JISZ2801中文

1、JIS_Z_2801: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial概要"-本規(guī)格是在工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查會(huì)的審查，由通商產(chǎn)業(yè)大 臣制定的日本工業(yè)規(guī)格。日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)-抗菌加工產(chǎn)品-抗菌試驗(yàn)方法，抗菌效果序文：與生活相關(guān)的新功能加工產(chǎn)品座談會(huì)記錄：平成10年12月在所謂的抗菌加工指示書上表示，本規(guī)格是為了對(duì)抗菌加工產(chǎn)品抗菌效果的評(píng)價(jià)方法規(guī)范化而制定 的日本工業(yè)規(guī)格。但是，本規(guī)格只是對(duì)抗菌加工產(chǎn)品及其重要的抗菌效果及試驗(yàn)方 法做的規(guī)定，對(duì)其安全性，抗菌效果的持續(xù)性等等請(qǐng)參照抗菌加工產(chǎn)品指示書”。1、試用范圍本

2、規(guī)格是針對(duì)抗菌加工產(chǎn)品（含中間產(chǎn)品）表面細(xì)菌的抗菌性試驗(yàn)方法及抗菌效果的 規(guī)定。2、參考文件下列標(biāo)準(zhǔn)和條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用成為本標(biāo)準(zhǔn)，版本更新的標(biāo)準(zhǔn)適用本標(biāo)準(zhǔn)。JIS K0950塑料殺菌碟JIS K0970按鈕式液體用微量體積計(jì)JIS K3800二級(jí)的生物安全裝置(99.5)(試劑)JIS K8101 乙醇JIS K8150 鹽酸（試劑）（試劑）JIS K8180 鹽酸JIS K8263 瓊脂JIS K8576氫氧化鈉（試劑）JIS K9007磷酸二氫鉀JIS K9017磷酸二鉀JIS K9012紡織產(chǎn)品的抗菌性實(shí)驗(yàn)方法JLS R3505玻璃材質(zhì)的體積計(jì)3、定義本標(biāo)準(zhǔn)使用了如下定義和術(shù)語(yǔ)A）抗

3、菌抑制產(chǎn)品表面細(xì)菌繁殖B）殺菌抗菌的最終效果Page 1 / Total 8JIS_Z_2801: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobialC）抗菌產(chǎn)品 進(jìn)行抗菌加工的產(chǎn)品D）抗菌活性值 加工產(chǎn)品和未加工產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌接種培養(yǎng)后的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行對(duì)比后的 差值參考JIS L1902抗菌活性值評(píng)估與判定巳抗菌效果 從抗菌活性值判斷抗菌加工產(chǎn)品的效果4、抗菌效果抗菌加工產(chǎn)品的抗菌效果，根據(jù)本規(guī)格的試驗(yàn)方法得出，抗菌活性值為2.0以上。另外，根據(jù)當(dāng)事人之間的協(xié)定，2.0上下的數(shù)值均可以。5、試驗(yàn)方法5.1纖維產(chǎn)品的試驗(yàn)方法 紡織品的試驗(yàn)方法，同

4、JIS L1902的規(guī)定8 （定量試驗(yàn)）5.2塑料制品等的試驗(yàn)方法本試驗(yàn)方法適用于塑料制品，金屬制品，陶瓷制品等纖 維制品以外的制品。根據(jù)制品的用途，形狀等紡織品的試驗(yàn)方法5.1測(cè)試方法也可以用。5.2.1試驗(yàn)用的細(xì)菌 試驗(yàn)用的細(xì)菌種類，根據(jù)如下所示，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)A）黃色葡萄球菌B）大腸菌使用菌種如表1所示。使用表1所示保存部門以外分售的菌株的情況下，分售部門 為國(guó)際微生物株保存聯(lián)盟（ WFCC:WORLD FEDERATION OF CULTURECOLLECTION ）或者日本微生物株保存聯(lián)盟（JSCCJAPAN SOCIETY OF CULTURE COLLECTION ）加盟的部門，并

5、且和表1同一系列的菌株。表1試驗(yàn)用細(xì)菌的菌株 細(xì)菌的種類菌株的保存號(hào)碼保存菌株的部門 黃色葡萄球菌ATCC6538PFDA209PIFO12732美國(guó)菌種收藏協(xié)會(huì)食物和藥劑管理部門發(fā)酵研究所 大腸桿菌ATCC8739IFO3972美國(guó)菌種收藏協(xié)會(huì)發(fā)酵研究所5.2.2藥品、材料及器具本規(guī)格所試用的藥品，材料及器具沒(méi)有特別的規(guī)定，如下所示均可乙醇（C2H5OH）JIS K8101規(guī)定的1級(jí)以上的物品濃縮牛肉微生物試驗(yàn)用的物品 蛋白胨 微生物試驗(yàn)用的物品氯化鈉（NaCI） JIS K8150規(guī)定的特級(jí)物品精制水 適合第13修正日本藥局方的基準(zhǔn)的物品Page 2 / Total 8JIS_Z_2801

