山西膳食干預(yù)人群試驗(yàn)方案20090525v4

1、以腸道菌群為靶點(diǎn)的膳食干預(yù)在慢性病早期預(yù)防中的作用研究人群試驗(yàn)方案一、課題簡(jiǎn)介本課題旨在通過(guò)對(duì)中心性肥胖志愿者給予以中國(guó)傳統(tǒng)膳食 （高纖維和低動(dòng)物 性食物）為主的膳食干預(yù)，檢測(cè)膳食改變前后體重及炎性因子等生理指標(biāo)、 機(jī)體 代謝指標(biāo)和腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化，研究飲食通過(guò)改變腸道菌群影響人體健康的 機(jī)理，同時(shí)通過(guò)研究腸道菌群與遺傳基因和膳食之間的相互作用對(duì)體內(nèi)代謝的影 響，了解菌群結(jié)構(gòu)參與肥胖等代謝性疾病的有關(guān)分子機(jī)制。 項(xiàng)目的實(shí)施可系統(tǒng)評(píng) 估中國(guó)傳統(tǒng)飲食對(duì)社區(qū)居民慢性病早期預(yù)防和干預(yù)的效果。本課題是“中法腸道元基因組合作研究項(xiàng)目” 的組成部分， 也是國(guó)際人類微 生物組聯(lián)盟（ IHMC ）的入盟項(xiàng)目。

2、本課題將嚴(yán)格按照國(guó)際人類微生物組聯(lián)盟的有關(guān)倫理和技術(shù)規(guī)范進(jìn)行實(shí)施。 課題進(jìn)行過(guò)程中， 法國(guó)、英國(guó)等國(guó)際合作單位的科學(xué)家和博士生也將在現(xiàn)場(chǎng) 參加部分工作。二、研究背景隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和生活方式的不斷西化，我國(guó)的肥胖、 2 型糖尿病和心 腦血管疾病等慢性代謝性疾病發(fā)病率急劇上升，已成為影響健康的主要威脅。 根據(jù) 2002年全國(guó)營(yíng)養(yǎng)調(diào)查數(shù)據(jù)，我國(guó)現(xiàn)有 2億 1千 5百萬(wàn)人超重或肥胖 （世界衛(wèi) 生組織 WHO 標(biāo)準(zhǔn) ），約占世界總肥胖人口的五分之一。如果不采取有效措施， 預(yù)計(jì)在未來(lái) 10 年中僅心臟病、中風(fēng)和糖尿病就將給中國(guó)帶來(lái)至少 5500億美元的 經(jīng)濟(jì)損失。因此，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致我國(guó)肥胖癥流行的主要病因

3、，并建立強(qiáng)有力和易推 廣的干預(yù)措施，遏制人群肥胖及代謝性疾病發(fā)病率的上升趨勢(shì)，已成為我國(guó)營(yíng) 養(yǎng)和預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中亟待解決的科學(xué)問(wèn)題。人腸道內(nèi)的微生物有上千種之多，這些微生物的組成、活動(dòng)與人類的營(yíng)養(yǎng) 和健康息息相關(guān)，成為機(jī)體不可缺少的組成部分。近年來(lái)的研究表明：肥胖與 腸道菌群密切相關(guān)。 腸道菌群可以發(fā)酵宿主自身無(wú)法消化的食物多糖， 幫助宿主 從食物中提取更多的熱量。 無(wú)菌小鼠食用高脂、高熱量的飼料后并不發(fā)胖，說(shuō)明 腸道菌群在飲食誘發(fā)肥胖的過(guò)程中是一種必不可少的因素， 研究者發(fā)現(xiàn)腸道菌群 通過(guò)抑制禁食誘導(dǎo)脂肪因子（Fiaf）的水平和降低磷酸化AMP活化蛋白（AMPK） 的活性這兩種機(jī)制，促進(jìn)甘油三

4、酯在脂肪細(xì)胞中的積聚，在飲食誘導(dǎo)肥胖的發(fā)生中起作用。 肥胖 患者 腸道 菌 群的 結(jié) 構(gòu)不同于 正常體 重個(gè)體，擬 桿菌門(BacteroideS /厚壁菌門(Firmicutes)的比例顯著降低；但通過(guò)食用低熱量食譜 減肥后，肥胖患者體重下降，擬桿菌門的比例也回升，腸道菌群結(jié)構(gòu)向正常人 接近。分別將肥胖和瘦型的小鼠的腸道菌群接種到無(wú)菌小鼠中， 定植“肥胖菌群” 的受體小鼠的身體脂肪總存儲(chǔ)量要顯著高于接受 “瘦菌群” 的小鼠，說(shuō)明腸道菌 群可以在很大程度上控制肥胖的表型。 另外，肥胖者具有全身性的長(zhǎng)期低度炎癥， 身體中的炎癥因子(如 TNF- a、IL-6、IL-1等)通過(guò)激活一些磷酸激酶，使

