FACSAriaⅡ流式細(xì)胞儀上樣準(zhǔn)備

1、FACSAri a H流式細(xì)胞儀上樣準(zhǔn)備（-）上樣時(shí)需要準(zhǔn)備的物品+漂白水35L+75%酒精5L+無菌PBS或生理鹽水510L（二）FACSAriaH分選時(shí)需自備的質(zhì)控品+ AccudroP beads （分選時(shí)液滴延遲校準(zhǔn)）：貨號345249,貨期需4周,如需分選要提前訂購。注：做分選時(shí)需自備，如無自備亦可上樣，但不保證分選效果。（三）上樣時(shí)，樣品的準(zhǔn)備律 保證細(xì)胞活f生：需4C冰上保存律保證樣品為單個(gè)細(xì)胞，不黏連：反復(fù)吹打，用尼龍膜過濾*分選時(shí)，需再次培養(yǎng)的，收集管內(nèi)需裝至少1/2培養(yǎng)基。了 IQ A<TB-alr< V9 O g少nkiroO Q二2知些O舟.bn O 山 E

2、gmfdJJQl4 T<»?crrR-jni|類型（log/lin ）、信號脈沖類型（ H/A/W），建立實(shí)驗(yàn)?zāi)０? 在軟件界面左側(cè)Browser面板下，依次點(diǎn)擊New Folder、Experiment、Specimen（均可重命名），單擊Specimen左側(cè)“ +”符號，顯示下方的Tube,點(diǎn)擊左側(cè)灰色指示箭頭'使之變成綠色。I2fJ TiMjcJIQ：8 (fl g毀*lEMCermrs 三 I j VoraddM2在軟件Cytometer面板上：點(diǎn)擊Parameters選項(xiàng)卡，選擇實(shí)驗(yàn)所需熒光通道（按Ctrl鍵可多選），并刪除多余通道。選擇熒光素名稱、信號放大3

3、在右側(cè)worksheet頁面中，畫出實(shí)驗(yàn)所需模板：選擇點(diǎn)圖（雙參數(shù)）或直方圖（單參數(shù)），在圖中選擇參數(shù)，并建立所需打?。ǘ噙呅?、矩形、十字象限形、線形，根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定）。利用鼠標(biāo)右鍵Show Populations選項(xiàng)建立圖之間的聯(lián)系嚴(yán)ISM?斟y 山刖劇onj Comp worksheet爐Q回區(qū)取口 Ec 尋WS.LS, 口Comp worksheetSSC-AFITC-APE-1PerCP<y55-AAFC-ATimeCtrl+G-comp worksheet Show Hirarehv二二一：一 二二 齊齊8一 於 (003 乙PlQIQ2Q3CHCreate Statisti

4、cs View Ctrl+B.klAll Event s因QI50 too 160200250FSC-A a 3)I I IVR I 11111>Send tfl- BackOr4tr電 ti 口必星 hy C t*Dupli t ftt eCtrl+B PllUCtrl+VM CutCtrl+XCopyClrl+CDeleteDelete卜Bring to FreniScah- to Pop IllationShfw図的図Q44至此，一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn)?zāi)０寤窘ǔ伞，F(xiàn)在可以將樣本管放在上樣臺上，點(diǎn)擊上樣面板的load '此時(shí)Acquire Data自動(dòng)被激活或手動(dòng)點(diǎn)擊采集控 制面板

5、上的Acqiredata按鈕，儀器開始獲取樣本數(shù)據(jù)。Acquisrtion DashboardCurrent ArnvtyThreshold RateSlopping Gale Ey&ntsElap sed TimeTube 0010 evt/s0 evt00:00:00B-a&it Contrdshext Tube Acqtxe DataRecord DataAcqutsition SetupStoCTxng Gate:AJI Events 神 Everts To Record:tOGOO eFV Stopping Time (sec):Storage Gdte: AH Ev

6、erts v Events Td DispJay:iM»eM 7 Flow Rate:Etectronw Abort Rate：Acqursltm StatusPrKwsed Evmts-!Threshold Count;5調(diào)整Cytometer面板中各通道電壓，使FSC/SSC中信號位于利于觀察的位置。調(diào)整閾值(Threshold),去除碎片和噪音信號。調(diào)整上樣速度(FlowRate)囲 Arquhition DashboardCuriwt ActivityActive PbeJWellThreshold RateSlopping Gale EventsElapsed TimeTu

7、be 0010 evt/sOevt00:00:00Contfcis+J Next TtieAcqutte Data Rtc«d DdtdAcquisition 5eti<jStoAHTig Gale:山 EventsV Everts To Record:lOOtnevtV Stopping Time (sec):Storage Gate:'山 Everts7 Events To Display:ItxmevtV Flow Rate:Acqurltion statusProcwsed EventstOwtrorx Atwt Rfitt；6在FSC/SSC中調(diào)整門的位置、大

8、小和形狀，使之圈住感興趣細(xì)胞群。調(diào)節(jié)熒光通道的電壓，使熒光信號位于合適的位置。LWmphocytes-3n 5+56/4 5/4/19/8&009 y2IS-PlI iitnii I iiiiiii rTTTnnii rnnii| tW'ia lbI 苗CDS FITC-Aa1=a3r 一電逐零TTl iinq I nilll| i1D°10°CD4 PE-C/7-AI HilliJs All Events1 P110.0001.069100 01871878實(shí)驗(yàn)條件調(diào)整完畢后，在上樣面板中設(shè)置Eve nts To Record 等參數(shù)，點(diǎn)7在鼠標(biāo)右鍵中打開數(shù)據(jù)顯示，觀祭實(shí)驗(yàn)的實(shí)時(shí)結(jié)果OI ILymphocytes-3/1 6+5 6/Show FopulaXion Mi erarchyCtrl+ (> G i 陽 Stall sti es Vi awShow Populations:£ ;沁鈔1Scale to Fopuliti oni9NSho# GateiEring to Fr1Send to BckOrder Popiilby CountDuplicateCtrl+EI lllllHlTTT i 11)11 i