安徽醫(yī)科大學研究生細胞培養(yǎng)技術考試重點匯總

1、名詞解釋：1. 群體倍增時間：細胞指數(shù)增長期時，細胞群倍增所需的時間。是由于表示群體細胞指數(shù)生長期內(nèi)細胞分裂活動的程度，是判斷細胞生長是否旺盛的重要指標。2. 接觸抑制(con tactin hibiti on3. 密度抑制 (density):細胞相互接觸后失去運動的現(xiàn)象。inhibition )：由于細胞密度過大，培養(yǎng)液營養(yǎng)耗盡，代謝產(chǎn)物過多和生存空間消失所引起的細胞增殖的抑制現(xiàn)象。4. 腫瘤干細胞(tu mor stem cells ，TSC)表現(xiàn)為一種特殊類型的干細胞，具備高度增殖能力與自我更新能力，也具備多向分化的潛能。TSC增殖過程中，通過不均一分裂，一個裂形成一個新的TSC和另一

2、個可最終分化為包括腫瘤細胞在內(nèi)的各種細胞的子細胞， 是維持TSC數(shù)目穩(wěn)定并產(chǎn)生腫瘤。5. 細胞匯合(Con flue nt):指細胞增殖生長相互連接成片占據(jù)所有底物面積現(xiàn)象。6. 飽和密度(Saturationdensity):在特殊培養(yǎng)條件下，每平方厘米(單層培養(yǎng))或每毫升細胞懸液內(nèi)可達到的最大細胞數(shù)。7. 二倍體細胞系或株(Diploid cell line orstrain):具有二倍體染色體數(shù)的細胞系或株。8. 二倍體(Diploid):指雙倍數(shù)的染色體數(shù)或具有此數(shù)的細胞系。9. 組織工程：是應用生命科學和工程學的原則及方法，在正確認識正常及病理兩種狀態(tài)下的組織結構與功能關系的基礎上，

3、 研究、開發(fā)用于修復、維護、 促進人體各種組織或器官損傷 后的功能和形態(tài)的生物替代物的一門新興學科。10. 細胞融合(Cell fusion)11. 細胞富集：數(shù))的程度。12. 三維培養(yǎng)：方法。13. 平衡鹽溶液TSC分其結果:指兩個獨立的細胞借媒介物 (PEG等)融合成雜種細胞的過程。 當細胞分離純化并不完全徹底，培養(yǎng)物中能達到以某種細胞為主(占絕大多把細胞懸液接種在一定立體形態(tài)的支架上，使細胞生長在三維環(huán)境中的培養(yǎng)(bala need salt soluti on, BSS):簡稱鹽溶液，集緩沖液的緩沖能力、生 兼具緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、維持量鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應特點于一體

4、。 滲透壓、同時供給細胞生存所需的能量和無機離子成分的作用。14. 生長基質(zhì)(growth substratum )：培養(yǎng)器皿表面包被的一層能改善生長表面的特性，促 進細胞粘附和貼壁的物質(zhì)。15. 去分化(dedifferentiation )：指已成熟的細胞和組織倒退分化，返回原始幼稚的狀態(tài)。16. 消化液：在原代細胞培養(yǎng)和細胞傳代時，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二鈉(EDTA,其次是一些特殊的組織細胞培養(yǎng)用的各型膠原酶。在原代細胞培養(yǎng)中，使用消化液從組織塊中分離 長表面并離散成單個細胞。17. 消毒 dis infection 滅菌 s terilization 物、繁殖

5、體和芽胞。18. 轉化細胞系：指細胞發(fā)生了不可逆轉的遺傳改變而引起恒定的表型改變的細胞系。19. 雜交瘤技術：又稱單克隆抗體制備技術，是指建立雜交瘤細胞系的技術，通常指B淋巴細胞雜交瘤技術，即將骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，以建立可以分泌單一性抗體的雜交瘤細胞系的技術。20. 指由一個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的，只識別一種抗原決定簇的均質(zhì)抗體。21. 干細胞：是指具有無限或較長期的自我更新能力、多種分化潛能和高度增殖能力的細胞。22. 全能干細胞，如ES細胞。全能干細胞可以分化成人體的各種細胞，這些細胞構成人體的各種組織和器官。(散)出單個的細胞；在進行細胞傳代時，消化液使細胞脫離生殺死物體上病原微