5、胰 島素受體底物( IRS)-1 絲氨酸磷酸化，阻斷胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，使動(dòng)物和人產(chǎn)生 胰島素抵抗。最新的研究表明用高脂飲食飼喂小鼠，小鼠腸道中產(chǎn)生脂多糖(LPS)的細(xì)菌比例增高，腸屏障功能下降、腸壁通透性增加，LPS通過(guò)腸壁進(jìn)入血液就成為內(nèi)毒素，導(dǎo)致代謝性內(nèi)毒素血癥，引起體內(nèi)發(fā)生低水平的炎癥反 應(yīng)和胰島素抵抗，所以飲食不當(dāng)導(dǎo)致的腸道菌群失調(diào)是肥胖者體內(nèi)炎癥反應(yīng)的 起因。扶持保護(hù)腸屏障的有益腸道菌，壓制和清除腸道內(nèi)的“條件致病菌”， 清除體內(nèi)慢性炎癥，是控制體重、預(yù)防和治療肥胖的關(guān)鍵。肥胖者多習(xí)慣食用高脂肪、高蛋白的“西化”膳食。其中植物多糖含量少， 使大量保護(hù)腸屏障的細(xì)菌因缺乏營(yíng)養(yǎng)不能生長(zhǎng)，而動(dòng)

6、物性的脂肪和蛋白質(zhì)又太 多，大量來(lái)不及消化的動(dòng)物脂肪和蛋白質(zhì)進(jìn)入結(jié)腸， 導(dǎo)致嗜動(dòng)物性營(yíng)養(yǎng)的產(chǎn)毒素 的細(xì)菌和機(jī)會(huì)性病原菌在腸道中占優(yōu)勢(shì)，這些細(xì)菌釋放的抗原和毒素進(jìn)入血液， 就會(huì)誘發(fā)慢性炎癥，導(dǎo)致肥胖的加重。而中國(guó)傳統(tǒng)飲食粗糧所含的淀粉結(jié)構(gòu)特殊，不容易被人消化，進(jìn)入腸道后 需被腸道菌中嗜植物多糖的細(xì)菌發(fā)酵成短鏈脂肪酸才能被吸收。 因此長(zhǎng)期食用粗 糧，可以使這些有益細(xì)菌逐漸占優(yōu)勢(shì)地位，腸屏障功能加強(qiáng)， 腸道菌群與人體就 可以和諧共生。苦瓜等含苦味的蔬菜具有微弱的殺菌作用，尤其對(duì)嗜動(dòng)物性營(yíng) 養(yǎng)的條件致病菌具有抑制作用。生吃苦瓜，可以迅速減低條件致病菌的數(shù)量， 消除體內(nèi)的慢性炎癥。綜上所述， 對(duì)肥胖人群

7、的飲食結(jié)構(gòu)加以調(diào)整，進(jìn)行以植物性食物為主的中國(guó) 傳統(tǒng)膳食的減肥干預(yù)，多吃富含膳食纖維和維生素及優(yōu)質(zhì)蛋白但熱量低的粗 糧，通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)這種飲食結(jié)構(gòu)由 “西化”向中國(guó)傳統(tǒng)飲食回歸的過(guò)程中，個(gè)體 的菌群結(jié)構(gòu)和生理、代謝指標(biāo)的變化，解析飲食如何通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群而影響 機(jī)體的代謝和生理，將有助于我們?cè)诜逝值牟∫?、機(jī)理和預(yù)防的研究方面取得 突破性的進(jìn)展，為有針對(duì)性地建立有效的預(yù)防措施奠定基礎(chǔ)。三、研究目的具體研究目標(biāo)包括：1. 提取膳食干預(yù)過(guò)程中，腸道菌群、宿主代謝和生理指標(biāo)的特征性變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的分子標(biāo)記物;2 通過(guò)分子流行病學(xué)分析以及生理代謝指標(biāo)分析，找到與肥胖密切關(guān)聯(lián)的 菌群結(jié)構(gòu)特征，明確營(yíng)養(yǎng)/

