臨床細菌學檢驗的質量控制流程

1、臨床細菌學檢驗的質量控制流程1、質量的概念和質量保證影響檢驗結果質量的因素很多 ,實驗過程中 , 儀器、試劑和操 作等均會引起試驗結果的誤差 , 衡量檢驗結果的質量常用準確度和 精確度 , 或特異性和靈敏度。具體采用哪一種指標應根據實驗的性 質決定 , 目前臨床細菌學檢驗的工作內容大致有 3類, 衡量起質量的 技術指標不完全相同。第一類是檢出細菌的實驗 , 包括標本直接涂片檢查和細菌分 離培養(yǎng)?，F代的細菌感染 , 混合菌較常見 , 一份標本中 , 會有 2 種以 上細菌存在。無論標本直接涂片還是分離培養(yǎng) , 檢驗結果必須如實 反映感染病灶中細菌的真實情況。這類實驗的質量 , 應該用細菌檢 出率

2、或細菌分離率來衡量。第二類是鑒定細菌的實驗。通過一系列生理生化及形態(tài)學、 血清學的手段來鑒定病原菌。 對分離到的病原菌都做出準確的鑒定 是反映細菌事工作質量的一個重要方面。第三類是藥敏實驗。 有稀釋法和紙片法 , 前者是半定量的實驗 可以用準確度和精密度來衡量 , 后者以敏感或耐藥的形式報告 , 屬 于定性的實驗 , 但實驗過程中測量抑菌環(huán)是定量的指標。也應以準 確度和精確度衡量。所以實驗室人員必須清楚認識到以上這一點 , 在實驗室的設 計和管理方面就應該主動設置誤差檢測系統(tǒng) , 實驗中一旦出現誤差 及時發(fā)出警報 , 查明原因及時糾正。2、室內質量控制2.1 在職人員2.1.1 須受過細菌學檢

3、驗的專門基礎教育以及相關的生物交全防護 知識,并以細菌檢驗為專業(yè) , 及時終結并積累工作經驗。2.1.2 作人員必須具有嚴謹的工作態(tài)度 , 技術操作須完全遵守操作 規(guī)程 ,并直接參與質量控制工作。2.1.3 工作人員應不斷加強自身的業(yè)務學習 , 及時了解本領域的新 進展 ,將所掌握的新知識應用到實際工作中。2.1.4實驗室管理人員應注意利用一切機會培養(yǎng)技術人員，積極參加國際、國內學術會議、專業(yè)培訓班，獲取新信息。因為細菌學檢驗,投資人員培訓遠比投資與儀器設備更重要。22操作手冊及參考書221細菌室可以根據自己的實際情況制訂一本指導日常工作、簡 明扼要的操作手冊，并在工作中不斷完善和修改。2.2

4、.2細菌室應準備一些細菌學參考書，解決某些少見的菌種的分 離鑒定，判斷細菌的致病性及向臨床醫(yī)生解釋結果時用。3、設備質量控制3.1溫箱、冰箱每日工作開始，在打開溫箱或冰箱等控溫設備前，以 及下午下班前須觀察當時設備的溫度并記錄。3.2高壓滅菌器須定期檢查滅菌器的滅菌效果，至少每月1次。測試方法可用留點溫度計或嗜熱芽抱菌等，并定期維修。3.3生物安全柜新安裝必須由生產廠家提供安裝檢測報告,以后每年必須檢測一次，若須更換濾網，須由專門技術人員進行，并提供檢 測報告。工作時檢測氣流、紫外燈正常與否，可用營養(yǎng)瓊脂檢測空氣中細菌的沉降數，紫外線必須有使用記錄，每3個月檢查一次性能3.4接種環(huán)要求長5-8

5、cm,環(huán)直徑約3mm接種針長5-8cm。3.5顯微鏡應做好常規(guī)的清潔和保養(yǎng)。所有的技術人員必須對顯微 鏡的對光、應用和清潔正確步驟掌握。3.6細菌鑒定儀應及時更新系統(tǒng)操作軟件。定期清浩儀器的探測部 位,并用標準模板進行校正，必要時按照菌株對每批號的鑒定卡、 條、板進行一次測定,并核對每個反應和藥敏試驗的結果。4. 培養(yǎng)基的質量控制每批培養(yǎng)基應有配制記錄，并對不同性能的培養(yǎng)基要用以知 特性的、穩(wěn)定的標準菌株進行測定并記錄,符合要求方可應用。培養(yǎng)基的一般質量控制項目檢測標準檢測頻率(1)外觀液體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基含指示劑 的培養(yǎng)基各種培養(yǎng)基都應有名 稱、標記和制備日期 顏色、透明度、失水情 況無菌

