大豆異黃酮對缺血性腦梗塞大鼠氧化損傷保護(hù)作用的研究

1、大豆異黃酮對缺血性腦梗塞大鼠氧化損傷保護(hù)作用的研究【摘要】目的:觀察大豆異黃酮(soybean isoflavone,SI對缺血性腦梗塞大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用,并探討其機(jī)制。方法:SD大鼠60只,雌雄各半。隨機(jī)分成6組,即模型組,假手術(shù)組,VE對照組,SI高、中、低劑量組(50、20、10mg/kg體重。灌胃前內(nèi)眥取血,灌胃給藥4周后采用線栓法制備大腦中動脈栓塞模型,造模成功后24小時(shí)股動脈放血處死。取動脈血,測血清中,超氧化物歧化酶(SOD、乳酸脫氫酶(LDH、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX活力,丙二醛(MDA、一氧化氮(NO含量。結(jié)果:與模型組相比中、高SI劑量組GSH- PX活性、NO含量較

2、高,LDH活性、MDA含量較低,低、中、高SI劑量組SOD活力較高。結(jié)論:大豆異黃酮可使缺血性腦梗塞大鼠抗氧化能力有一定提高。【關(guān)鍵詞】大豆異黃酮;腦梗塞;NOEffects of soybean isoflavones on antioxidant system in ratwith focal cerebral ischemia injury【ABSTRACT】Objective: To investigate the protective effects and mechanisms of soybean isoflavone (SIon antioxidant capacity in

3、rat with cerebral ischemia injury. Methods: 60 SD rats assigned randomly into model,sham operation,VE control,high,middle and low SI dosage groups(The dosages were 50、20、10mg/kg,respectively. 4 weeks later,the rats were made into the model of cerebral ischemia reperfusion by suture method. The conte

4、nt of MDA and NO and activity of SOD,GSH-PX and LDH were measured. Results: The activity of GSH-PX and LDH and the level of MDA and NO in the middle and high dose groups were statistically significant,respectively.There were no significant differences among the activity of SOD in the,middle and high

5、 dose groups. Conclusion: SI plays some roles in enhancing the function of antioxidant system in the rats with cerebral ischemia injury.【KEY WORDS】Soybean isoflavones;Cerebral ischemia;NO近年來心腦血管疾病的發(fā)病率日益上升,其中缺血性腦血管病(Ischemic cerebral vascular diseases,ICVD作為常見病、多發(fā)病,愈后差,致死率和致殘率高,給家庭和社會造成很大負(fù)擔(dān),引起人們的廣泛關(guān)注

6、。ICVD損傷的機(jī)制十分復(fù)雜,目前的研究認(rèn)為引發(fā)并加重腦缺血損傷的主要是氧自由基和一氧化氮(NO1,因此有效清除自由基是減輕腦缺血損傷的靶點(diǎn)之一。大豆異黃酮(soybean isoflavones,SI是一種天然的抗氧化劑。目前已發(fā)現(xiàn)的SI有12種,包括染料木素(genistein,金雀異黃素、三羥異黃酮、大豆黃素(daidzein,二羥異黃酮、黃豆苷原、黃豆黃素(glicitein及其相應(yīng)衍生物2。70年代以后,人們發(fā)現(xiàn)SI具有廣泛的生物學(xué)作用,如抑制腫瘤、降低血脂、軟化血管3,并對婦女更年期綜合征和骨質(zhì)丟失有一定的預(yù)防作用。研究發(fā)現(xiàn)其具有清除自由基和抗氧化作用4。本實(shí)驗(yàn)利用線栓法建立大鼠腦

7、缺血模型,研究SI的神經(jīng)保護(hù)作用并對其作用機(jī)制加以探討。1 材料與方法1.1材料大豆提取物(批號:20040720,SIF含量41.18%購于天津尖峰天然產(chǎn)物公司。VE購于Sigma公司。超氧化物歧化酶(SOD測定試劑盒,丙二醛(MDA測定試劑盒,谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX活力測試試劑盒,乳酸脫氫酶(LDH測定試劑盒,一氧化氮(NO測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。SD成年大鼠60只,雌雄各半,體重(230±30g,購于北大醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心,許可證號:SCXK(京:2002-0001。1.2 實(shí)驗(yàn)儀器酶標(biāo)儀為奧地利TECAN公司產(chǎn)品,離心機(jī)、水浴恒溫箱為國產(chǎn)儀器。1.3