8、生活方式、與菌群結(jié)構(gòu)特征與肥胖和代謝性疾病的交 互關(guān)系；3綜合分析腸道菌群與基因和膳食之間的相互作用對(duì)內(nèi)分泌激素及其與血 糖、脂代謝、胰島素敏感性、脂肪細(xì)胞因子、機(jī)體免疫和炎性因子水平的關(guān) 系，探討菌群參與肥胖和代謝性疾病有關(guān)的分子機(jī)制。4.系統(tǒng)評(píng)估高纖維、低動(dòng)物性食物為主的膳食應(yīng)用于肥胖干預(yù)的效果和可行 性，并為建立一套以腸道菌群為靶點(diǎn)的、 通過(guò)干預(yù)肥胖預(yù)防各種慢性病的措施提 供依據(jù)。四、研究方法（一）研究對(duì)象本次研究的對(duì)象為中心性II度肥胖患者。具體指標(biāo)為：2BMI > 30 kg/m納入標(biāo)準(zhǔn)漢族，在太原市居住至少 5年，有太原市戶口和固定住所;目前沒有參加其他研究項(xiàng)目；具有良好的記

9、憶和活動(dòng)能力；生活能夠自理； 排除標(biāo)準(zhǔn)過(guò)去3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)抗生素，并持續(xù) 3天或以上;腰圍 > 80 cm （女性）/ 90 cm （男性）；腰臀比（WHR ）> 0.85 （女性）/0.90 （男性）；CT掃描腹腔內(nèi)臟脂肪面積120 cm2。要求為25-55歲（年齡按照篩選調(diào)查日期與出生日期的差值計(jì)算）的太原市 常住居民。隨機(jī)分為兩組：干預(yù)組:進(jìn)行以高纖維、高碳水化合物和低動(dòng)物性食物為主的膳食干預(yù)6個(gè)月，期間定期進(jìn)行體檢和血液、大小便樣品的采集；對(duì)照組:不進(jìn)行任何干預(yù)，6個(gè)月內(nèi)定期進(jìn)行問(wèn)卷、體檢和血液、大小便樣 品的采集。妊娠期以及哺乳期婦女;酗酒（1周飲酒5次以上，平均每次 2兩

10、白酒或半斤黃酒或 5瓶啤酒以上）；過(guò)去6個(gè)月內(nèi)患有嚴(yán)重的精神疾患；過(guò)去6個(gè)月內(nèi)因各種慢性疾病持續(xù)服用藥物1月以上者；過(guò)去3個(gè)月內(nèi)因下列疾病接受藥物治療的：膽囊炎、消化道潰瘍、尿路感染、急性腎盂腎炎、膀胱炎、甲亢、甲減等甲狀腺功能異常；過(guò)去1年內(nèi)進(jìn)行過(guò)胃腸道手術(shù)，除闌尾炎、疝氣手術(shù)外；慢性、遷延性肝炎患者及肝硬化等嚴(yán)重肝臟疾病患者，和乙肝病毒表面抗原（HBsAg ）陽(yáng)性及肝功能有異常者（血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是正常值的2.5 倍）；已經(jīng)被診斷患有糖尿?。换加屑?、慢性腎功能不全；患有垂體功能異常；患有嚴(yán)重器質(zhì)性疾病如腫瘤 /癌癥、冠心病、心肌梗塞以及中風(fēng)等；患有肺結(jié)核和艾滋病等傳染?。恢w殘疾

11、，或其他原因引起的生活不能自理、不能清楚地回憶、回答問(wèn)題者；貧血：血紅蛋白 <10g/dl ；過(guò)去3月內(nèi)以任何藥物方法（包括氟苯丙氨等食欲抑制劑類藥物和甲狀腺片、孕酮、瀉劑等和各種中藥成分減肥藥）或手術(shù)方式進(jìn)行減肥者。3. 選點(diǎn)原則志愿者相對(duì)集中；有良好的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)體系；地方政府大力支持；具有便利的交通、通訊條件。4. 樣本量計(jì)算由于本課題的主要目的是通過(guò)以中國(guó)傳統(tǒng)膳食（高纖維和低動(dòng)物性食物）為主的膳食干預(yù)，觀察膳食改變對(duì)中心性肥胖志愿者的體重、炎性因子等生理指標(biāo)、機(jī)體代謝指標(biāo)和腸道菌群結(jié)構(gòu)的潛在影響。由于目前僅有部分先期篩查人群的體重指標(biāo)，因此樣本量的估計(jì)主要依據(jù)體重指標(biāo)的期望改變值

12、而進(jìn)行。所需樣本量的計(jì)算結(jié)果由Matlab?7.7.0的sampsizepwr.m程序獲得。由前期篩查人群小樣本，BMI>30的男性9人，平均體重94.5kg,方差為7.6; 女性20人，平均體重78.0kg，方差為8.5。如果當(dāng)實(shí)驗(yàn)后期，考慮每組人群的體重平均下降期望值，當(dāng)alpha=0.05,power=0.9時(shí)，各組所需的樣本數(shù)如下：性別體重減輕期望值（kg）所需樣本數(shù)（人）男性527440370女性533450387根據(jù)前期的經(jīng)驗(yàn)，平均體重減輕4kg是可以期待的，考慮到實(shí)際操作中不可 預(yù)見的因素，因此，樣本量估計(jì)需要招募 100人。（二）抽樣及招募方案志愿者招募通過(guò)太原市的社區(qū)衛(wèi)