6、落、不干裂無每周菌、顏色符合要求(2)平板深度般培養(yǎng)基3mmMH 為 4-6mm每批(3)雙糖斜面底層與斜面之間至少 有1cm的直立段,長度 不得過2/3試管,不可 干裂每批(4)無菌試驗 經病壓火菌后的培養(yǎng) 基無菌分裝的試管或 平板 選擇性培養(yǎng)基隨機取10個,放35度 孵箱24h無菌每批(5)硬度試驗 固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基劃線接種應無碎裂 穿刺接種后能區(qū)分有 動力或無每批監(jiān)控常規(guī)培養(yǎng)基及試劑的菌種培養(yǎng)基陽性(或生長)陰性(或不生長)監(jiān)測頻率第一套：A(每月一次)賴氨酸脫酶 鳥氮酸脫羧酶 精氨酸雙水解酶 靛基質v - p櫞酸鹽(西蒙氏) 苯丙氨酸脫氨酶葡萄糖0-F 氧化遲緩愛德華菌 產氣腸

7、桿菌 陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌 陰溝腸桿菌 產氣腸桿菌雷氏變形桿菌銅綠假單胞菌弗氏構櫞酸菌 弗氏構橡酸菌 普通變形桿菌 陰溝腸桿菌 大腸埃希氏菌 遲緩愛德華菌 弗氏枸櫞酸菌每批發(fā)酵不活動硝酸鹽還原氧化酶觸酶膽汁七葉酸 丙二酸鹽 尿素動力大腸埃希氏菌 洛非氏不動桿菌 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌ATCC27853 金黃色葡萄球菌 糞鏈球菌 產氣腸桿菌 雷極氏變形桿菌（快） 肺炎克雷伯氏菌（慢） 大腸埃希氏菌洛菲氏不動桿菌 大腸埃希氏菌ATCC25922化膿性鏈球菌 化膿性鏈球菌 遲緩愛德華菌 大腸埃希氏菌肺炎克雷伯氏菌第二套:B（每批一次）巧克力球脂（HN） 羊血瓊脂平板麥康凱雙糖鐵培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂

8、流感血桿菌 化膿性鏈球菌（小菌落）肺炎鏈球菌（中等菌 落）大腸埃希氏菌（粉紅 菌落）奇異變形桿菌（無色 菌落）金黃色葡萄球菌每批5.試劑、染色液的質量控制試劑的質量控制試劑陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌ATCC 2 7 8 5 3大腸埃希氏面ATCC 2 5 9 2 2每次凝固酶金黃葡萄球菌表皮葡萄球菌每次桿菌肽紙片A群鏈球菌B群鏈球菌每次Optochin 紙片肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌每次染色液的質量控制染色液陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率革蘭氏染色液金黃色葡萄球菌 ATCC 2 5 9 23大腸埃希氏菌ATCC 2 5 9 2 2每天萋納抗酸染液TB陽性的痰液不作每次鞭毛染色

9、液普通變形桿菌福氏志賀氏每次6、藥敏試驗的質量控制瓊脂擴散法為藥敏試驗直接測定抑菌環(huán)直徑。參考菌株分別選 擇金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希氏菌ATCC2592刑銅綠假 單胞菌ATCC27853由于有很多因素均能影響藥敏試驗擴散法的結 果,因此對以下每一可變因素均應按要求加以控制:6.1培養(yǎng)基的成分、PH及深度:成分為水解烙蛋白瓊脂:PH為7.2+0.1 ;深度為4mm 只9cm直徑的平板約需25ml培養(yǎng)基。6.2抗生素紙片含量及有效期:庫存的抗生素紙片儲存在 20度,小 量使用抗生素紙片密圭寸后存放于冰箱的冰格內。使用時取出，放置室溫平衡后再開啟。6.3菌落濃度:挑取分純的菌落 5-

10、10個移種于合適的液體培養(yǎng) 基,35度46h后，校正菌液濃度與標準0.5麥氏比濁管相同為止。6.4將菌液均勻的涂好，每只9cm平極至多貼7張紙片,測試平板最 多兩只疊在一起，不得過多，量取抑菌環(huán)用毫米尺。6.5參考菌種的抑菌環(huán)質量控制標準是:藥物對該菌株的排菌環(huán)直 徑平均值+2標準差:簡明的說:將這個指標換算成抑菌環(huán)直徑質量 控制允許范圍。實驗室連續(xù) 30次監(jiān)測的結果允許最多 3次超過質 量控制范圍，并且這3次失控不應該連續(xù)出現。 如超出圍，成查明誤 差原因并予以糾正。6.6質控菌株:大腸埃希氏菌ATCC25922大腸埃希氏菌 ATCC35218用于B內酰胺酶抑制劑復合制劑);金黃色葡萄球菌ATCC2592：銅綠假單胞菌ATCC27853等。6.7質控測定次數:每批新的M-H瓊脂和含藥紙片必須用質控菌株 進行檢測。每大與臨床標本一起測定質控菌株以監(jiān)控整個過程，NCCLS規(guī)定只有在符合以下條件時才可減少測定次數：與常規(guī)標本一起連續(xù)測定質控菌株 30日。每種藥物與相應的每種細菌的 30個抑菌環(huán)直徑（3個結果超 出規(guī)定范圍）。達到以上要求以后，可執(zhí)行每周一次檢測。如發(fā)現有一個不符 合的結果，應立即尋找原因，如果發(fā)現諸如質控菌錯誤、 含