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，得含 0.1 mg/mL敵敵畏和甲拌磷的混合標準溶液。準確 移取該溶液0, 0.0025，0.005，0.01，0.02，0.05mL于5 mL容量瓶中由空白基質(zhì)提取液定容，得標準工 作液0, 0.05，0.10, 0.20，0.40 7.00 g/mL。環(huán)氧七氯標工作標準溶液(40.0g/mL):準確移取1 mL環(huán)氧七氯母液于25 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度。四、操作步驟(1

31、) 儀器操作步驟：1 .確認處于正常工作狀態(tài)。2 .對儀器進行調(diào)諧，獲得調(diào)諧報告。3 .編輯檢測方法，將檢測方法發(fā)送給儀器，等待儀器達到設(shè)定好的條件。4 .編輯樣品測定序列，將標準溶液和樣品溶液放于自動進樣器樣品盤中。5 .儀器穩(wěn)定后，開始測試。6 .樣品測定完畢后，進行數(shù)據(jù)分析。(2) 檢測條件色譜柱：Rxi-5ms,30mX0.25mm>< 0.25 m ;色譜柱溫度程序：50c保持2 min，然后以50C /min程序升溫至180 C,再以5C /min升溫至280 C,保持1min,在以50C /min升溫至 300C，保持1 min ;載氣：氮氣，純度99.999%流速：

32、1.0mL/min ;進樣口溫度：250C ;進樣量：1 uL進 樣方式：無分流進樣，4.5 min后打開流閥和隔墊吹掃閥；電子轟擊源：70 eV;離子源溫度：250Co GC-MS 接口溫度：250C；掃描方式：選擇離子 監(jiān)測。監(jiān)測離子見下表5-5-1 ：表5-5-1待測組分及標的定量離子和定性離子化合物名稱定量離子(強度)定性離子(強度)駐留時間/s敵敵畏109 (100)185 (22)，145(6)0.15甲拌磷260 (100)121 ( 429)，231 (110)0.15環(huán)氧七氯353 (100)355 (80)，351 (53)0.15(三)樣品處理:1 .提取稱取20 g試樣

33、(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入40 mL乙睛，用均質(zhì)器在15OOOr/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機，在3OOOr/min離心5 min，取上清液20 mL (相當于10 g試樣量)，待凈化。2 .凈化(1)將Envi-C18柱放入固定架上，加樣前先用10 mL乙晴預(yù)洗柱，下接雞心瓶，移入雞心瓶，移入上述20 mL提取液，并用15 mL乙履洗滌柱，將收集的提取液和洗滌液在 40c水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1 mL ,備用。(2)在EnviCarb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉,下接雞心瓶放在固定架上，加樣前先用4 mL乙睛+甲苯（

34、3+1 ）預(yù)洗柱，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液（1 ）轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再每次用2 mL乙睛+甲苯（3+1 ）三次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中。在串聯(lián)柱 上加上50 mL貯液器，用25 mL乙晴+甲苯（3+1 ）洗滌串聯(lián)柱，收集所有流出物 于雞心瓶中，并在 40C水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL。每次加入5 mL正己烷在40C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進行溶劑交換二次， 最后使樣液體積為1 mL,加入40 yL標溶液，混勻，用于氣相色譜質(zhì)譜測定。五、結(jié)果計算（一）定性分析：進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選

35、擇的離子豐度比與標準樣品的離子豐度比相一致（相 對豐度50%,允許±10%偏差；相對豐度20%50%,允許±15%偏差；相對豐 度10%20%，允許 ±20%偏差；相對豐度 10%允許±50%偏差），則可判斷樣品中存在這種農(nóng)藥或相關(guān)化學(xué)品。如果不能 確證，應(yīng)重新進樣，以掃描方式（有足夠靈敏度）或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高 的分析儀器來確定。（二）定量分析：分別以敵敵畏、甲拌磷及標的定量離子的質(zhì)量色譜圖進行面積積分， AsCi獲得標準系列中待測組分的峰面積/A及標的峰面積，以A / As對 作圖得標標準曲線V AX bAyAy。再測得樣品

36、中待測組分的峰面積及標的峰面積SX，計算Ax/Asx，由標準曲線求得待測組分的含量。（三）含量計算按下式計算出蔬菜中被測組分的含量:V 1000 x c 'm 1000式中：X蔬菜試樣中敵敵畏或甲拌磷的含量，單位為mg/kg ;C從標準曲線計算得到的被測組分溶液濃度，單位為 g/mL； V試樣溶液定容體積，單位為mL ； M試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為 g。六、注意事項（一）為減少基質(zhì)的影響，定量用標準溶液通常采用空白基質(zhì)提取液配置標準工作溶液。 （二）在進行測定前，常進樣一針溶劑空白，以檢查儀器的狀況。七、參考文獻1 郭愛民主編，衛(wèi)生化學(xué)實驗，：人民衛(wèi)生，2007。2唐英章主編，

