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文檔簡介
1、FACSAri a H流式細(xì)胞儀上樣準(zhǔn)備(-)上樣時(shí)需要準(zhǔn)備的物品+漂白水35L+75%酒精5L+無菌PBS或生理鹽水510L(二)FACSAriaH分選時(shí)需自備的質(zhì)控品+ AccudroP beads (分選時(shí)液滴延遲校準(zhǔn)):貨號345249,貨期需4周,如需分選要提前訂購。注:做分選時(shí)需自備,如無自備亦可上樣,但不保證分選效果。(三)上樣時(shí),樣品的準(zhǔn)備律 保證細(xì)胞活f生:需4C冰上保存律保證樣品為單個(gè)細(xì)胞,不黏連:反復(fù)吹打,用尼龍膜過濾*分選時(shí),需再次培養(yǎng)的,收集管內(nèi)需裝至少1/2培養(yǎng)基。了 IQ A<TB-alr< V9 O g少nkiroO Q二2知些O舟.bn O 山 E
2、gmfdJJQl4 T<»?crrR-jni|類型(log/lin )、信號脈沖類型( H/A/W),建立實(shí)驗(yàn)?zāi)0? 在軟件界面左側(cè)Browser面板下,依次點(diǎn)擊New Folder、Experiment、Specimen(均可重命名),單擊Specimen左側(cè)“ +”符號,顯示下方的Tube,點(diǎn)擊左側(cè)灰色指示箭頭'使之變成綠色。I2fJ TiMjcJIQ:8 (fl g毀*lEMCermrs 三 I j VoraddM2在軟件Cytometer面板上:點(diǎn)擊Parameters選項(xiàng)卡,選擇實(shí)驗(yàn)所需熒光通道(按Ctrl鍵可多選),并刪除多余通道。選擇熒光素名稱、信號放大3
3、在右側(cè)worksheet頁面中,畫出實(shí)驗(yàn)所需模板:選擇點(diǎn)圖(雙參數(shù))或直方圖(單參數(shù)),在圖中選擇參數(shù),并建立所需打?。ǘ噙呅?、矩形、十字象限形、線形,根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定)。利用鼠標(biāo)右鍵Show Populations選項(xiàng)建立圖之間的聯(lián)系嚴(yán)ISM?斟y 山刖劇onj Comp worksheet爐Q回區(qū)取口 Ec 尋WS.LS, 口Comp worksheetSSC-AFITC-APE-1PerCP<y55-AAFC-ATimeCtrl+G-comp worksheet Show Hirarehv二二一:一 二二 齊齊8一 於 (003 乙PlQIQ2Q3CHCreate Statisti
4、cs View Ctrl+B.klAll Event s因QI50 too 160200250FSC-A a 3)I I IVR I 11111>Send tfl- BackOr4tr電 ti 口必星 hy C t*Dupli t ftt eCtrl+B PllUCtrl+VM CutCtrl+XCopyClrl+CDeleteDelete卜Bring to FreniScah- to Pop IllationShfw図的図Q44至此,一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn)?zāi)0寤窘ǔ伞,F(xiàn)在可以將樣本管放在上樣臺上,點(diǎn)擊上樣面板的load '此時(shí)Acquire Data自動(dòng)被激活或手動(dòng)點(diǎn)擊采集控 制面板
5、上的Acqiredata按鈕,儀器開始獲取樣本數(shù)據(jù)。Acquisrtion DashboardCurrent ArnvtyThreshold RateSlopping Gale Ey&ntsElap sed TimeTube 0010 evt/s0 evt00:00:00B-a&it Contrdshext Tube Acqtxe DataRecord DataAcqutsition SetupStoCTxng Gate:AJI Events 神 Everts To Record:tOGOO eFV Stopping Time (sec):Storage Gdte: AH Ev
6、erts v Events Td DispJay:iM»eM 7 Flow Rate:Etectronw Abort Rate:Acqursltm StatusPrKwsed Evmts-!Threshold Count;5調(diào)整Cytometer面板中各通道電壓,使FSC/SSC中信號位于利于觀察的位置。調(diào)整閾值(Threshold),去除碎片和噪音信號。調(diào)整上樣速度(FlowRate)囲 Arquhition DashboardCuriwt ActivityActive PbeJWellThreshold RateSlopping Gale EventsElapsed TimeTu
7、be 0010 evt/sOevt00:00:00Contfcis+J Next TtieAcqutte Data Rtc«d DdtdAcquisition 5eti<jStoAHTig Gale:山 EventsV Everts To Record:lOOtnevtV Stopping Time (sec):Storage Gate:'山 Everts7 Events To Display:ItxmevtV Flow Rate:Acqurltion statusProcwsed EventstOwtrorx Atwt Rfitt;6在FSC/SSC中調(diào)整門的位置、大
8、小和形狀,使之圈住感興趣細(xì)胞群。調(diào)節(jié)熒光通道的電壓,使熒光信號位于合適的位置。LWmphocytes-3n 5+56/4 5/4/19/8&009 y2IS-PlI iitnii I iiiiiii rTTTnnii rnnii| tW'ia lbI 苗CDS FITC-Aa1=a3r 一電逐零TTl iinq I nilll| i1D°10°CD4 PE-C/7-AI HilliJs All Events1 P110.0001.069100 01871878實(shí)驗(yàn)條件調(diào)整完畢后,在上樣面板中設(shè)置Eve nts To Record 等參數(shù),點(diǎn)7在鼠標(biāo)右鍵中打開數(shù)據(jù)顯示,觀祭實(shí)驗(yàn)的實(shí)時(shí)結(jié)果OI ILymphocytes-3/1 6+5 6/Show FopulaXion Mi erarchyCtrl+ (> G i 陽 Stall sti es Vi awShow Populations:£ ;沁鈔1Scale to Fopuliti oni9NSho# GateiEring to Fr1Send to BckOrder Popiilby CountDuplicateCtrl+EI lllllHlTTT i 11)11 i
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