13、生服務(wù)中心及下屬的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站具體 執(zhí)行。干預(yù)組和對(duì)照組志愿者的招募需分社區(qū)進(jìn)行，對(duì)對(duì)照組志愿者不進(jìn)行任何膳 食干預(yù)的宣傳教育。應(yīng)盡量隔離兩組人群，避免互相干擾。招募流程：（1）篩查社區(qū)健康檔案，從中篩選符合試驗(yàn)基本條件的人員，即年齡25-552歲，漢族，太原市常住居民，BMI >30 kg/m或腰圍> 80 cm （女性） / 90 cm （男性）;（2）對(duì)符合基本條件的人員，逐一通過(guò)電話進(jìn)行篩選問(wèn)卷調(diào)查，對(duì)照納入 排除標(biāo)準(zhǔn)確定候選人員；（3） 對(duì)候選者入戶進(jìn)行身高、體重測(cè)量，排除不符合中心性II度肥胖癥的 人員，符合條件的進(jìn)行一般問(wèn)卷、膳食頻度問(wèn)卷和24小時(shí)膳食回顧 問(wèn)卷調(diào)查

14、；（4） 合格的候選者在山西省人民醫(yī)院進(jìn)行全套體格檢查，根據(jù)體檢結(jié)果最終確定合格的志愿者。合格的干預(yù)組和對(duì)照組志愿者需分別簽署知情同意書后再參加本項(xiàng)目的試 驗(yàn)內(nèi)容。（三）膳食干預(yù)項(xiàng)目預(yù)期完成100位（其中男性或女性比例不低于 40%）中心性II度肥胖 癥患者為期6個(gè)月的膳食干預(yù)，期間志愿者需嚴(yán)格按照項(xiàng)目制定的干預(yù)方案控制 飲食，定期進(jìn)行體檢，并按照要求采集血樣、大小便樣品。對(duì)照組人群100人。1.準(zhǔn)備工作對(duì)干預(yù)組志愿者進(jìn)行教育，使其明確本研究制定的減肥措施的科學(xué)性和安 全性，從而能自覺、自愿、高度配合地參加本研究。培訓(xùn)志愿者，使他們掌握自行收集大、小便樣品的操作方法以及如何準(zhǔn)確記 錄飲食日記。

15、2膳食干預(yù)時(shí)間和方法膳食干預(yù)的主要措施為：前2個(gè)月：志愿者嚴(yán)格按照膳食干預(yù)方案，食用統(tǒng)一提供的營(yíng)養(yǎng)主餐、沖調(diào) 劑和餅干，并在營(yíng)養(yǎng)師的指導(dǎo)下每日添加適量蔬菜、豆制品和水果；后4個(gè)月：可根據(jù)體檢指標(biāo)和營(yíng)養(yǎng)師的指導(dǎo)，減少干預(yù)食品的供應(yīng)量，由志愿者在營(yíng)養(yǎng)師的 指導(dǎo)下，按照新的營(yíng)養(yǎng)平衡原則管理自己的膳食。膳食干預(yù)的主要原則：（1）在膳食干預(yù)的前兩個(gè)月，禁止進(jìn)食任何動(dòng)物性食品（包括各種肉類、蛋類、奶制品），之后可以進(jìn)食每日不超過(guò) 50克的肉類、魚類和蝦。（2）可由營(yíng)養(yǎng)師根據(jù)每位志愿者的身高、體重及從事體力勞動(dòng)的強(qiáng)度制訂 分餐食譜表。（3）干預(yù)組志愿者和工作人員成立 健康俱樂部，每周進(jìn)行講座或咨詢活動(dòng) 一次

16、，并發(fā)放一周的干預(yù)食品。同時(shí)開通網(wǎng)上咨詢交流平臺(tái)。建議：本研究需有一批固定的現(xiàn)場(chǎng)工作人員 （30人左右），其中25人負(fù)責(zé)干 預(yù)組人群，由每位工作人員負(fù)責(zé) 5名志愿者的招募、 問(wèn)卷調(diào)查、 動(dòng)員培訓(xùn)以及干 預(yù)實(shí)施過(guò)程中干預(yù)食品的發(fā)放、 樣品的收集以及輔導(dǎo)和隨訪等活動(dòng)； 另外 5 人負(fù) 責(zé)對(duì)照組人群，每位工作人員負(fù)責(zé) 20 名志愿者的招募、問(wèn)卷調(diào)查以及體檢的組 織、樣品的收集等活動(dòng)。3. 體檢、采樣和問(wèn)卷調(diào)查1）體檢 干預(yù)組志愿者的體檢包括兩種類型，一種為基本體檢，另一種為全套體檢， 均在山西省人民醫(yī)院由固定人員進(jìn)行?；倔w檢 項(xiàng)目為：身高、體重、腰圍、臀圍、血壓和脈搏；全套體檢 項(xiàng)目為：身高、體重