37、現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)，：科學(xué)，2004。（周枝鳳）第六節(jié)原子吸收光譜法測定水中的鋅和銅一、實驗?zāi)康模ㄒ唬┱莆栈鹧嬖游展庾V法測定水中鋅、銅的基本原理和操作技術(shù)。 （二）熟悉原子吸收分光光度計的工作原理及火焰原子法的操作。實驗原理在使用銳線光源條件下，基態(tài)原子蒸汽對共振線的吸收，符合朗伯比爾定律，即：1。Alg0 0.4343 Ko LKo（A為中心頻率處的吸光度；L為原子蒸氣的厚度；峰值吸收系數(shù)）在試樣原子化時，火焰溫度低于3000 K時，對大多數(shù)元素來講，原子蒸汽中基態(tài)原子的數(shù)目實 際上十分接近原子總數(shù)。在一定實驗條件下，待測元素的原子總數(shù)目與該元素在試樣中的濃度呈正比。則 A=k-c用A

38、-c標準曲線法或標準加入法，可以求算出元素的含量。試劑和儀器（一）試劑：不同濃度的鋅、銅標準溶液；水樣。（二）儀器：原子吸收分光光度計；鋅、銅空心陰極燈；電熱板。四、操作步驟（一）鋅、銅系列標準溶液的配制配制鋅系列標準溶液：0.100, 0.200, 0.300, 0.400, 0.500 P g - m1L配制銅系列標準溶液：0.200, 0.400, 0.600, 0.800, 1.000 P g - m1L（二）工作條件的設(shè)置表5-6-1儀器參數(shù)的設(shè)置測試工作空心陰極燈空心陰極燈預(yù)狹縫寬波長噴頭J元系模式電流熱時間度高度鋅火焰8 mA20 min0.4 nm213.8 nm7mm銅火焰8

39、 mA20 min0.7 nm324.5nm7mm表5-6-1儀器參數(shù)的設(shè)置（續(xù)）測試測定工作計算測定重復(fù)標準品濃度 背景樣品延遲J元系方法曲線方式時間次數(shù)數(shù)量單位 校正數(shù)時間鋅濃度 自續(xù)直線回歸積分335g/mL 否30銅濃度自續(xù)直線回歸積分335g/mL 否30（三）鋅、銅的測定1 %硝酸為空白，測定鋅、銅系列標準溶液和自來水樣的吸光度A。（四）實驗結(jié)束后，用1 %硝酸噴洗原子化系統(tǒng)5 min，按關(guān)機程序關(guān)機。最后關(guān)閉乙烘鋼瓶閥 門，旋松乙烘穩(wěn)壓閥，關(guān)閉空壓機和通風(fēng)機電源。（五）繪制鋅、銅的A-c標準曲線，由未知樣的吸光度A，求算出自來水中鋅、銅含量（Pg/mL）,按一元線性回歸計算程序，

40、計算鋅、銅的含量。五、注意事項乙塊為易燃易爆氣體，必須嚴格按照操作步驟工作。在點燃乙塊火焰之前，應(yīng)先開空氣，后開乙燃；結(jié)束或暫停實驗時，應(yīng)先關(guān)乙快，后關(guān)空氣。乙快鋼瓶的工作壓力，一定要控制在所規(guī) 定圍，不得超壓工作。必須切記，保障安全。（偉立）第七節(jié)氣相色譜法檢測飲料中的防腐劑苯甲酸一、實驗?zāi)康模?）掌握氣相色譜氫火焰離子化（FID ）分析方法的原理和實驗操作技術(shù)。（二）熟悉標標準曲線法的定量分析方法。二、實驗原理食品防腐劑因具有殺滅或抑制微生物增殖的作用，而被廣泛應(yīng)用于各類食品、飲料中，防止食品變質(zhì)及延長食品的保質(zhì)期，但過量食用對人體有一定毒性。所以有必要對其進行檢測監(jiān)控。 氣相色譜法的工作

41、原理：是利用試樣中各組份在流動相和固定相間的分配系數(shù)不同，當汽化后的試 樣被載氣帶入色譜柱中運行時，組份就在其中的兩相間進行反復(fù)多次分配，由于固定相對各組份的吸附或溶解能力不同，因此各組份在色譜柱中的保留時間不同，便彼此分離，按順 序離開色譜柱進入檢測器，產(chǎn)生的離子流訊號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組份的色譜峰。利用保 留時間對樣品中的組分進行定性分析，用峰面積進行定量分析。標標準曲線法：在一定實驗條件下，待測組分的含量m或濃度C與樣品峰面積Ai /標峰面積As成正比例。先用待測組分的標準品配置一系列已知濃度的標準溶液，加入相同量的標物；再 將同樣量的標物加入到同體積的待測樣品溶液中，分別進樣，測出Ai/As，作Ai/As -m或Ai/As C圖，由Ai （樣）/As即可從標準曲線上查得待測組分的含量。食品中苯甲酸先經(jīng)乙醛萃取，以正十一烷酸作標，采用標標準曲線法定量。三、試劑和儀器（一）儀器天美，GC-7900氣相色譜儀；FID檢測器；2010雙通道色譜工作站；中惠普 NHA-300S氣源發(fā)生器；微量進樣器。（二）試劑正十一烷酸，乙醇，乙醛均為分析純。苯甲酸（國家標準物質(zhì)研究中心提供），食品防腐劑標準工作液：1Cg/L，用乙醇配制；正十一烷酸標溶液：3.0g/L,用乙醇配制。鹽酸（1+1 ）：取100mL鹽酸，加 蒸鐳水稀釋至200mL。四、