8、 實(shí)驗(yàn)方法SD成年大鼠72只,雌雄各半,隨機(jī)分成6組,即模型組、假手術(shù)組、VE對照組、低劑量SI組、中劑量SI組、高劑量SI組,每組10只。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行4周,灌胃前內(nèi)眥取血, 3個(gè)劑量組分別以不同劑量的SI(10、20、50mg/kg體重灌胃給藥,假手術(shù)組和模型對照組灌以等量生理鹽水,VE組劑量以20mg/kg體重灌胃給藥,4周后停藥。手術(shù)造模,造模成功后24小時(shí)股動脈放血處死,取動脈血。首先進(jìn)行栓線處理:栓線全長80mm,在距一端18mm處做一標(biāo)記(藍(lán)色。大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3ml/100g體重,仰臥固定于手術(shù)臺上,頸部正中切口,剪開淺筋膜,顯露左側(cè)胸鎖乳突肌。鈍性分離胸鎖乳

9、突肌與胸骨舌骨肌問的肌間隙,暴露左側(cè)頸總動脈(common carotid artery,CCA和迷走神經(jīng)。鈍性分離CCA和迷走神經(jīng),注意避免損傷迷走神經(jīng)。找到左側(cè)頸外動脈(extemal carotid artery,ECA和頸內(nèi)動脈(intemal carotid artery,ICA分叉,分離ECA、ICA,結(jié)扎ECA近分叉端。在近心端和分叉前分別用動脈夾夾住CCA,在距動脈分叉5mm處用針扎一小口,插入栓線,松開分叉前的微動脈夾,線栓緩慢向ICA入顱方向推進(jìn),直到標(biāo)記至分叉處為止。將栓線與CCA結(jié)扎固定,松開近心端微動脈夾,剪除線栓多余末端,以防止其內(nèi)的線栓移動和出血,最后縫合皮膚。假

10、手術(shù)組除不插線外,其余步驟同其他各組。左側(cè)Horner征;右前肢癱瘓;腦組織,TTC染色:缺血部位蒼白,正常部位紅色。大鼠麻醉清醒后,提尾懸空時(shí)右側(cè)前肢內(nèi)收、屈曲,自主運(yùn)動時(shí)身體向右側(cè)轉(zhuǎn)圈。神經(jīng)功能評分(longa評分:0級,無神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損癥狀,活動正常;1級,對側(cè)前肢不能完全伸展;2級,爬行時(shí)相對側(cè)轉(zhuǎn)圈;3級,行走時(shí)身體向偏癱側(cè)傾倒;4級,不能自發(fā)行走,意識喪失。1-3級為造模成功。采用DTNB直接法,操作步驟按GSH-PX測試盒說明進(jìn)行。于波長412nm處測測定管、對照管、空白管、標(biāo)準(zhǔn)管吸光度,通過公式計(jì)算可求出被測樣品中的GSH-PX活力。血清中GSH-PX活性定義為每0.1毫升血清

11、在37反應(yīng)5分鐘,扣除非酶促反應(yīng)作用,是反應(yīng)體系中GSH濃度降低1mol/L為一個(gè)活力單位。采用黃嘌呤氧化酶法,操作步驟按SOD測試盒說明進(jìn)行。于波長550nm處測測定管、對照管吸光度,借助反應(yīng)體系得稀釋倍數(shù),通過公式計(jì)算可求出被測血清中的SOD活力。血清血漿中SOD活性定義為每毫升反應(yīng)中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對應(yīng)的SOD量為一個(gè)活力單位。采用硝酸還原酶法,操作步驟按NO試劑盒說明進(jìn)行。于550nm處測測定管、空白管、標(biāo)準(zhǔn)管吸光度,利用公式計(jì)算出NO的含量。采用常規(guī)酶方法,操作步驟按試劑盒說明進(jìn)行。于波長440nm處測測定管、測定空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度,通過公式計(jì)算可求出被測血清血

