感染的檢查與防治

1、2022-1-141第十章第十章 病原微生物病原微生物感染的檢查及防治原感染的檢查及防治原則則第一節(jié) 細(xì)菌感染的檢查2022-1-142標(biāo)本的采集和送檢避免雜菌污染運(yùn)送注意保存不同期不同標(biāo)本用抗菌素以前采集病變明顯部位標(biāo)本必須新鮮2022-1-143一、細(xì)菌學(xué)診斷，病原菌的檢查程序藥物敏感試驗(yàn)直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷檢測(cè)核酸（雜交、PCR、DNA指紋）其他檢測(cè)技術(shù)（測(cè)抗原）（檢測(cè)病原菌）2022-1-144原理二、血清學(xué)診斷 雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清中抗體效價(jià)比急性期血清中抗體效價(jià)升高4倍者方有意義種類 標(biāo)本凝集試驗(yàn)：沉淀試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：中和試驗(yàn)： 肥

2、達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、顯微鏡凝集試驗(yàn)等梅毒VDRL、RPR試驗(yàn)等抗“O”試驗(yàn)等Q熱柯克斯體抗體檢測(cè)等2022-1-145 將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體獲得免疫力的一種防治微生物感染的措施。第二節(jié) 細(xì)菌感染的免疫防治一、人工主動(dòng)免疫人工主動(dòng)免疫主要生物制品死疫苗活疫苗類毒素亞單位疫苗DNA重組疫苗核酸疫苗治療性疫苗2022-1-146抗毒素細(xì)胞免疫制劑二、人工被動(dòng)免疫二、人工被動(dòng)免疫 注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力主要生物制品抗菌血清胎盤球蛋白丙種球蛋白2022-1-147區(qū)別要點(diǎn)區(qū)別要點(diǎn)人工主動(dòng)免疫人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫人工被動(dòng)

3、免疫免疫物質(zhì)免疫物質(zhì)抗原抗原抗體或細(xì)胞因子等抗體或細(xì)胞因子等免疫出現(xiàn)時(shí)間免疫出現(xiàn)時(shí)間滿，滿，24周周快，立即快，立即免疫維持時(shí)間免疫維持時(shí)間長，數(shù)年長，數(shù)年數(shù)月數(shù)月短，短，23周周主要用途主要用途預(yù)防預(yù)防治療或緊急預(yù)防治療或緊急預(yù)防2022-1-148比較區(qū)別點(diǎn)區(qū)別點(diǎn)死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制劑特點(diǎn)制劑特點(diǎn)死，強(qiáng)毒株死，強(qiáng)毒株活減毒株活減毒株接種劑量與特點(diǎn)接種劑量與特點(diǎn)量較大，量較大，23次次 量較小，量較小，1次次保存及有效期保存及有效期易保存，約易保存，約1年年不易保存，不易保存，4數(shù)周數(shù)周免疫效果免疫效果較低，較低，維持?jǐn)?shù)月維持?jǐn)?shù)月2年年較高，較高，維持維持35年甚至更長年甚至更長202

4、2-1-149 第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查 標(biāo)本的采集與送檢標(biāo)本的采集與送檢 用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本： a a、采集急性期標(biāo)本、采集急性期標(biāo)本 b b、采集感染部位標(biāo)本、采集感染部位標(biāo)本 c c、冷藏、冷藏 血清學(xué)診斷的標(biāo)本：血清學(xué)診斷的標(biāo)本： 急性期和恢復(fù)期急性期和恢復(fù)期雙份血清雙份血清，-20-20保存保存2022-1-14102022-1-1411動(dòng)物接種動(dòng)物接種雞胚接種雞胚接種組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)2022-1-1412常用的細(xì)胞培養(yǎng)常用的細(xì)胞培養(yǎng)類型名稱原代細(xì)胞培養(yǎng)恒河猴腎細(xì)胞培養(yǎng)， 人胚腎、