6、生物的方法。殺滅物體上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生23. 成體干細胞 ：在胎兒、 兒童和成人組織中存在的具有自我更新、 多向分化潛能和增殖特 性的多能干細胞，統(tǒng)稱為“成體干細胞” 。PEG等。24. 融合劑 ：兩個或兩個以上的細胞融合過程中，能促使細胞融合并使細胞融合的頻率顯著 增大的物質(zhì)，如仙臺病毒，25. 克隆化：專指一般DNA在與載體DNA分子重組后，重組DNA分子由載體導入宿主細胞內(nèi)， 依賴載體的復制能力在宿主細胞中進行擴增，形成一個無性繁殖系的過程。26. 細菌污染 ：包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物（真 菌、細菌、病毒和支原體） 、化學

7、物質(zhì)及細胞。培養(yǎng)的細胞被細菌污染均會造成細胞受損和死亡， 是細胞培養(yǎng)工作的大敵。細胞發(fā)生污染時，常有培養(yǎng)液變渾濁和 PH發(fā)生改變等現(xiàn)象，鏡下觀察細胞變形、 生長緩慢或分裂相消失， 以及細胞圓縮脫落等現(xiàn)象。常有抗生素預 防該污染。27. iPS ：誘導多功能干細胞即誘導多能干細胞，是 指體細胞經(jīng)過基因“重新編 排”，回歸到胚胎細胞的狀態(tài)，從而具有類似胚胎干細胞的分化能力。這種方法 可以不需要用人胚胎或卵母細胞，就能制造干細胞。28. 克隆 ：指通過一定方法獲得由單個細胞無性繁殖形成的細胞集落。簡答題：物理污染：溫度、放射線、震動、輻射等； 化學污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物質(zhì)的殘留； 生物

8、污染（支原體污染） ：外界的動物、微生物如霉菌、細菌、支原體和其它類 型的細胞都可能侵入培養(yǎng)環(huán)境引起污染。1）1. 簡述細胞培養(yǎng)污染的種類及污染的預防措施種類：（1）（2）（3）預防措施：CO2 孵箱、生良好的規(guī)章制度：只有相關人員才可進入細胞培養(yǎng)區(qū)，細胞培養(yǎng)區(qū)必須和 其他區(qū)域分開，細胞培養(yǎng)區(qū)應布局合理； 良好的無菌操作：所有玻璃器皿和培養(yǎng)液與試劑的配制應嚴格無菌，吸入 或吸出液體時避免傾倒，不要觸碰細胞培養(yǎng)瓶的瓶口，清潔區(qū)和污染區(qū)的 材料應單獨處理； 保持工作區(qū)清潔：常規(guī)清洗地面和臺面，定期清潔水浴箱、 物安全柜等，及時清理廢棄物； 合理利用抗生素 建立細胞庫：消除了隱蔽污染的潛在危害 細胞

9、污染的檢測2. 試述細胞培養(yǎng)的基本概念、原理、優(yōu)缺點及實際意義1） 概念：細胞（組織）培養(yǎng)是指從生物體內(nèi)取出細胞（組織），模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無 菌、適當溫度和一定營養(yǎng)條件下，使之生存、生長并維持其結構和功能的方法。2）原理及優(yōu)缺點： 細胞培養(yǎng)是將確定所選組織用剪碎的小組織塊或分離的單個細胞進行培 養(yǎng)，這種培養(yǎng)失去了原有組織類型及某些生化特征，但它們可以增殖，特性化，獲得遺傳 背景相同的群體，可以保存。3）實際意義：組織（細胞）培養(yǎng)對醫(yī)學、生命科學的意義 培養(yǎng)的組織器官或細胞，能再一定范圍和程度上反映生命活動規(guī)律和機體功能特點。 培養(yǎng)的細胞為生命科學和生物醫(yī)學各種研究奠定了物質(zhì)基礎。如藥物篩選