12、漿中的LDH活力。血清中LDH活性定義為1000ml血清37與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中產(chǎn)生1mol丙酮酸為1單位。采用硫代巴比妥酸(TBA法,操作步驟按MDA測定試劑盒說明進(jìn)行,于532nm處測測定管、對照管、空白管、標(biāo)準(zhǔn)管吸光度,通過公式計(jì)算可求出被測定血清內(nèi)MDA含量。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各項(xiàng)指標(biāo)均以x±s表示,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。多組間比較用單因素方差分析(F檢驗(yàn),若組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,采用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較,檢驗(yàn)水準(zhǔn)=0.05。2 結(jié)果2.1 造模結(jié)果假手術(shù)組無癥狀,其余各組大鼠出現(xiàn)左側(cè)Horner征;右側(cè)前肢癱瘓:右側(cè)前肢不能前伸,爬

13、行時(shí)向右傾倒或向右轉(zhuǎn)圈;TTC染色:缺血部位蒼白,正常部位紅色(如圖1,表明造模成功。圖1:TTC染色結(jié)果,白色為梗死部位2.2 抗氧化指標(biāo)測定結(jié)果表1 大鼠血清中GSH-PX、SOD、LDH活性組別n GSH-PX(U/mlSOD(U/mlLDH(U/L低劑量組10 373.00±12.83 400.62±35.08 6174.90±617.94中劑量組10 372.00±10.45 388.15±56.49 5987.04±607.33高劑量組10 376.20±8.02 373.05±43.03 5763.5

14、6±745.78VE對照組10 368.40±8.73 401.63±58.99 5922.26±913.80假手術(shù)組10 381.20±8.55 396.19±36.83 5904.45±590.26模型組10 369.40±7.43 401.22±61.62 4833.20±977.66 經(jīng)方差分析,灌胃前六組血中GSH-PX、SOD、LDH活性之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=8.454,F=0.507,F=0.352,P>0.05(見表1。 表2 大鼠血清中NO、MDA含量組別nNO(mo

15、l/lMDA(nmol/ml低劑量組10 3.17±0.53 10.84±2.95中劑量組10 3.07±0.82 10.33±2.86高劑量組10 3.33±1.09 8.76±2.66VE對照組10 2.61±1.00 9.89±2.48假手術(shù)組10 3.33±0.96 11.08±0.99模型組10 2.99±0.55 11.0±2.48 經(jīng)方差分析,灌胃前六組血中NO、MDA含量之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.991, F=1.296,P>0.05(見表2。表3

16、SI對大鼠血清中GSH-PX活性的影響(x±s,U/ml組別n 造模后低劑量組8 363.37±40.93bc中劑量組9 372.71±54.50abc高劑量組9 420.36±44.64aVE對照組 5 433.17±45.33a假手術(shù)組9 349.19±46.65c模型組8 324.06±41.44a P<0.05,與模型組比較b P<0.05,與高劑量組比較;c P<0.05,與VE對照組比較 圖2 SI對大鼠血清中GSH-PX活性的影響(U/ml造模后GSH-PX活性經(jīng)方差分析各組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,

17、F=5.965,P=0.000。與模型組相比SI中、高劑量組、VE對照組GSH-PX活力均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值分別為0.035,0.000,0.000。SI低、中劑量組與高劑量組間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,GSH-PX活力高劑量組與中劑量組,高劑量組與低劑量組比較差別分別由統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SI低、中劑量組、假手術(shù)組、模型組與VE組比較均有差異,且差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高濃度組與VE組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見表3,見圖2表4 SI對大鼠血清中SOD活性的影響(x±s,U/ml組別n 造模后低劑量組8 319.77±55.96abcd中劑量組9 373.48±43.19a

18、bd高劑量組9 422.17±38.80aVE對照組 5 431.42±42.16a假手術(shù)組9 270.78±55.75ad模型組8 219.65±31.53a P<0.05,與模型組比較;b P<0.05,與高劑量組比較;c P<0.05,與中劑量組比較;d P<0.05,與VE對照組比較; 圖3 SI對大鼠血清中SOD活性的影響(U/ml造模后SOD活性經(jīng)方差分析各組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=26.170,P=0.000。與模型組相比SIF低、中、高劑量組、VE組、假手術(shù)組SOD活力均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P 值分別為0.000