5、 肺等細(xì)胞培養(yǎng)，雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞株WI-38（人胚肺細(xì)胞株） ，HL-8（恒河猴胚細(xì)胞株）傳代細(xì)胞系Hela 細(xì)胞，Detroit 細(xì)胞（胸骨髓細(xì)胞系） ，Chang C/I/L/K（人結(jié)膜 C，腸 I，肝 L 與腎K 細(xì)胞系） ，Vero（綠猴腎細(xì)胞系） ，BHK-21（幼地鼠腎細(xì)胞系）2022-1-14132022-1-1414（二）病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)1、CPE2、紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞病變細(xì)胞2022-1-1415狂犬病毒包涵體（Negri body）3.包涵體2022-1-1416巨細(xì)胞病毒包涵體4.免疫技術(shù)2022-1-1417（三）（三）病毒數(shù)量和感染性病毒數(shù)量和感染性

6、測(cè)定測(cè)定1 1、蝕斑試驗(yàn)斑試驗(yàn)2 2、IDID5050 或或 TCIDTCID5050 病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起 50% 發(fā)生死亡或病變的最小量。 病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。2022-1-1418病毒的快速診斷光鏡-包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交Southern blotPCRNorthern blot2022-1-1419檢測(cè)病毒抗原與抗體檢測(cè)病毒抗原與抗體 已知抗體測(cè)病毒感染脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞中的已知抗體測(cè)病毒感染脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞

7、中的抗原抗原 已知抗原測(cè)血清中已知抗原測(cè)血清中抗體抗體測(cè)測(cè)IgMIgM，或動(dòng)態(tài)測(cè)，或動(dòng)態(tài)測(cè)IgGIgG（雙份血清）（雙份血清） 三、檢測(cè)病毒核酸三、檢測(cè)病毒核酸 PCRPCR試驗(yàn)試驗(yàn) 引物引物 核酸雜交試驗(yàn)核酸雜交試驗(yàn) 探針探針 基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)2022-1-1420第四節(jié)病毒感染的防治第四節(jié)病毒感染的防治一、病毒感染的治療一、病毒感染的治療（一）藥物治療（一）藥物治療 1.1.核苷類藥物核苷類藥物 2.蛋白酶抑制劑 3.3.天然藥物天然藥物（二）基因治療（二）基因治療 1.1.反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸 2. 2. 核酶核酶（三）免疫治療2022-1-1421 1.1.核苷類藥

8、物核苷類藥物（1 1）抑制病毒基因復(fù)制）抑制病毒基因復(fù)制 碘尿苷碘尿苷( (皰疹凈皰疹凈) )用異常嘧啶取代胸腺嘧啶用異常嘧啶取代胸腺嘧啶, ,眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞DNA,DNA,故有毒性。故有毒性。 無環(huán)鳥苷無環(huán)鳥苷( (啊昔洛韋啊昔洛韋) ) ，競爭病毒復(fù)制酶。，競爭病毒復(fù)制酶。（2 2）抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄）抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄 病毒唑病毒唑 2.蛋白酶抑制劑 “雞尾酒雞尾酒”治療治療HIVHIV，3TC3TC加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 3.3.天然藥物天然藥物 中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉2022-1-1422 （二）基

9、因治療（二）基因治療 1.1.反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸( (反義反義DNA)DNA) 與病毒與病毒DNADNA關(guān)鍵基因互補(bǔ)關(guān)鍵基因互補(bǔ) 反義寡核苷酸反義寡核苷酸( (反義反義RNA)RNA) 與病毒與病毒RNARNA關(guān)鍵基因互補(bǔ)關(guān)鍵基因互補(bǔ) 2. 2. 核酶核酶 與病毒與病毒RNARNA結(jié)合結(jié)合, ,切割降解靶切割降解靶RNARNA （三）免疫治療 細(xì)胞因子：干擾素、細(xì)胞因子：干擾素、TNFTNF、IL-12IL-12等等2022-1-1423 策略：阻斷病毒復(fù)制周期中策略：阻斷病毒復(fù)制周期中吸附穿入吸附穿入、 脫殼脫殼、核酸復(fù)制核酸復(fù)制、或、或裝配釋放裝配釋放 任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒

10、復(fù)制任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒復(fù)制 要求：抗病毒藥物能穿入細(xì)胞選擇性地要求：抗病毒藥物能穿入細(xì)胞選擇性地 抑制病毒復(fù)制又不損傷宿主細(xì)胞抑制病毒復(fù)制又不損傷宿主細(xì)胞 1 1、阻斷吸附、阻斷吸附 特異免疫球蛋白特異免疫球蛋白中和抗體中和抗體 如：乙腦病毒包膜抗原的單抗如：乙腦病毒包膜抗原的單抗2022-1-1424 可溶性的病毒受體可溶性的病毒受體 如：如：HIV HIV 用可溶性用可溶性CD4 CD4 （不理想）（不理想） 2 2、抑制脫殼、抑制脫殼 如：金剛烷胺，用于流感病毒的防治如：金剛烷胺，用于流感病毒的防治 （副作用大）（副作用大） 3 3、抑制核酸復(fù)制、抑制核酸復(fù)制 a.a.核苷類化合物核

11、苷類化合物( (最早用于臨床治療最早用于臨床治療) ) 用異常嘧啶取代胸腺嘧啶用異常嘧啶取代胸腺嘧啶 如如: :碘尿苷碘尿苷( (皰疹凈皰疹凈),),眼皰疹病毒感染眼皰疹病毒感染 2022-1-1425 也可滲入細(xì)胞也可滲入細(xì)胞DNA,DNA,故有毒性故有毒性 無環(huán)鳥苷無環(huán)鳥苷( (啊昔洛韋啊昔洛韋) ) 毒性作用小毒性作用小 b.b.抗病毒基因治療抗病毒基因治療 反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸( (反義反義DNA)DNA) 與病毒與病毒DNADNA關(guān)鍵基因互補(bǔ)關(guān)鍵基因互補(bǔ) 反義寡核苷酸反義寡核苷酸( (反義反義RNA)RNA) 與病毒與病毒RNARNA關(guān)鍵基因互補(bǔ)關(guān)鍵基因互補(bǔ) 核酶核酶 與

12、病毒與病毒RNARNA結(jié)合結(jié)合, ,切割降解靶切割降解靶RNA RNA 2022-1-1426 c.c.病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 病毒蛋白酶病毒蛋白酶: :病毒復(fù)制病毒復(fù)制 轉(zhuǎn)錄后剪接、加工轉(zhuǎn)錄后剪接、加工 如：如：“雞尾酒雞尾酒”治療治療HIVHIV 3TC 3TC加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 d.d.細(xì)胞因子：干擾素、細(xì)胞因子：干擾素、TNFTNF、IL-12IL-12等等 4 4、疫苗治療、疫苗治療 如：乙肝、如：乙肝、HIVHIV、狂犬病疫苗、狂犬病疫苗 5 5、中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉、中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉 2022-1-1427 二、病毒感染的預(yù)防二、病

13、毒感染的預(yù)防（一）人工主動(dòng)免疫（一）人工主動(dòng)免疫（artificial active immunityartificial active immunity） 定義：是將疫苗或類毒素接種于人體，使定義：是將疫苗或類毒素接種于人體，使 機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫力，抵抗微生機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫力，抵抗微生 物感染，主要用于預(yù)防。物感染，主要用于預(yù)防。 2022-1-1428 制劑：制劑： 1 1）死疫苗死疫苗：選用免疫原性強(qiáng)的病原，：選用免疫原性強(qiáng)的病原， 經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法 殺死或滅活。殺死或滅活。 2 2）活疫苗活疫苗：用減毒的或無毒力的活：用減毒的或無毒力的活 病