10、，療劑評價， 新生物制品研發(fā)， 研究病毒及其他微生物， 發(fā)現(xiàn)新的傳染因子， 組織工程中的支撐技術等。細胞培養(yǎng)技術已經(jīng)成為商品化生物技術產(chǎn)品的核心。如目前可提供的產(chǎn)品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗體型免疫調(diào)節(jié)劑：干擾素、 白介素和集落刺激因子等；多肽生長因子：表皮生長因子和神經(jīng)生長因子等；酶類：組織型纖溶酶原激活劑；激素：EPO和促黃體生成素等；殺蟲劑：桿狀病毒；腫瘤特異抗 原；癌胚抗原；通過雜交瘤生產(chǎn)的各種單克隆抗體；細胞本身（如干細胞）；皮膚重植等。4）組織（細胞）培養(yǎng)的局限性：細胞（組織）培養(yǎng)，包括器官培養(yǎng)終歸是離體培養(yǎng)，缺少 生物整體的嚴密聯(lián)系， 不能代表整個機體。 在進

11、行醫(yī)學生物實驗過程及對結果的 評估都必須考慮這些。把好每一個關口，盡可能禁止任何有污染的物品進入培養(yǎng)操作環(huán)節(jié)； 抗生素：一般用常用量的 510 倍作沖擊療法。用藥 2448h 后， 再換常規(guī)培養(yǎng)液。 加溫處理：根據(jù)支原體對熱敏感的特點，將受支原體污染的細胞放置在41 C作用510h,最長不超過18h后，以殺滅支原體。動物體內(nèi)接種：將支原體污染的細胞接種在同種動物的皮下或腹腔，借動物體內(nèi)的免3. 簡述細胞培養(yǎng)過程中如何進行微生物污染防治1）2）3）4）疫系統(tǒng)消滅支原體。待一定時間后取出細胞，做原代培養(yǎng)再進行繁殖。4. 試述目前體外細胞培養(yǎng)中廣泛使用最多的天然培養(yǎng)基類型及其作用天然培養(yǎng)基 （液）的

12、種類很多， 包括生物性體液 （如血清、 血漿）、組織浸液 （胚胎浸液） 、 水解乳蛋白等。1 ）血清：血清中含有基本的營養(yǎng)物質(zhì) 血清中含有激素與生長調(diào)節(jié)因子 血清中含有促進細胞粘附和鋪展的因子 血清中含有結合蛋白 血清中含有抗機械損害的非特異性保護物質(zhì) 血清中含有 pH 緩沖物質(zhì) 血清中含有蛋白酶抑制劑2）胚胎浸出液（ embryonic extract ）是早期動物細胞培養(yǎng)中應用的天然培養(yǎng)基，如雞胚浸出液、牛胚浸出液等。胚胎浸出液主要成分為大分子蛋白和小分子氨基酸， 有促進細胞生長的作用。3） 水解乳蛋白（ lactalbumin hydrolysate）為乳白蛋白經(jīng)蛋白酶水解的產(chǎn)物，含有富

13、的氨基酸，是常用的天然培養(yǎng)基，可用于許多細胞系和原代細胞的培養(yǎng)。5. 血清的優(yōu)缺點：1）優(yōu)點： 血清中含有基本的營養(yǎng)物質(zhì) 血清中含有激素與生長調(diào)節(jié)因子 血清中含有促進細胞粘附和鋪展的因子 血清中含有結合蛋白 血清中含有抗機械損害的非特異性保護物質(zhì) 血清中含有 pH 緩沖物質(zhì) 血清中含有蛋白酶抑制劑2 ）缺點： 血清中也存在不少有害于細胞生長和繁殖的物質(zhì) 血清的成分不明確，影響對結果的分析 對多數(shù)動物細胞來講， 血清并不是細胞在體時直接接觸的生理性液體， 只有在傷口愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)。血清也具有潛在的細胞毒作用, 除了特異性抑制成分、