6、: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial瓊脂JIS K8263規(guī)定的特級(jí)以上的物品酵母膏 微生物試驗(yàn)用的物品 胰化蛋白胨 微生物試驗(yàn)用的物品葡萄糖微生物試驗(yàn)用的物品酪素胨微生物試驗(yàn)用的物品大豆胨微生物試驗(yàn)用的物品蛋黃素非離子表面活性劑磷酸二氫鉀磷酸二鉀氫氧化鈉鹽酸棉花塞白金圈尖端大約一個(gè)4mm的環(huán)點(diǎn)消毒器 使保持溫度在160至180C高壓滅菌器 能保持120C和103KPa的壓力安全裝置性能按照或等價(jià)于JIS K 3800凈化臺(tái)吸管精確度能達(dá)到或等價(jià)于 JIS K 0970或JIS R 3505A級(jí)培養(yǎng)器保持溫度±

7、C陪替氏培養(yǎng)皿 內(nèi)徑90mm的玻璃器皿或是按JIS K 0950中指定規(guī)定規(guī)格N0.90A/90B兜包袋微生物測(cè)試兜包微生物測(cè)試薄膜不能影響微生物生長(zhǎng)和吸水、厚度不定，但可以粘著使用。5.2.3殺菌方法A）干熱殺菌將殺菌對(duì)象放入160180C的干熱殺菌器，保持3060分鐘（1）。注1干熱殺菌完成后，殺菌的綿塞，包裝物等被水浸濕時(shí)，器具不可再用。B）高壓蒸汽殺菌將水倒入高壓殺菌器，把殺菌物放在鐵絲網(wǎng)上，蓋上高壓殺菌器的蓋子，加熱，溫 度達(dá)到121C（壓力相當(dāng)103K Pa）后保持1520分鐘。加熱停止，自然冷卻到 100C以下后，打Page 3 / Total 8JIS_Z_2801: 2000

8、_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial開(kāi)排氣，排去蒸汽，一打開(kāi)蓋子，取出殺菌后的物品，必要的情況下，用干凈的鉗子 夾到安全的櫥柜內(nèi)冷卻。高壓殺菌器要防止受到污染，加工藥劑的污染，為了保持 干凈，有必要的情況下可以放到中性洗劑中洗凈，再用水充分清洗。C）火焰殺菌將殺菌物放到氣體或者酒精的火焰中，如果是使用試管的話，放置2-3秒。D）準(zhǔn)備測(cè)試器具試驗(yàn)試管、燒瓶等玻璃用具，用強(qiáng)堿或者中性洗劑仔細(xì)清洗，再用水充分清洗后干 燥，加熱殺菌，或者高壓蒸汽殺菌。5.2.4其它培養(yǎng)基培養(yǎng)基等使用如下所示組合。另外，如果是同一組合的話，可以使用市場(chǎng)上銷售的

9、 產(chǎn)品。a）細(xì)菌懸濁液用營(yíng)養(yǎng)肉湯準(zhǔn)備精制水或者離子交換水1000ml，肉的提煉物3.0g,蛋白胨10.0g,氯化鈉5.0g,放入燒瓶里混合，充分溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)整PH值，使PH值在7.0 7.2之間（25C ），必要的情況下，可以注入試管內(nèi)，塞上綿栓，進(jìn) 行高壓蒸汽殺菌。調(diào)至完成后，不馬上使用的放到5-10 r的溫度下保存。不能使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月以上的細(xì)菌懸濁液用營(yíng)養(yǎng)肉湯。b）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基準(zhǔn)備精制水或者離子交換水1000ml，肉的提煉物5.0g,蛋白胨10.0g,氯化鈉 5.0g，瓊脂粉15.0g，放入燒瓶里混合，放到沸騰的水浴中加熱至全部溶解后，用 氫氧化鈉或者鹽酸溶液