17、、腰圍、臀圍、血壓和脈搏；血常規(guī)檢測(cè)（包括：白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、細(xì)胞比積、RBC平均容量、RBC平均血紅量、RBC血紅濃度、血小板、淋巴細(xì)胞百分比、嗜 堿性細(xì)胞百分比、嗜酸性細(xì)胞百分比、單核細(xì)胞百分比、中性細(xì)胞百 分比、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、嗜堿性細(xì)胞絕對(duì)值、嗜酸性細(xì)胞絕對(duì)值、單 核細(xì)胞絕對(duì)值、中性細(xì)胞絕對(duì)值、平均血小板體積、血小板平均寬 度、紅細(xì)胞分布寬度、血小板壓積等項(xiàng)目） ； 乙肝表面抗原和肝功化驗(yàn) （包括乙肝表面抗原、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨 酶、Y -谷氨酰酶的測(cè)定）； 空腹血糖、糖耐量、糖化血紅蛋白、胰島素測(cè)定； 總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯。C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)；CT

18、掃描腹腔內(nèi)臟脂肪； 超聲檢測(cè)脂肪肝； 腸屏障功能檢測(cè)。體檢時(shí)間安排：干預(yù)組：在膳食干預(yù)開始前 30天（ -30天），醫(yī)院組織所有候選志愿者進(jìn)行第 1次全 套體檢。根據(jù)體檢的結(jié)果選擇符合本項(xiàng)目排除納入標(biāo)準(zhǔn)的志愿者作為正式志愿 者。第1次體檢后，每位志愿者按照常規(guī)膳食習(xí)慣自由進(jìn)食1個(gè)月。膳食干預(yù)前1天（0天），由各社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站組織志愿者進(jìn)行第 2次體檢， 此次為基本體檢。膳食干預(yù)期間，+60天和+180天需進(jìn)行一次全套體檢。試驗(yàn)+30天、+90天、 +120天、+150天，各進(jìn)行一次基本體檢。綜上所述：整個(gè)項(xiàng)目實(shí)施中，干預(yù)組志愿者需在山西省人民醫(yī)院進(jìn)行全套體檢3次和基本體檢5次。對(duì)照組：對(duì)照組志

19、愿者進(jìn)行 三次全套體檢（招募時(shí)進(jìn)行第一次體檢，第 3、7個(gè)月后 分別進(jìn)行一次體檢）。2）采樣干預(yù)組志愿者需在試驗(yàn)的-30天、+60天、+180天各收集一次血液樣品（隨 全套體檢進(jìn)行），在試驗(yàn)的-30天、0天、+30天、+60天、+90天、+120天、+150 天、+180天各采集一次大、小便樣品。即：共采集 3次血樣，8次大、小便樣 品。其中-30天、+60天和+180天（即3次全套體檢的前1天晚上）需要志愿者 入住指定的賓館采集大、小便樣品，以保證收集到新鮮的樣品并立即凍存（采樣 方法見附錄2）。其它時(shí)間（0天、+30天、+90天、+120天、+150天）由志愿者自行在家中 采集大、小便樣品

20、（采樣方法見附錄1）。每次基本體檢日前由工作人員給志愿者發(fā)放采樣用的糞尿樣采集袋。志愿者于體檢前一日開始采集大便樣品，并于體檢日清晨采集空腹晨尿。大小便樣品在體檢時(shí)帶至醫(yī)院。糞便和尿液樣品采集的 間隔時(shí)間應(yīng)不超過(guò)24小時(shí)。對(duì)照組志愿者需在三次全套體檢日前入住指定的賓館采集大、小便樣品。i）血漿樣品收集（在醫(yī)院進(jìn)行）體檢當(dāng)日清晨8點(diǎn)左右，在空腹8-10小時(shí)后，受試個(gè)體應(yīng)該空腹前往醫(yī)院。在體檢時(shí)，采集10ml新鮮血液，醫(yī)院用其中一部分樣品進(jìn)行血糖、血脂及其他 相關(guān)指標(biāo)的分析，其余用于分離血漿、白細(xì)胞和紅細(xì)胞。每一份合格血樣必須包 含至少6管血漿（每管體積不得少于400AI），1管白細(xì)胞（每管體積大