14、 細菌毒素以及脂類成 分之外,還含有多胺氧化酶等。不同動物、 不同批次的血清成分和活性差別較大, 要分批篩選,而且永遠不可能保持批次間的一致； 在培養(yǎng)液中使用血清會增加成本,尤其是對于動物細 使用胎牛血清培養(yǎng)的情況更如此； 血清中有時所含的生長因子水平不足而需要補充,使得培養(yǎng)結果不穩(wěn)定。 需胞的大規(guī)模培養(yǎng)以及若補充過量會抑制細胞生長。培養(yǎng)批次與血清批次不同,生長因子水平是難以控制的。6. 簡述體外培養(yǎng)細胞的主要生物學特點 去分化；貼壁鋪陳；接觸抑制；密度依賴性生長抑制7. 體外培養(yǎng)用液的種類及用途主要包括 ：培養(yǎng)液 （維持體外細胞生存和生長的基本溶液, 是組織細胞培養(yǎng)時最重要的條 件。）、緩沖

15、液（中和培養(yǎng)液中的酸性物質(zhì)） 、平衡鹽溶液（配抗生素、消化液、洗滌細胞 等）、消化液（分離細胞）、血清、pH調(diào)整液和抗生素等其它常用液。8. 比較天然和合成培養(yǎng)基的優(yōu)缺點1）天然培養(yǎng)基：最初的體外細胞培養(yǎng),均采用天然培養(yǎng)基。其主要取自動物體液或從動物 組織中分離提取。優(yōu)點：營養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果良好；缺點： 成分復雜, 來源受限, 影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和結果的分析, 易發(fā)生支原體染。2）合成培養(yǎng)基：細胞在體內(nèi)生存生長所需物質(zhì)的種類和數(shù)量,用人工方法模擬合成的。優(yōu)點：標準化生產(chǎn),組分和含量相對固定成本低。缺點：缺少某些成分,不能完全滿足體外細胞生長需要。9. 試述細胞體外培養(yǎng)的條件 體外培養(yǎng)細胞

16、的基本要求主要包括細胞接種、培養(yǎng)液成分、酸堿度、氣體條件、溫度、水 的純度及無菌條件。1）2）細胞接種：接種細胞密度 10-4-10 -5。選擇對數(shù)期的細胞接種。營養(yǎng)物質(zhì)：天然培養(yǎng)基：營養(yǎng)成分復雜，包括血清、組織浸出液、淋巴液、水解乳蛋白等；合成培養(yǎng)基：包括水、無機鹽、葡萄糖、維生素、氨基酸等；3）酸堿度：細胞能耐受的 pH范圍是6.6-7.8，最是的pH為1.2-1.4，要依靠緩沖系統(tǒng)調(diào) 節(jié),主要是 CO2-NaHCO3 系統(tǒng)。pH,同時也用于合成細胞物質(zhì)。4）氣體：細胞生長需要,主要用于調(diào)節(jié)細胞培養(yǎng)的5 ）溫度：最適宜生長的溫度為 3537C;6 ）水：一般使用的是去離子水或三蒸水,適宜細

17、胞培養(yǎng)；7 ）抗生素：加入兩性霉素可控制微生物的生長。10. 體外培養(yǎng)腫瘤細胞的三個顯著特征：永生性、不受控增殖性、致瘤性。（ 轉化細胞系的特征 ）1 ）永生性也稱不死性。在體外培養(yǎng)中表現(xiàn)為細胞可無限傳代而不凋亡。體外培養(yǎng)中的腫 瘤細胞系（株）都表現(xiàn)有這種性狀。2）細胞接種同種動物或裸鼠后的致瘤性是客觀反映細胞惡性程度的指標。3）失去接觸抑制,細胞能相互重疊向三維空間發(fā)展,形成堆積物。 失去錨著依賴性（停泊依賴性） ,可在瓊脂、甲基纖維素等支撐物上生長。癌細胞或培養(yǎng)中發(fā)生惡性轉化后的單細胞培養(yǎng)時,形成集落的能力比正常細胞強。11. 簡述原代腫瘤細胞制備過程及其注意事項及如何建成永久性細胞系 癌