10、進(jìn)行調(diào)整PH值，使PH值在7.07.2之間（25C ），塞上綿栓，進(jìn)行高壓蒸汽殺菌。調(diào)至完成后，不馬上使用的放到5-10 r的溫度下保存。不能使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月以上的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。c）平板計(jì)數(shù)瓊脂/標(biāo)準(zhǔn)瓊脂培養(yǎng)基準(zhǔn)備精制水或者離子交換水1000ml，酵母提煉物2.5g，蛋白胨5.0g,葡萄糖1.0g， 瓊脂粉15.0g,放入燒瓶里混合，放到沸騰的水浴中加熱至全部溶解后，用氫氧化 鈉或者鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)整 PH值，使PH值在7.0 7.2之間（25r ），塞上綿栓，進(jìn) 行高壓蒸汽殺菌。調(diào)至完成后，不馬上使用的放到5-10 r的溫度下保存。不能使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月以上的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂培養(yǎng)基。d）斜面培養(yǎng)基

11、重新把溶解后的b）的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基6-10ml注入試管內(nèi)，塞上綿栓高壓蒸汽殺 菌。殺菌完成后，把試管放在干凈的室內(nèi)保持15°傾斜，讓試管內(nèi)的物質(zhì)凝固。調(diào)至后，不馬上使用的放到5-10r的溫度下保存。沒(méi)有加入濃縮水溶解的，先溶 解，等凝固再使用。不能使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月以上的斜面培養(yǎng)基。e）SCDL P 肉湯準(zhǔn)備精制水或者離子交換水1000ml，酪素胨17.0g,大豆胨3.0g,氯化鈉5.0g，磷 酸氫氧二化鈉2.5g，葡萄糖2.5g,卵磷脂1.0g,放入燒瓶?jī)?nèi)混合，充分溶解后，添 加非離子表面活性劑7.0g并溶解。用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)整 PH值，使 PH 值在 7.0 7.2P

12、age 4 / Total 8JIS_Z_2801: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial之間（25r）,必要的情況下，注入試管或者三角錐瓶中，"塞上綿栓進(jìn)行高壓蒸汽殺 菌。調(diào)制后，不馬上使用的放到 5-10r的溫度下保存。不可使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月 的SCDLP （液體培養(yǎng)基）。f）磷酸緩沖液準(zhǔn)備磷酸二氫鉀34.0g放到燒瓶?jī)?nèi)，添加精制水或者離子交換水500ml進(jìn)行混合，充分溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)整PH值，使PH值在7.07.2之間（25 r）。進(jìn)而，添加精制水或者離子交換水使之達(dá)到1000ml。必要的情

13、況下，注入試管或者三角錐瓶中，塞上綿栓進(jìn)行高壓蒸汽殺菌。不可使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月的磷 酸緩沖液培養(yǎng)基。g）磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液用生理鹽水（0.85%氯化鈉溶液）800倍的量稀釋磷酸溶液，必要的情況下，注入 試管或者三角錐瓶中，塞上綿栓進(jìn)行高壓蒸汽殺菌。不可使用調(diào)至超過(guò)一個(gè)月的磷 酸鹽緩沖液。525菌種準(zhǔn)備移植無(wú)菌的測(cè)試菌種，有必要時(shí)使用安全裝置。一方面持斜面培養(yǎng)基和儲(chǔ)存的菌種 準(zhǔn)備移植，另一方面持白金圈的手把，用這只手拔出棉塞，然后用火焰對(duì)測(cè)試管口 和白金圈進(jìn)行消毒，用白金圈的頂端粘濃縮水到新的斜面培養(yǎng)基上并冷卻它，用白 金圈從培養(yǎng)基表面挖部分菌種并鋪平在新的斜面培養(yǎng)基上，鋪成條狀。并對(duì)管口用

14、 火焰進(jìn)行再次消毒，塞住棉塞保持原狀。消毒白金圈，在35+/-1C下接種培養(yǎng)24-48小時(shí)，后儲(chǔ)存在5-10r環(huán)境下，一個(gè)月內(nèi)進(jìn)行移植，培養(yǎng)基的的轉(zhuǎn)移不能超過(guò) 10次，從最初的菌種管理部門獲得計(jì)算。此外，當(dāng)最后一次移植起超過(guò)一個(gè)月或 是更多，以下移植不能被使用。圖1細(xì)菌移轉(zhuǎn)備注2:如圖1所示，用白金圈的尖端插入濃縮水中，后分散菌種，使用白金圈拉 一條斜直線到上部，再次插入白金圈到濃縮水中拉Z字形到上部。備注：菌種的保存符合相關(guān)協(xié)會(huì)規(guī)定。菌種獲取的機(jī)構(gòu)必須是國(guó)際菌種保藏中心（WFCC）的成員或日本菌種保藏協(xié)會(huì)（JSCC）的成員。5.2.6測(cè)試菌種無(wú)菌處理，注意器械、人員、工作環(huán)境的無(wú)菌處理，必要