19、,0.000,0.000,0.000,0.026。SI低、中、高劑量組間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SIF低、中劑量組、假手術(shù)組、模型組與VE組比較均有差異,且差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高濃度組與VE組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表4,見圖3。表5 SI對造模后大鼠血清中NO含量的影響(x±s,mol/L組別n 造模后低劑量組8 6.74±1.70abc中劑量組9 10.75±2.93abc高劑量組9 19.54±5.76aVE對照組 5 18.10±4.72a假手術(shù)組9 25.33±5.92模型組8 5.65±1.84aca P<0.0

20、5,與模型組比較;b P<0.05,與高劑量組比較;c P<0.01,與VE對照組比 經(jīng)方差分析各組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=30.197,P=0.000。與模型組相比SI低、中、高劑量組、VE對照組、假手術(shù)組NO含量均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值分別為0.000, 0.000,0.003,0.014,0.000。SI低、中劑量組與高劑量組間差別具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SI低、中劑量組、假手術(shù)組、模型組與VE組比較均有差異,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高劑量組與VE組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表5,見圖4。表6造模后大鼠血清中LDH活性(x±s,U/L組別n 造模后低劑量組8 7905.70

21、±633.79bc中劑量組9 7247.14±997.46abc高劑量組9 6108.15±1204.85aVE對照組 5 5988.79±1456.30ac假手術(shù)組9 7438.38±740.21c模型組8 8345.72±810.94a P<0.01,與模型組比較;b P<0.01,與高劑量組比較;c P<0.01,與VE對照組比較 經(jīng)方差分析各組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F =6.963,P =0.000。與模型組相比SI 中、高劑量組、VE 對照組LDH 活性均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P 值分別為0.025,0.00

22、0,0.000。SI 低、中劑量組與高劑量組間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SI 低、中劑量組、假手術(shù)組、模型組與VE 組比較均有差異,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高濃度組與VE 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表6,見圖5。表7 造模后大鼠血清中MDA 含量(x ±s ,nmol/ml 組別 n 造模后 低劑量組 8 28.96±3.67abc 中劑量組 9 22.88±5.46abc 高劑量組9 16.94±5.48a VE 對照組 5 16.09±5.14a 假手術(shù)組 9 34.10±3.39ac 模型組849.55±6.49a P <

23、;0.01,與模型組比較;b P <0.01,與高劑量組比較;c P <0.01, 與VE 對照組比較 圖6 造模后大鼠血清中MDA 含量(nmol/ml 經(jīng)方差分析各組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=47.975,P=0.000。與模型組相比SIF低、中、高劑量組、VE對照組、假手術(shù)組MDA含量均降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值分別為0.000, 0.000,0.000,0.000,0.000。SI低、中劑量組與高劑量組間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SI低、中劑量組、假手術(shù)組、模型組與VE組比較均差別且具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高劑量組與VE組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見表7,見圖6。表8 SI與各指標(biāo)雙變量相關(guān)性

24、分析結(jié)果經(jīng)相關(guān)分析各劑量組和抗氧化指標(biāo)之間有相關(guān)性(P<0.05。3 討論3.1 SI與腦缺血損傷許多研究表明腦缺血損傷與氧自由基的大量產(chǎn)生有密切關(guān)系?；钚匝踝杂苫蓪?dǎo)致膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA等生物大分子的損傷,引起腦細(xì)胞功能破壞。機(jī)體清除自由基、抗氧化的防御系統(tǒng)主要由酶促防御體系(如SOD、GSH-PX等和非酶促防御體系(如維生素C、維生素E以及食物中其它營養(yǎng)成分等兩部分組成的5。SI具有直接使自由基熄滅的能力,特別是金雀異黃素和大豆素。金雀異黃素含3個(gè)酚羥基,大豆甙元含2個(gè)酚羥基。酚羥基作為供氫體能與自由基反應(yīng),使之形成相應(yīng)的離子或分子,熄滅自由基,終止自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)6。SI不僅自

25、身具有一定的抗氧化作用而增強(qiáng)非酶促防御體系,它還可使體內(nèi)酶促抗氧化防御系統(tǒng)能力提高7。SI可以增強(qiáng)機(jī)體重要的抗氧化蛋白如SOD、MT、CAT等的活力,以起到間接清除自由基的作用。在生物膜的不飽和脂質(zhì)中,自由基的過氧化作用可破壞生物膜的結(jié)構(gòu),影響膜的生理功能。異黃酮類物質(zhì)可通過降低膜的流動性來穩(wěn)定膜,進(jìn)而起到抗氧化的作用8。3.2 SI與抗氧化指標(biāo)MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物之一。MDA能與細(xì)胞膜上酶和脂質(zhì)交聯(lián)形成變性高分子聚合物,導(dǎo)致細(xì)胞膜上酶和脂質(zhì)變性,降低了細(xì)胞膜的流動性。這些高分子化合物被溶酶體吞噬后,會逐漸蓄積成為脂褐質(zhì),沉淀在各種臟器內(nèi)的細(xì)胞中,阻礙細(xì)胞的正常代謝和功能,破壞核內(nèi)的