18、細胞建系的方法和程序相似于正常細胞， 包括標本收集和處理、 原代培養(yǎng)、 傳代、 換液、 凍存、復蘇等過程。1 ）取材：取材部位非常重要，要挑選活力較好的部位，一般是癌組織最外層最活躍細胞。 注意去除標本中混雜的間質(zhì)組織。2 ）分離：機械方法、酶消化法，其中酶消化法是分散癌細胞的好方法。3 ）接種細胞：消化后制備的癌細胞，培養(yǎng)時應有足夠的細胞密度，通常接種細胞濃度為5X 105/ml, 37C培養(yǎng)。4 ）成纖維細胞過度生長的去除：常采用機械刮除法、反復貼壁法等。5 ）選擇性培養(yǎng)基： 選擇性培養(yǎng)基是針對特殊細胞生長的營養(yǎng)要求設計的。在癌細胞建系中，選擇性培養(yǎng)基的應用是提高癌細胞體外存活、抑制成纖維

19、細胞生長的關鍵技術改進。6 ）飼養(yǎng)層： 在培養(yǎng)器皿底部接種能形成接觸性抑制的成纖維細胞飼養(yǎng)層，可以有利于癌細胞生長和抑制癌組織中正常成纖維細胞過度生長。7）及時換液癌細胞系建立注意事項 ：取材應選擇活力較好的部位，盡快培養(yǎng)且要防止污染。及時去 除生長的成纖維細胞。掌握好傳代時間，細胞沒有長到足夠量時不要急于傳代。早期應 先以高濃度接種，再逐漸降低。對于增殖能力低的細胞，應放入飼養(yǎng)層中培養(yǎng)，并加入 一些促生長物質(zhì)。精心傳代、換液、避免污染，需經(jīng)半年以上的細胞培養(yǎng)，方能夠達到 建立細胞系的目的。50 次以上如何建成永久性細胞系： 建立癌細胞系需要在體外進行長期培養(yǎng)和傳代，傳代 才能被認為是永久性細

20、胞系。建系過程需要不斷凍存以防細胞系中斷。12. 雜交瘤技術產(chǎn)生的三個技術基礎（關鍵） ：1） B淋巴細胞與骨髓瘤細胞： B淋巴細胞（B lymphocytes ）:接受抗原刺激后，能分泌 針對該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。本身是一種終末分化細胞，通 常不再進行細胞分裂， 存活一段時間后便會死亡短命細胞。 骨髓瘤細胞 （myeloma cells） ：惡性增殖的轉化細胞，只要營養(yǎng)條件適合可永遠分裂和存活長命細胞。沒 有抗體分泌。經(jīng)篩選HGPRT或TK-O2） 細胞融合技術：分泌抗體短命脾細胞（B 淋巴細胞 ） 、長命不分泌抗體骨髓瘤細胞、分 泌抗體長命雜交瘤細胞。3 ）雜交瘤細

21、胞的篩選：用HAT選擇培養(yǎng)基進行篩選，只有雜交瘤細胞被篩選出。13. 試述雜交瘤技術制備單克隆抗體三個基本環(huán)節(jié)和兩個決定因素 三個基本環(huán)節(jié)1）漿細胞瘤細胞系，骨髓瘤細胞NS1或SP2/0，需通過8-氮鳥嘌呤選擇出來，有利于 HAT選擇培養(yǎng)基篩選。而且NS1或SP2/0必須是對數(shù)生長期，細胞密度控制在105/ml,細胞8活力達 95%，進行細胞融合時 1.5*10 8細胞數(shù)。2 ）免疫鼠脾細胞良好、合適，大多數(shù)情況下，并不需要高度免疫；3 ）融合劑良好合適，50%PEG。兩個決定因素1 ）選擇培養(yǎng)基（ HAT）2 ）飼養(yǎng)細胞（ 104/ml 以上）：來自同系小鼠的胸腺細胞或腹腔巨噬細胞14. 與

22、胚胎干細胞相比較，成體干細胞有以下幾個特點：（1）成體干細胞體積小，細胞器稀少，RNA含量較低，在增殖過程中處于相對靜止狀態(tài)，在組織結構中位置相對固定。（2）成體干細胞數(shù)量很少，其基本功能是參與組織更新，創(chuàng)傷修復及維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。（3）成體干細胞常處于一個有干細胞細胞基質(zhì)、對干細胞的增殖和分化起調(diào)控作用的各種信 號分子的特定微環(huán)境或稱生物位中， 干細胞是自我復制還是分化為功能細胞， 取決于所在 的微環(huán)境和自身的功能狀態(tài)。（4）成體干細胞沒有確定的來源。15. 干細胞研究的意義 干細胞在生命科學的各個領域都有著重要而深遠的影響，如移植治療、克隆動物及轉基 因動物的生產(chǎn)、細胞組織和器官的修復、