15、的情況下使用無(wú)菌 箱。A ）細(xì)菌培養(yǎng)使用白金圈從原菌種移植到斜面培養(yǎng)基，在35+/-1 r培養(yǎng)16-24小時(shí)，然后從此接Page 5 / Total 8JIS_Z_2801: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial種體使用白金圈接種到另一個(gè)斜面培養(yǎng)基，在"35+/-任下培養(yǎng)16-20小時(shí)。B）準(zhǔn)備測(cè)試片把被測(cè)試片切成標(biāo)準(zhǔn)5cm2厚度（3）為1cm的正方形，準(zhǔn)備6片沒(méi)有處理的測(cè)試 片（5）和3片抗菌測(cè)試片（4）,如果未處理過(guò)的測(cè)試片不好準(zhǔn)備，可以使用 5.2.2的薄膜替代，避免測(cè)試片間的相互污染，盡量從產(chǎn)品本身切取測(cè)試片

16、，如因 產(chǎn)品形狀問(wèn)題不能準(zhǔn)備，可以采用相同的加工工藝方法生成測(cè)試片。備注3如果被測(cè)試產(chǎn)品測(cè)試片不好準(zhǔn)備，測(cè)試片尺寸沒(méi)有特別規(guī)定，只要能被薄膜覆蓋400 1600mm2即可。備注4測(cè)試片從沒(méi)有處理過(guò)和產(chǎn)品中切除。備注56個(gè)未處理的測(cè)試片中，使用3個(gè)測(cè)試片接種后馬上測(cè)試活性細(xì)胞數(shù)值，另 外3個(gè)計(jì)算接種24小時(shí)后的活細(xì)胞數(shù)。C）測(cè)試片清洗用紗布或脫脂棉粘上酒精擦拭2-3次，充分干燥。如果經(jīng)過(guò)處理后測(cè)試表面變軟、表層分開(kāi)，如果影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，樣片清洗會(huì)導(dǎo)致軟 化、表面涂層溶解及溶出，應(yīng)該避免清洗，或用沒(méi)有清洗的測(cè)試片，也可用其它適 合的方式清潔。D）測(cè)試接種體準(zhǔn)備用精制水稀釋細(xì)菌懸濁液用營(yíng)養(yǎng)肉湯，調(diào)整P

17、H值為6.87.2之間，用高壓蒸汽殺菌，使用量為1/500NB （營(yíng)養(yǎng)肉湯）取約1/500量的預(yù)培養(yǎng)菌種在平面均勻疏散， 并在顯微鏡下觀測(cè)數(shù)量?；蛘哂闷渌椒ǎm當(dāng)稀釋1/500的營(yíng)養(yǎng)肉湯讓細(xì)菌數(shù)量是2.5*105細(xì)胞每毫升，使用這種溶液當(dāng)做接種體。如果接種體沒(méi)有馬上使用，在 0C保存并在4小時(shí)內(nèi)使用。E）測(cè)試接種體的接種在接種過(guò)程中，將各個(gè)試驗(yàn)片分別放入滅菌的平皿中，實(shí)驗(yàn)測(cè)試面朝上（6）。然后將0.4毫升的試驗(yàn)菌液滴到每個(gè)試驗(yàn)片上（7），再用薄膜（8）覆蓋，壓平以使 菌液散開(kāi)然后蓋上蓋子，注意不能讓試菌液溢出薄膜。如圖 2圖2滴接種體到測(cè)試表面并用薄膜履蓋備注6測(cè)試表面是指抗菌產(chǎn)品表面，不能

18、用橫截面。備注7測(cè)試片接種體的量根據(jù)測(cè)試接種表面的面積不同分開(kāi)使用不同的比率接種 體，即卩Page 6 / Total 8JIS_Z_2801: 2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial曰.量。使測(cè)試片是標(biāo)準(zhǔn)片，一測(cè)試片很濕,像陶瓷，瓷磚,瓷釉，4璃也許少許傾斜，這個(gè)接 種體就會(huì)溢出薄膜。在這種情況下，接種體的量就可以減少到1/4的標(biāo)準(zhǔn)量。如果接種體被減少，被接種在每個(gè)測(cè)試片上的細(xì)胞數(shù)量為 1.0-4.0*105類似于標(biāo)準(zhǔn)的測(cè) 試片。這種情況測(cè)試接種體量不能按照 D）的規(guī)定，但是可以從被接種體的接種量 計(jì)算。備注8薄膜的標(biāo)準(zhǔn)尺寸為