26、DNA、RNA,使細(xì)胞萎縮死亡9。MDA的含量常常可以反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化的速度和血管損傷程度以及氧化,細(xì)胞內(nèi)氧自由基存在的水平。機(jī)體內(nèi)存在的抗氧化系統(tǒng)包括酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng),而SOD是酶系統(tǒng)的重要組成部分,主要清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基,催化其發(fā)生歧化反應(yīng),阻斷和防止一系列自由基連鎖反應(yīng)的加劇,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)9。此酶活性與衰老、心腦血管疾病、腫瘤、炎癥等有著密切的關(guān)系,是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)。GSH-PX也是機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的重要成分,存在于人體各組織器官中,參與各種組織中糖酵解的中間代謝。它催化還原型谷胱甘肽(GSH成為氧化(GSSH,使有毒的過氧化物自由基還原為無害的羥基化物,使過

27、氧化物分解,從而保護(hù)細(xì)胞、組織免受過氧化物的損傷9。因此,MDA、SOD、GSH-PX成為最基本的抗氧化指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示:SI各劑量組的血清MDA含量均顯著低于模型組,差異有顯著性(P<0.01,MDA含量高劑量組、中劑量組、低劑量組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而SOD活性和GSH-PX活力均顯著高于模型組,差異有顯著性(P<0.01,GSH-PX活力高劑量組與中、低劑量組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,SOD活力高級量組、中劑量組、低劑量組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;說明SI可降低MDA 含量,提高SOD、GSH-PX活性,在一定程度上抑制了氧化作用的損傷,但低劑量組GSH-PX 活力與模型組比較

28、差異沒有顯著性意義,說明低劑量的SI抗氧化作用不明顯。LDH存在于人體各組時(shí)器官中。LDH是機(jī)體能量代謝中的一種重要酶,LDH的質(zhì)與量的改變,直接影響到機(jī)體的能量代謝,當(dāng)機(jī)體各組織器官病變時(shí),其組織器官本身的要發(fā)生改變,并且可引起血液中LDH改變。血清中LDH活性的變化可在一定程度上反應(yīng)組織受損情況10。當(dāng)機(jī)體各組織器官病變時(shí),可引起血液中LDH改變。它的改變,直接影響到機(jī)體的能量代謝,從而成為細(xì)胞損害的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SI中、高劑量組LDH 活性與模型組相比均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01。高劑量組與中劑量組、低劑量組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而低劑量組與中劑量組、模型組相

29、比均無差別,說明SI在一定程度上可降低LDH活性。NO是內(nèi)皮細(xì)胞中L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS作用下氧化生成的一種重要的生物活性物質(zhì),是心血管系統(tǒng)重要的調(diào)節(jié)因子,LDL和NO之間相互作用與心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)11。在心腦血管疾病的發(fā)生過程中涉及血液和血管壁的眾多細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子,NO是這些細(xì)胞分泌的信息傳遞物質(zhì)之一。作為細(xì)胞間信息傳遞分子,NO 具有減少體內(nèi)血小板的聚集,抑制血小板粘附以及內(nèi)皮細(xì)胞損傷所引起的血小板粘附、聚集及血栓形成的作用12。血管內(nèi)皮是心血管系統(tǒng)重要的保護(hù)屏障,同時(shí)也是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官,其分泌的多種活性物質(zhì)對于維護(hù)正常的血管緊張度至關(guān)重要,其中包括N