23、組織工程等有著廣闊的應用前景。1 ）移植治療： 移植治療目前已成為治療疾病的一個重要手段，如器官移植、細胞移植等。2 ）克隆動物及轉基因動物的生產(chǎn)：利用這項技術人們還可以將一些在發(fā)育過程中非必需 的基因敲除（ knock out ），在體內(nèi)進行功能缺失研究；還可以通過基因功能獲得性突變， 使特定基因在發(fā)育的某一時期表達，從而研究該基因在胚胎不同發(fā)育時期中的作用。3 ）轉基因干細胞基因治療：現(xiàn)有的基因治療有兩類：轉基因細胞治療核酸治療。4 ）為發(fā)育生物學研究提供理想的體外模型：胚胎干細胞提供了在細胞和分子水平上研究 個體發(fā)育過程中極早期事件的良好材料和方法。5）高效新型藥物的發(fā)現(xiàn)、篩選及動物和人

24、類疾病的模型：胚胎干細胞提供了新藥物的藥 理藥效、 毒理及藥物代謝等研究的細胞水平的研究手段。 利用胚胎干細胞體外分化的細胞 組織檢驗篩選新藥，可大大減少藥物實驗所需實驗動物的數(shù)量及其人群數(shù)量?？傊?，干細胞研究對細胞組織移植治療，體外研究動物、人胚胎的發(fā)生、發(fā)展，新的人類 因發(fā)現(xiàn)，藥物的篩選和致畸實驗及克隆動物、轉基因動物等領域?qū)a(chǎn)生重要的影響。16. 試述進行成體干細胞研究有哪些優(yōu)勢1 ）成體干細胞則可從患者自身獲得， 而不存在組織相容性的問題， 治療時可避免長期應用 免疫抑制劑對患者的傷害。 此外，少量的骨髓切除治療有助于形成部分造血嵌合體， 可使 異體成體干細胞的治療成為可能。2）成體干

25、細胞不會引發(fā)畸胎瘤。3） 成體干細胞也具有類胚胎干細胞的高度分化能力。在人體發(fā)育的過程中， 可能成體干細 胞是存留在多種組織中具有多系分化能力的亞全能干細胞群體， 這些細胞都具有相同或相 似的細胞表型，在適合的微環(huán)境下可分化成多種組織細胞。17. 試述癌細胞系鑒定要點（ 簡述體外培養(yǎng)腫瘤細胞生物學檢測的常規(guī)項目 ）培養(yǎng)的腫瘤細胞生長成形態(tài)上單一的細胞群體或細胞系（或株） 后，需要做一系列的細胞生物學測定， 主要的目的在于： 證明所培養(yǎng)的細胞系的確來源于原體內(nèi)具有惡性的細胞， 而非正常細胞或其它細胞。細胞生長增殖：檢測細胞生長曲線、細胞分裂指數(shù)、倍增時間、細胞周期時間。 細胞核型分析：檢測核型特

26、點，染色體數(shù)量、標記染色體的有無、帶型等。 軟瓊脂培養(yǎng)：檢測集落形成能力。異體動物接種：向異體動物體內(nèi) （皮下 ） 接種細胞懸液，觀察成瘤能力。其它：根據(jù)需要還可做同位素標記、組織化學成分分析，熒光顯微鏡觀察等。1）形態(tài)觀察：主要觀察細胞的一般形態(tài)，如大體形態(tài)、核漿比例、染色質(zhì)和核仁大小、 多少等以及細胞骨架微絲微管的排列狀態(tài)等。2）3）4）5）6）18. 簡述細胞系的生長過程及各期細胞的特點培養(yǎng)細胞成分混雜， 呈現(xiàn)異質(zhì)性。 細 原代與體內(nèi)原組織形態(tài)結構和功能活動 為保持二倍體體細胞性質(zhì)，應在初1）原代培養(yǎng)期： 取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)。組織到第一次傳代