19、正方形40 mm ±2 mm。如果測(cè)試片不是標(biāo)準(zhǔn)的尺寸，調(diào) 整使薄膜能覆蓋到測(cè)試片內(nèi)的2.5mm。不行，調(diào)整薄膜的尺寸不小 400mm2。再 次，因測(cè)試產(chǎn)品的不平整形狀等問(wèn)題不能很好讓薄膜吸附在上面，如因測(cè)試產(chǎn)品會(huì) 親水或吸水問(wèn)題這個(gè)過(guò)程可以考慮不用薄膜。f）測(cè)試片的接種體培養(yǎng)三個(gè)未處理的測(cè)試片和三個(gè)抗菌測(cè)試片在無(wú)菌器皿中進(jìn)行24小時(shí)±小時(shí)的接種體培養(yǎng)，溫度為35 r ±1C相對(duì)溫度為不少于90%下進(jìn)行。參考信息：抗菌產(chǎn)品的抗菌有效性從抗菌產(chǎn)品在一定的測(cè)試條件下測(cè)試中獲得的抗菌活性值來(lái) 評(píng)估，但是特定條件溫度也要考慮抗菌產(chǎn)品的實(shí)際使用環(huán)境條件。g）菌洗液洗脫（9）

20、1）三個(gè)未經(jīng)過(guò)處理的測(cè)試片在接種接種體后馬上用菌洗液洗脫，用薄膜蓋住并用 已滅菌的鑷子把測(cè)試片放置于已滅菌的兜帶中，注意不要讓接種體溢出，用吸管加 入10ml的SCDLP營(yíng)養(yǎng)肉湯，用手或抽取器充分按摩履蓋物和測(cè)試片，立刻著手 計(jì)算在洗脫液中的活細(xì)胞數(shù)量。2）接種體培養(yǎng)后的測(cè)試片同1）的方法進(jìn)行洗脫，并計(jì)算出活細(xì)胞數(shù)量。備注9洗出來(lái)的細(xì)菌，如果有其它更好的方法也可以使用，如果因?yàn)楫a(chǎn)品特性或是 尺寸等原因用10ml的SCKLP肉湯不能洗脫，可以增加洗脫量。h）瓊脂平皿培養(yǎng)法活細(xì)胞數(shù)計(jì)算用吸管取1ml的洗脫液，把它放置在有9ml的磷酸鹽緩沖液中，充分混合，然后 從這個(gè)測(cè)試管中用新的吸管吸取1ml測(cè)試

21、液到另外一個(gè)9ml磷酸鹽緩沖液中充分 混合，重復(fù)這個(gè)動(dòng)作，準(zhǔn)備稀釋成10倍的溶液。分配1ml的洗液和各種稀釋液到 無(wú)菌平皿中，在每個(gè)平皿中加入15-20ml平板計(jì)數(shù)瓊脂加熱到46-48 C并充分混 合，平皿加上蓋子，放入標(biāo)準(zhǔn)室溫環(huán)境中，凝固后把培養(yǎng)基翻過(guò)來(lái)，在室溫 35±C的情況下培養(yǎng)40至48小時(shí)。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，計(jì)算稀釋平皿中的細(xì)菌落數(shù)，是 否有30到300菌落數(shù)出現(xiàn)，如果用1ml的洗脫液洗脫在平板瓊脂中細(xì)菌數(shù)少于 30，然后計(jì)算這個(gè)盤子的細(xì)菌數(shù)量。如果在這個(gè)平板瓊脂中沒(méi)有任何菌種生成，記 錄為< 1,進(jìn)一步，如果細(xì)菌的數(shù)量沒(méi)有和稀釋率成相反的比例，就要考慮抗菌劑 對(duì)菌種培養(yǎng)形成的影響。然后決定使用滅活劑或稀釋物不影響菌種形成的抗菌劑方 法來(lái)計(jì)算活細(xì)胞數(shù)量。參考：菌落數(shù)其它方法，參考微生物試験法(平板培養(yǎng)法(貼膜法)日本藥學(xué)會(huì)編 制衛(wèi)生試驗(yàn)法注解2000);污染指標(biāo)菌1細(xì)菌數(shù)食品衛(wèi)生指針微生物局監(jiān)制 5.2.7活菌數(shù)的計(jì)算活菌數(shù)的計(jì)算：N=( CXDXV)其中N:每個(gè)樣片活菌數(shù)；Page 7 / Total 8JIS_Z_280