懷化醫(yī)專微生物學(xué)檢驗(yàn)教案

1、 懷化醫(yī)專微生物學(xué)檢驗(yàn)教案 編號：2009年下學(xué)期授課教師李爭鳴教研室主任審核簽名李爭鳴教學(xué)課題病原性球菌及檢驗(yàn)（一）課時(shí)授課時(shí)間月 日 月 日 月 日 月 日 月 日 月 日2星期星期星期星期星期星期授課對象檢驗(yàn)專業(yè)班級目的要求【掌握】葡萄球菌屬的生物學(xué)性狀(形態(tài)結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造、分類、抵抗力)和微生物學(xué)檢驗(yàn)(具體要求見實(shí)驗(yàn)部分)【熟悉】葡萄球菌屬的致病性和免疫性。【了解】葡萄球菌屬所致疾病的防治原則。教學(xué)重點(diǎn)及難點(diǎn)葡萄球菌的主要生物學(xué)特性及微生物學(xué)檢驗(yàn)程序、檢驗(yàn)方法。教法與學(xué)法啟發(fā)式講授法、比較、歸納課型理論課教學(xué)手段多媒體教學(xué)內(nèi)容與時(shí)間分配第十六章 球 菌一、葡萄球菌屬

2、（一）的生物學(xué)特性 （15 min）（二）致病性和免疫性 （10min）（三）葡萄球菌微生物學(xué)檢驗(yàn) （20min）二、鏈球菌屬（一）鏈球菌的生物學(xué)特性、致病性 （35min）小結(jié) （10min）復(fù)習(xí)思考題1、球菌檢驗(yàn)的程序如何？2、葡萄球菌分哪些種類？致病性葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？參考資料1、張卓然主編 臨床微生物學(xué)與微生物檢驗(yàn)人衛(wèi)出版社 第3版 2006.112、倪語星主編 臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn) 人衛(wèi)生出版社 第4版， 2007年3、余賀主編 醫(yī)學(xué)微生物學(xué) 人衛(wèi)出版社 1983年 自評細(xì)菌檢驗(yàn)的序幕由本節(jié)課正式拉開，球菌、腸道桿菌檢驗(yàn)是所有細(xì)菌檢驗(yàn)的重點(diǎn)。本節(jié)課的重點(diǎn)、難點(diǎn)講解較清楚，層次清

3、晰，多媒體課件使用效果較好，還增加了教材上沒有的如凝固酶陰性葡萄球菌及耐藥性等知識，但細(xì)菌檢驗(yàn)的基本程序，方法未能講透，今后應(yīng)著重考慮這一問題。第十七章 球菌及檢驗(yàn)球菌（coccus）是細(xì)菌中的一大類，對人有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥,又稱化膿性球菌。常見種類：G+C：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌G-C：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌第一節(jié) 葡萄球菌屬（staphylococcus）概述：（特點(diǎn)，分布）多數(shù)為非致病菌，少數(shù)可導(dǎo)致疾病。葡萄球菌是最常見的化膿性球菌，是醫(yī)院交叉感染的重要來源。一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色 G+， 球形，無鞭毛、無芽孢，呈葡萄串狀排列。衰老、死亡、被吞

4、噬后變?yōu)镚-（二）培養(yǎng)特性條件：要求不高，多數(shù)菌株耐鹽。液體：均勻渾濁生長。普通瓊脂平板（色素）、血液瓊脂平板（溶血情況）（菌落特點(diǎn)）高鹽甘露醇平板：金黃色葡萄球菌為淡橙黃色菌落；其他葡萄球菌為白色菌落。（三）生化反應(yīng)活潑，分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸（如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇）。 觸酶（）（區(qū)別于鏈球菌屬）（四）抗原構(gòu)造、蛋白抗原（） 特點(diǎn)：存在于細(xì)菌細(xì)胞壁上的蛋白質(zhì)，具有種屬特異性。SPA可與人類IgGFc段發(fā)生非特異性結(jié)合，不影響Fab與抗原的結(jié)合。意義：（1）降低抗體的調(diào)理作用，抗吞噬。 （2）協(xié)同凝集試驗(yàn)：輔助診斷疾病。、多糖抗原位于細(xì)胞壁上，具有型特異性。金黃色葡萄球菌：

5、核糖醇磷壁酸（檢測磷壁酸有助于金葡菌感染診斷）凝固酶（）葡萄球菌： 甘油磷壁酸（五）分類（個(gè)種及亞種）、按色素分類：金、白、檸、按凝固酶分類：凝固酶陰性葡萄球菌、凝固酶陽性葡萄球菌、按噬菌體分類：金葡菌分為5群26型三種葡萄球菌的主要性狀性狀 金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌色 素 金黃色 白色 白色或檸檬色血漿凝固酶 + 溶血素 + 耐熱核酸酶 + SPA + 致病性 強(qiáng) 弱 無（六）抵抗力 無芽胞菌中最強(qiáng)，耐干燥（數(shù)月），耐熱（8030min死亡），對石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。易產(chǎn)生耐藥性變異，如：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）：MRSA常呈多重耐藥，對青霉素、氧氟沙星及紅

6、霉素的敏感率分別為1.3%、3%及14%。長期住院、反復(fù)使用各種廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人、與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險(xiǎn)因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來源。 MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來源。 二、致病性和免疫性(一)致病物質(zhì) 金葡菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。 1血漿凝固酶（coagulase)：結(jié)合凝固酶、游離凝固酶。 鑒別金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。 2葡萄球菌溶血素（staphylolysin） 致病性葡萄球菌，可損傷細(xì)胞膜，分為四種，對人致病的主要是溶血素。3殺白細(xì)胞素（leukocid