30、O。血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO,通過細(xì)胞膜迅速傳遞至血管平滑肌細(xì)胞,使平滑肌松弛,血管擴(kuò)張,從而調(diào)節(jié)血壓和血流分布。內(nèi)源性NO調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長,觸發(fā)血管活性物質(zhì),促進(jìn)血管生長與再生。血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的 NO 在生理、病理情況下均有保持血管內(nèi)皮細(xì)胞 完整性的作用13。NO 在缺血性腦損害所起的作用一直是研究的重點(diǎn)。近年來研究的結(jié)果 有分歧，例如應(yīng)用 NOS 抑制劑治療腦梗塞，有報(bào)道用后可減少梗塞灶體積；但也有報(bào)道用 后對梗塞灶體積無影響或反增大。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組血清 NO 濃度明顯低于其它各 組 （P<0.01）SI 低、 高劑量組 NO 活性與模型組相比均降低， 。 中、 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

31、意義 （P<0.01） 。 高劑量組與中劑量組、低劑量組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而低劑量組與中劑量組相比均無 差別，說明 SI 在一定程度上可增高 NO 含量。 綜上所述，SI 改善了腦缺血的氧化損傷，對損傷的腦部起到了一定的保護(hù)作用。 3.3 SI與維生素E作用的比較 維生素 E 又叫生育酚，是已經(jīng)肯定的最具有代表性的脂溶性天然抗氧化劑。自從 20 世紀(jì) 20 年代發(fā)現(xiàn)維生素 E 以來， 世界各國科學(xué)家針對其在維持正常生理過程和治療各種疾 病中的作用已經(jīng)展開了廣泛的研究。維生素 E 是最有效的脂質(zhì)過氧化的清道夫，它通過鈍 化過氧化自由基的活性或與脂質(zhì)過氧化自由基反應(yīng)抑制脂質(zhì)過氧化作用。維

32、生素 E 不但有 中斷氧化游離基的作用，而且能夠熄滅單線態(tài)氧，從而提高機(jī)體抗氧化能力。林勤等14使 用維生素 E 等抗氧化劑研究其對砷染毒小鼠毒作用的拮抗作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)灌以維生素 E 的 小鼠，其 SOD 活性升高，MDA 含量下降，并且 SOD 活性和 MDA 含量達(dá)到正常對照組水 平。維生素 E 能完全糾正染砷小鼠的脂質(zhì)過氧化的損傷。體外試驗(yàn)表明15，維生素 E 等抗 氧化營養(yǎng)素可通過保護(hù) LDL 免于同型半胱氨酸介導(dǎo)的氧化作用等機(jī)制而達(dá)到預(yù)防動脈粥 樣硬化發(fā)生的作用。本研究采用 VE+模型組（VE 濃度為 20mg/kg 體重）作為陽性對照組， 比較 SI 及 VE 對腦梗塞氧化損傷保護(hù)

33、作用的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SI 低、中劑量組與 VE 對照 組比較， NO、 GSH-PX、 SOD 較低， MDA、 而 LDH 含量較高， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05） ， 說明低、 中劑量的 SI 對腦梗塞氧化損傷保護(hù)作用弱于 20mg/kg 體重 VE。 高劑量組與 VE SI 對照組比較 NO、GSH-PX、SOD，MDA、LDH 均無顯著性差異（P>0.05） ，說明高劑量的 SI 對腦梗塞氧化損傷保護(hù)作用與 20mg/kg 體重 VE 相當(dāng)。 致謝：衷心感謝營養(yǎng)研究室的黃國偉、常紅、劉莉、王璇、王曉峰、劉歡老師在課題 研究中從始至終給予的熱情指導(dǎo)和幫助，感謝天津醫(yī)

34、科大學(xué)毒理學(xué)教研室田慶偉、王永明， 以及中心實(shí)驗(yàn)室的任大林老師在課題實(shí)驗(yàn)中給予的無私幫助與指導(dǎo)。在此謹(jǐn)對給予過我指 導(dǎo)、幫助、支持、鼓勵(lì)和無限關(guān)懷愛護(hù)的各位老師、朋友表示最誠摯的謝意！ 11 參考文獻(xiàn) 1 2 3 4 Adlerereutz CHT， Goldin BB， Gorbaeh SL， a1. Soybean phytoestrogen intake and cancer et risk. J Nutr，1995，12:755-757. Choi Y S， B H， J H， a1. Concentration of phytoestrogensin soybeans and soybean Lee Jim et products in Korea.J Sci Food Agric，2000，80:1709-1712. 李燕. 大豆異黃酮的抗氧化作用及其防治疾病作用. 國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊，2001