21、約500-7001 ）和2管紅細(xì)胞，于-80C凍存，用于后續(xù)分析。ii）尿液樣品收集收集方法見附錄1、2。iii）大便樣品收集收集方法見附錄1、2。3）問(wèn)卷調(diào)查對(duì)干預(yù)組志愿者，需在-30日前依次收集篩選問(wèn)卷和一般問(wèn)卷、膳食頻度問(wèn) 卷和24小時(shí)膳食回顧問(wèn)卷 等信息。從膳食干預(yù)日（+1天）起至干預(yù)結(jié)束（+180 天），志愿者須每天在統(tǒng)一配發(fā)的 每日飲食記錄表 日記本上詳細(xì)記錄每日食 用八寶粥、高復(fù)合纖維餅干和高復(fù)合纖維沖調(diào)劑的情況，以及其它加餐和服藥等 特殊情況，并在每周健康俱樂部活動(dòng)日遞交給社區(qū)工作人員。志愿者需向工作人員匯報(bào)所有的不良事件、藥物、治療以及生活方式的改變情況。 如果受試者有任 何

22、不適，需及時(shí)與工作人員聯(lián)系。工作人員需檢查1周來(lái)受試者每日的飲食情況， 總結(jié)后再將日記本返回志愿者。對(duì)照組志愿者，需在試驗(yàn)開始依次收集篩選問(wèn)卷和一般問(wèn)卷、膳食頻度問(wèn)卷 和24小時(shí)膳食回顧問(wèn)卷 等信息,第3月和第7月分別收集24小時(shí)膳食回顧問(wèn)卷 信息。五、數(shù)據(jù)收集本項(xiàng)目中收集到的數(shù)據(jù)匯總?cè)缦卤?。?shù)據(jù)收集內(nèi)容內(nèi)容簡(jiǎn)要描述一般問(wèn)卷人口學(xué)資料出生日期、性別、婚姻狀態(tài)、職業(yè)、居住年限社會(huì)經(jīng)濟(jì)狀態(tài)受教育年限，家庭總收入等病史、家族史包括高血壓、糖尿病和心血管疾病在內(nèi)的所有健康問(wèn)題，以及藥物治療情況吸煙和飲酒目前和過(guò)去吸煙和飲酒的狀況：包括數(shù)量、類型、開始和停止年齡等體力活動(dòng)水平過(guò)去一周包括工作和休閑時(shí)間在

23、內(nèi)的體力活動(dòng)和體育鍛煉 情況膳食調(diào)查冋卷膳食調(diào)查24小時(shí)膳食回顧和過(guò)去一年食物攝入頻率及攝入量每日飲食記錄 表減肥期間每日飲 食記錄飲食干預(yù)期間，每日服用試驗(yàn)用八寶粥、高復(fù)合纖維苦瓜粉沖調(diào)劑、高復(fù)合纖維餅干及加餐食物情況，以及各種特殊情況信息體檢基本體檢體格檢查身高、體重、腰圍、臀圍、血壓、脈搏全套體檢體格檢查身高、體重、腰圍、臀圍、血壓、脈搏腸屏障功能測(cè)定腸屏障通透性監(jiān)測(cè)血液血常規(guī)；乙肝表面抗原和肝功化驗(yàn)；空腹血糖、糖耐量、 糖化血紅蛋白、胰島素測(cè)定；總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯；C-反應(yīng)蛋白其它超聲檢測(cè)脂肪肝生物樣本采集血樣血清、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血漿尿樣代謝物組成；腸通透

24、性檢測(cè)糞便腸道菌群組成、糞便中免疫毒素、遺傳毒素和細(xì)胞毒素的活 性測(cè)定六、時(shí)間安排2009.03與合作各方簽署相關(guān)合作協(xié)議；準(zhǔn)備現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)所需場(chǎng)地和物資；培訓(xùn)現(xiàn)場(chǎng)工作人員；舉行項(xiàng)目啟動(dòng)儀式（3月31日）；2009.04-05確定候選志愿者，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查的前期準(zhǔn)備；第一次全套體檢，排除不符合條件的研究對(duì)象;培訓(xùn)正式志愿者；成立健康俱樂部，建立網(wǎng)上咨詢交流平臺(tái)；2009.05-12完成6個(gè)月的膳食干預(yù);完成血、大小便樣品的采集;七、研究者介紹趙立平：男，微生物學(xué)教授，博士生導(dǎo)師。主要研究方向是微生物分子生態(tài) 學(xué)與微生物元基因組學(xué)、人體系統(tǒng)生物學(xué)。1989年在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得博士學(xué)位，1989年至19