7、in）4腸毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H 9個(gè)血清型）引起食物中毒。5表皮剝脫毒素（exfoliative toxin）6. 毒性休克綜合征毒素1（toxic shock syndrome toxin 1, TSST1）（二）所致疾病 1侵襲性疾病：（1）皮膚軟組織感染 主要有癤、癰、毛囊炎、麥粒腫、蜂窩組織炎、傷口化膿等。病灶局限且膿汁粘稠（2）內(nèi)臟器官感染 如肺炎、膿胸、中耳炎、腦膜炎、心包炎、心內(nèi)膜炎等，主要由金葡菌引起。（3）全身感染 如敗血癥、膿毒血癥等，多由金葡菌引起，新生兒或機(jī)體防御可能嚴(yán)重受損時(shí)表皮葡萄球菌也可引起嚴(yán)重?cái)⊙Y。（4）尿

8、路感染2毒素性疾病（1）食物中毒 進(jìn)食含腸毒素食物后16小時(shí)即可出現(xiàn)癥狀，如惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，大多數(shù)病人于數(shù)小時(shí)至1日內(nèi)恢復(fù)。（2）燙傷樣皮膚綜合征 （3）毒性休克綜合征（4）假膜性腸炎3. 凝固酶陰性葡萄球菌的致病性人類凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見。 CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長期腹膜透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集根據(jù)病情采集標(biāo)本種類：膿液、傷口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便等。 注意：

9、無菌操作，避免污染，迅速送檢。（二）檢驗(yàn)程序 基本程序：標(biāo)本采集、處理 涂片染色鏡檢 細(xì)菌分離培養(yǎng) 細(xì)菌鑒定 藥敏試驗(yàn) 結(jié)果報(bào)告 但不同標(biāo)本其檢驗(yàn)程序有些不同，如下： 膿液、咽拭、穿刺液、尿液、痰液 腦脊液 血液 糞便、嘔吐物 增菌培養(yǎng) 分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇） 直接涂片染色 分離培養(yǎng) 分離培養(yǎng)（BA） 初報(bào) 取可疑菌落（觀察） 鑒定實(shí)驗(yàn)、藥敏實(shí)驗(yàn) 涂片染色 血漿凝固酶 耐熱核酸酶 藥敏實(shí)驗(yàn) 其他鑒定實(shí)驗(yàn)（三）檢驗(yàn)方法、直接涂片適于：(1)正常情況下無菌的標(biāo)本（如腦脊液、尿液、穿刺液）(2)伴有炎癥細(xì)胞的其他體液標(biāo)本（如痰液、膿汁）初步報(bào)告：“查見革蘭陽性葡萄狀排列球菌，疑為葡萄球菌”2、分離培

10、養(yǎng)（1）血液標(biāo)本5ml 50ml葡萄糖肉湯（增菌）（培養(yǎng)7天，盲傳） 無菌生長 混濁（2）腦脊液、膿液、穿刺液、咽拭、尿液 血平板（3）糞便、嘔吐物 高鹽甘露醇平板3、鑒定試驗(yàn)（1）血漿凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）原理致病性葡萄球菌能產(chǎn)生種血漿凝固酶：一種為結(jié)合型凝固酶（凝聚因子）：細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。 檢測方法結(jié)合型凝固酶：玻片法游離型凝固酶：試管法（2）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（3）耐熱核酸酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）

11、 100水浴15min液體培養(yǎng)物 甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂（加在孔內(nèi)） 孔周變?yōu)榉奂t色（）腸毒素測定： 金黃色葡萄球菌產(chǎn)生病人嘔吐物、糞便、剩余食物高鹽肉湯分離培養(yǎng)48h肉湯煮沸30min,3000rpm1h，取上清液2ml幼貓4h觀察癥狀（5）SPA檢測： 金黃色葡萄球菌 SPA+兔抗SRBC抗體（IgGFc）+致敏SRBC凝集（6）凝固酶陽性和凝固酶陰性的葡萄球菌鑒定表1 凝固酶陽性葡萄球菌的鑒別結(jié)合型 游離型 耐熱核酸 VP 鳥氨酸脫 血漿凝固酶 血漿凝固酶 酶試驗(yàn) 試驗(yàn) 羧酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌 + + + + 中間型葡萄球菌 + + （罕見）希氏葡萄球菌 + + + + 表2 凝固酶陰性葡萄球菌的鑒別（見書P167表17-1）表3 幾種常見葡萄球菌的鑒別細(xì)菌 菌落顏色 菌體大小 溶血 觸酶 凝固酶 甘露醇發(fā)酵 新生霉素金黃色 淡黃至金黃 小而勻 + + F S葡萄球菌表皮 白色 中大 + S葡萄球菌溶血 白色 中大 + S/R葡萄球菌腐生 檸檬黃色 較大 + R葡萄球菌與微球菌的鑒別：微球菌也為觸酶（+），氧化酶（+），G+C，但它為專性需氧菌，葡萄糖發(fā)酵（），菌體大小不均，排列不規(guī)則，略大于葡萄球菌，常四聯(lián)、多疊，有白色、黃色、粉紅色菌落，有粘性不乳化，通常不致病，抵抗力低下時(shí)偶爾致病。（7）API葡萄球菌鑒定試劑盒（四）結(jié)果評價(jià)和報(bào)告 1、金