27、時間大約為 14周。特點：胞活躍移動 ,分裂,但不旺盛 ,多呈二倍體核型。 基本相似，適宜進行疫苗制備、藥物測試、移植等。代或傳代后早期冰凍。子機制；2) 傳代培養(yǎng)期：首次傳代開始經(jīng)反復傳代一直到培養(yǎng)細胞開始衰退之前的全部時間。初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代便稱之為細胞系(cell line)。特點：細胞增殖旺盛，并維持二倍體核型，也叫二倍體細胞系 (diploid cell line) 一般細胞在10代以內(nèi)凍存。 細胞 逐漸進入去分化狀態(tài)。原本成分混雜的培養(yǎng)物中，某一種增殖能力較強的細胞會逐漸處于優(yōu)勢 , 比例越來越大 , 而將其它數(shù)量較少比例較小的細胞逐漸淘汰掉。3) 衰退期： 細胞仍然生存，但不增

28、殖或增殖很慢，最后衰退死亡。輪廓增強，色澤變暗，胞質(zhì)出現(xiàn)顆粒樣及空泡狀結構。在細胞生命期階段，少數(shù)情況下，在不明原因的影響，細胞可能發(fā)生自發(fā)轉化。標志之一， 是細胞獲得不死性即持久性增殖能力，這樣的細胞群體稱“無限細胞系”。核型大多變成異倍體，接觸抑制消失。19. 干細胞研究的主要內(nèi)容與問題1. 主要內(nèi)容1 )干細胞的分離與鑒定2 )干細胞的自我更新3 )干細胞的定向分化4 )干細胞的臨床應用2. 問題1) 胚胎干細胞建系及定向誘導成組織細胞的分2) 成體干細胞橫向分化的條件；3) 各種組織的成體干細胞庫的建立及臨床治療試驗；4) 細胞移植的免疫排斥問題。20. 粘附生長型細胞根據(jù)形態(tài)分為幾種

29、類型，試述各型主要特點。1)粘附型細胞(Mo no layer cells):附著在某一固相支持物表面才能生長的細胞。a成纖維細胞型：形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則，三角形，胞質(zhì)向外伸出 2 3個長短不等的 片狀偽足 ，中有卵圓形核。 生長特點： 排列成放射狀， 漩 渦狀，并不緊靠連成片，細胞細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細 胞，常有幾個伸長的細胞 突起。b上皮細胞型：形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細胞，扁平、不規(guī)則 多角形，中有圓形核。生長特點：易相連成片，相靠一緊密相連一成薄層一鋪路石狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動。c 游走型細胞：培養(yǎng)需要 支持物 ，分

30、散生長， 不連接成片 ，在培養(yǎng)皿中生長位置不定，處 于活躍的游走或 變形運動， 因此外形不規(guī)則且不斷變化 ， 密度大連接成片呈 多角形 不易 與其他類型的細胞區(qū)別。d 多型性細胞：無規(guī)律的形態(tài)，細胞分胞體和胞突。胞突細長形，似絲狀偽足，胞體略呈多角形。21. 試述“克隆”的基本概念并舉例說明其在細胞培養(yǎng)工作中的實際意義1)2)實際意義：克隆：指通過一定方法獲得由單個細胞無性繁殖形成的細胞集落。檢驗醫(yī)學診斷試劑： 單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、 放射免疫分析、 免疫組化和流式細胞儀等技術。 目前，單克隆抗體商品化試劑盒廣泛應用于： 病原微生物抗原、 抗體的檢測； 腫瘤抗原的檢測； 免疫細胞及其亞群的的檢測； 激素測定； 細胞因子的測定。b 蛋白質(zhì)的提純： 單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個惰性的固相基質(zhì)上， 并制備成層析柱。 當樣品流經(jīng)層析柱時， 待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結合， 其余成分不能與之結合。 將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強度或 pH,欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。2. 試述原代細胞培養(yǎng)的基本概念、原理、優(yōu)缺點及實際意義。1）概念： 一般指細胞從組織中分離在體外生長至傳代之前的細胞