25、93年在山西農(nóng)科院生 物工程研究室任副主任，1993年至1995年美國(guó)康乃爾大學(xué)植病系訪問(wèn)學(xué)者，1995 年至2000年山西大學(xué)生物工程實(shí)驗(yàn)室主任，2000年12月至今在上海交通大學(xué) 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院工作?，F(xiàn)任上海系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究中心副主任，上海交通大學(xué) 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院副院長(zhǎng)。國(guó)家自然科學(xué)基金第九屆遺傳學(xué)科評(píng)審委員、第十屆 微生物學(xué)科評(píng)審委員。國(guó)際微生物生態(tài)學(xué)會(huì)（ISME）常務(wù)理事。Systematic and Applied Microbiology、 FEMS Microbial Ecology 等國(guó)際刊物的編委。在國(guó)內(nèi)最早系統(tǒng)開展微生物分子生態(tài)學(xué)研究，在復(fù)雜微生物群落結(jié)構(gòu)分析技術(shù)和統(tǒng)計(jì)

26、計(jì)算方法等方面做了很多創(chuàng)新性工作。對(duì)廣泛使用的PCR-DGGE技術(shù)做了重要改進(jìn)，成為國(guó)際上使用該技術(shù)研究微生物生態(tài)學(xué)的先進(jìn)實(shí)驗(yàn)室之一； 創(chuàng)新建立了基于隨機(jī)擴(kuò)增指紋圖技術(shù)和分子雜交技術(shù)，分析對(duì)比群落結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)重要功能細(xì)菌基因組片段作為分子標(biāo)記的技術(shù)方法。對(duì)人和動(dòng)物的腸道、處理 工業(yè)廢水的生化池、土壤、油藏等環(huán)境中的微生物群落結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系做了大 量的研究工作，取得了有意義的結(jié)果。在 PNAS （proceeding of National academy of Science USA）、AEM （Applied and Environmental Microbiology）、ISME Jour

27、nal、 BMC Bioinformatic、 Journal of Proteome Research、Journal of Clinical Microbiology、Microbial Ecology、FEMS Microbiology Ecology、Journal of Microbiological Methods、FEMS Microbiology Letters 等刊物發(fā)表相關(guān)論文二十余 篇,在國(guó)內(nèi)外同行中具有廣泛的影響。 在2006年8月的第11屆國(guó)際微生物生態(tài) 大會(huì)上被選為國(guó)際微生物生態(tài)學(xué)會(huì)常務(wù)理事。多次在國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議做大會(huì)報(bào)告和分會(huì)場(chǎng)報(bào)告。如應(yīng)邀在第八屆細(xì)菌遺傳學(xué) 與生態(tài)

28、學(xué)國(guó)際研討會(huì)（法國(guó)里昂）上做 key note報(bào)告，在第十屆國(guó)際微生物生態(tài) 大會(huì)環(huán)境生物技術(shù)分會(huì)（墨西哥坎昆）做報(bào)告。 2008年8月作為主席主持了第 11屆國(guó)際微生物生態(tài)大會(huì)（澳大利亞）的人體微生物組會(huì)議，并做特邀報(bào)告。2009年 4 月在國(guó)際胃腸道功能會(huì)議（美國(guó)芝加哥）做大會(huì)報(bào)告。 近年來(lái)，積極推動(dòng)系統(tǒng)生物學(xué)理念在微生物生態(tài)學(xué)領(lǐng)域特別是人體腸道菌群 研究中的應(yīng)用，注重發(fā)展用代謝組學(xué)和元基因組學(xué)相結(jié)合的方法研究腸道菌群在 肥胖、糖尿病等復(fù)雜疾病中的作用， 開始形成一個(gè)新的人體元基因組學(xué)研究方向， 取得了一些重要的研究結(jié)果。 其中發(fā)表在 PNAS 的論文連續(xù) 2 個(gè)月是被閱讀最多 的論文，并作

29、為 Research Highlight 得到 NATURE Review Microbiology 的點(diǎn)評(píng)， 同時(shí)得到 Nature China 網(wǎng)站的點(diǎn)評(píng)。主持承擔(dān)過(guò)多項(xiàng) 863 計(jì)劃、國(guó)家自然科學(xué)基金、 地方和國(guó)家級(jí)科技項(xiàng)目。 目 前主持的項(xiàng)目有國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目、 科技部國(guó)際合作重點(diǎn)項(xiàng)目、 科技部 支撐計(jì)劃項(xiàng)目、上海市國(guó)際合作項(xiàng)目、衛(wèi)生部國(guó)家科技重大專項(xiàng)（子課題）和多 項(xiàng)橫向課題等。此外，其領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)目前還參與國(guó)家 973 計(jì)劃和多個(gè) 863 計(jì)劃、 國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目等。聯(lián) 系 方 式 ： 單 位 電 話 34204877 ， 電 子 郵 件 ： lpzhao，Blog: 附