14、原體制成病原體制成 3 3）類毒素類毒素：細(xì)菌外毒素經(jīng)：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3%-0.4%0.3%-0.4% 甲醛處理獲得甲醛處理獲得2022-1-1429 4)4)基因工程疫苗基因工程疫苗: :重組重組DNADNA表答的病原蛋白表答的病原蛋白 5)5)核酸疫苗核酸疫苗:DNA:DNA和和RNARNA疫苗疫苗, ,由載體和編碼由載體和編碼 病原體某種抗原的病原體某種抗原的cDNAcDNA或或 mRNAmRNA組成組成 6)6)其它其它: :合成肽疫苗、抗獨(dú)特型疫苗等合成肽疫苗、抗獨(dú)特型疫苗等2022-1-1430（二）人工被動(dòng)免疫（二）人工被動(dòng)免疫（artificial passive immun

15、izationartificial passive immunization） 定義：定義： 注射含有特異性抗體的免疫血清注射含有特異性抗體的免疫血清 或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等細(xì)胞免疫制劑，使機(jī)體即刻獲得特異性免疫，主要用于治療或緊急預(yù)防。子等細(xì)胞免疫制劑，使機(jī)體即刻獲得特異性免疫，主要用于治療或緊急預(yù)防。2022-1-1431如：血清免疫球蛋白如：血清免疫球蛋白 用于甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎預(yù)防用于甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎預(yù)防 高效價(jià)含乙肝病毒表面抗體的免疫高效價(jià)含乙肝病毒表面抗體的免疫 球蛋白球蛋白 用于預(yù)防母嬰乙肝傳播用于預(yù)防母嬰乙肝傳播2022-1-

16、1432一、細(xì)菌學(xué)診斷，病原菌的檢查程序藥物敏感試驗(yàn)直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷檢測(cè)核酸（雜交、PCR、DNA指紋）其他檢測(cè)技術(shù)（測(cè)抗原）（檢測(cè)病原菌）2022-1-1433 第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查 標(biāo)本的采集與送檢標(biāo)本的采集與送檢 用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本： a a、采集急性期標(biāo)本、采集急性期標(biāo)本 b b、采集感染部位標(biāo)本、采集感染部位標(biāo)本 c c、冷藏、冷藏 血清學(xué)診斷的標(biāo)本：血清學(xué)診斷的標(biāo)本： 急性期和恢復(fù)期急性期和恢復(fù)期雙份血清雙份血清，-20-20保存保存2022-1-1434（三）（三）病毒數(shù)量和感染性病毒數(shù)量和感

17、染性測(cè)定測(cè)定1 1、蝕斑試驗(yàn)斑試驗(yàn)2 2、IDID5050 或或 TCIDTCID5050 病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起 50% 發(fā)生死亡或病變的最小量。 病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。2022-1-1435第四節(jié)病毒感染的防治第四節(jié)病毒感染的防治一、病毒感染的治療一、病毒感染的治療（一）藥物治療（一）藥物治療 1.1.核苷類藥物核苷類藥物 2.蛋白酶抑制劑 3.3.天然藥物天然藥物（二）基因治療（二）基因治療 1.1.反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸 2. 2. 核酶核酶（三）免疫治療2022-1-1436 1.1.核苷類藥物核苷類藥物（1 1）抑制病毒基因復(fù)制）抑制病毒基因復(fù)制 碘尿苷碘尿苷( (皰疹凈皰疹凈) )用異常嘧啶取代胸腺嘧啶用異常嘧啶取代胸腺嘧啶, ,眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞DNA,DNA,故有毒性。故有毒性。 無環(huán)鳥苷無環(huán)鳥苷( (啊昔洛韋啊昔洛韋) ) ，競爭病毒復(fù)制酶。，競爭病毒復(fù)制酶。（2 2）抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄）抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄 病毒唑病毒唑 2.蛋白酶抑制劑 “雞尾酒雞尾酒”治療治療HIVHIV，3TC3TC加蛋白酶抑制