30、錄 1：基本體檢大小便樣品的采集方法工作人員需在每次體檢日前兩天給每位志愿者發(fā)放采樣用的貼有志愿者姓 名和編號(hào)的大小便樣品采集盒一套 （內(nèi)含貼有編號(hào)的儲(chǔ)尿管 1 個(gè)、一次性塑料手 套 2 雙、一次性塑料杯 1 個(gè)、大便采集管 1 個(gè)、采樣方法說(shuō)明一份） 。志愿者在 家中自行采集大小便樣品。大便和小便樣品采集的間隔時(shí)間應(yīng)不超過(guò) 24 小時(shí)。 一、小便樣品采集方法（一）采樣方法受試者需在體檢當(dāng)日采集 清晨起床后第一次排尿的中段尿 。 在排小便前打開大小便樣品采集盒， 取出一次性塑料杯和儲(chǔ)尿管。 先將前段 小便排出后， 將中段尿液排入一次性塑料杯中， 再將尿液倒入儲(chǔ)尿管內(nèi)， 即刻旋 緊管蓋，將儲(chǔ)尿管

31、放在樣品收集盒內(nèi)。尿液裝滿儲(chǔ)尿管的 2/3 即可，不要全滿。 接尿操作可帶一次性塑料手套進(jìn)行。一次性塑料杯中多余的尿液倒入馬桶中沖 掉，一次性杯子丟入垃圾桶。（二）接收儲(chǔ)尿管志愿者采集到晨尿后， 帶到交給體檢處的工作人員進(jìn)行集中和保存。 工作人 員接收儲(chǔ)尿管，檢查尿量是否足夠、儲(chǔ)尿管管蓋是否旋緊。 接收符合條件的尿樣， 同時(shí)檢查編號(hào)，在小便樣品采集表和名單相應(yīng)地方進(jìn)行標(biāo)注。（三）小便樣品分裝 工作人員接收儲(chǔ)尿管后即刻返回實(shí)驗(yàn)室，找到對(duì)應(yīng)編號(hào)的小便樣品保存管， 排列在試管架上?；靹騼?chǔ)尿管中小便樣品后，取 1.5 ml 樣品至每個(gè)相同編號(hào)的 樣品保存管中。將分裝后的4支/人小管放入有相應(yīng)編號(hào)的小袋

32、中，-80 °C保存。二、大便樣品采集方法（一）采樣方法大便和小便樣品采集的間隔時(shí)間應(yīng)不超過(guò) 24小時(shí)。每位志愿者都配備有一個(gè)采樣小盆， 套好塑料袋， 內(nèi)鋪干凈草紙。 受試者排 便前先在馬桶內(nèi)排凈小便， 并用水沖掉， 然后將準(zhǔn)備好的塑料盆放入馬桶的出水 口之上，將大便排入小盆內(nèi)。盡量勿將尿液排入小盆內(nèi)，污染大便樣品。打開大便樣品采集管， 用采樣勺挑取一滿勺中段大便， 放入大便樣品采集管 的液體中，即刻旋緊管蓋，用手劇烈震搖，混勻樣品和液體，放于室溫陰濕干燥 處。盡快通知工作人員遞交樣品。（二）大便樣品的分裝 工作人員拿到大便樣品后，先在漩渦震蕩器上劇烈懸浮大便采集管內(nèi)樣品，再將管中懸

33、液分裝至6個(gè)2 ml細(xì)胞凍存管中，每管約1.5 ml , -80 °C保存。附錄 2：全套體檢大小便樣品的采集方法小便樣品收集標(biāo)準(zhǔn)操作流程一、準(zhǔn)備工作（一）發(fā)放小便樣品采集袋及說(shuō)明 志愿者到達(dá)指定賓館后，先集中于會(huì)議室。工作人員向所有志愿者簡(jiǎn)要說(shuō)明采 樣和體檢的要求和注意事項(xiàng)，并觀看大小便樣品采集流程錄像。工作人員需在志愿者入住房間前給每位志愿者發(fā)放貼有志愿者姓名和編號(hào)的大 小便樣品采集袋一套（內(nèi)含 50 ml 貼有志愿者編碼的儲(chǔ)尿管 1 個(gè)、一次性塑料手套 1 雙、一次性塑料杯 1 個(gè)、草紙若干、采樣說(shuō)明一份） ，并在志愿者住宿房間的衛(wèi)生 間內(nèi)放置 1 個(gè)儲(chǔ)尿管架。（二）器材與準(zhǔn)備大小便樣品采集袋、乳膠手套、 50 ml 離心管架、凍存管架、 1 ml 移液槍、貼 有編號(hào)的6支/人的2 ml細(xì)胞凍存管、冰盒、-20 ° C冰箱、-70 ° C冰箱。