口腔鱗狀細胞癌組織p73與p53基因表達及意義

1、口腔鱗狀細胞癌組織p73與p53基因表達及意義 作者：管宏偉 尚偉 楊學財 岳金 賈暮云 【摘要】 目的 探討P73、P53蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及與腫瘤侵襲和轉移的關系。方法 應用免疫組織化學通用型兩步法檢測50例口腔鱗狀細胞癌病人的癌組織和癌旁正常組織中P73、P53蛋白表達。利用計算機圖像分析得出平均吸光度（AOD）并進行統(tǒng)計學分析。結果 口腔鱗狀細胞癌組織P73、P53蛋白的表達明顯高于癌旁組織（u=2.798、2.913，P<0.01）。P73蛋白的表達與腫瘤T分期、腫瘤侵襲方式及區(qū)域淋巴結轉移相關（r=0.288、0.327、0.374，P<0.05）；P53蛋白

2、的表達與腫瘤病理分級、區(qū)域淋巴結轉移相關（r=0.283、0.294，P<0.05）；口腔鱗狀細胞癌組織中P73與P53蛋白的表達無明顯相關性（r=0.172，P>0.05）。結論 P73、P53可作為評估口腔鱗狀細胞癌生物學行為和預后的獨立指標。 【關鍵詞】 癌,鱗狀細胞；口腔；基因,p73；基因,p53 ABSTRACTObjective To study the relations between P73 and P53 expression and invasion as well as metastasis in oral squamous cell carcinoma

3、（OSCC）. Methods The P73 and P53 were detected in carcinoma and non-carcinoma tissue that adjacent to carcinoma in 50 OSCC patients by immunohistochemistry method. The results were evaluated by computer-aided image and average optical density （AOD） analyzed statistically. Results The expressions of P

4、73 and P53 in OSCC were significantly higher than that in the adjacent tissue （u=2.798,2.913;P<0.01）. The expression of P73 was positively related with T satging, invasive pattern and regional lymph node metastasis （r=0.288,0.327,0.374;P<0.05）.The expression of P53 was related with pathologic

5、grading and regional lymph node metastasis （r=0.283,0.294;P<0.05）. The expression of P73 had no obvious correlation with P53 （r=0.172,P>0.05）.Conclusion The expression of P73 and P53 can be used as an independent parameter in predicting the biological behavior and prognosis of OSCC. KEY WORDS

6、Carcinoma, squamous cell; Mouth; Gene, p53; Gene p73 p73基因作為p53基因家族的第一個成員，于1997年首先由KAGHAD等1發(fā)現(xiàn)。p73基因編碼的P73蛋白，在結構和功能上均與P53蛋白具有很高的同源性1,2，且與腫瘤的發(fā)生密切相關。因此，p73作為候選的抑癌基因，受到廣泛關注。本文應用免疫組織化學方法對口腔鱗狀細胞癌組織和癌旁組織中P53和P73蛋白表達進行檢測，探討其在口腔鱗狀細胞癌侵襲和轉移過程中的意義。 1 材料和方法 1.1 病例選擇 選擇2005年1月2007年12月在我院口腔頜面外科手術治療的原發(fā)口腔鱗狀細胞癌病人50例，

7、男34例，女16例；年齡2980歲，中位年齡62.5歲。其中舌癌24例，頰癌、牙齦癌、口底癌、腭癌、唇癌共26例。所有病例均行原發(fā)灶擴大切除及頸淋巴清掃術，手術標本均經(jīng)石蠟固定、蘇木精-伊紅染色，常規(guī)病理檢查。按照UICC 2002年標準進行TNM分期3，T1 期17例，T2期 20例，T3 期9例，T4 期4例；病理分級：高分化28例，中、低分化22例。有頸淋巴結轉移者20例，無轉移者30例。取其癌組織、癌旁正常組織（指腫瘤邊緣外2.0 cm以上的黏膜組織）及頸清切除的頸淋巴結的石蠟標本進行研究。全部病例術前均未接受放療或化療。 1.2 主要試劑和儀器 鼠抗人P73和P53單克隆抗體（北京中

8、杉金橋生物技術有限公司）；PV 6000二步法免疫組化檢測試劑盒（Zymed公司，美國）；粘片劑APES（北京中杉金橋生物技術有限公司）；PBS磷酸緩沖液（濃度0.01 mmol/L，pH 7.27.4）；OLYMPUS顯微鏡（BH-2，日本）；Sample PCI圖像分析軟件（美國）。 1.3 免疫組織化學染色 存檔的蠟塊均經(jīng)病理檢查證實，用LEICA石蠟切片機做4 m厚連續(xù)切片3張，1張作空白對照，2張行免疫組化染色。采用免疫組化通用型兩步法染色，參照試劑盒說明書進行。用已知陽性切片做陽性對照，用緩沖液代替一抗做陰性對照。 1.4 結果判斷及圖像分析 以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒作為P73、P5

9、3陽性細胞。對切片進行圖像分析。將病理切片放在100倍的顯微鏡下，觀察組織中各抗原的表達情況，然后在400倍的顯微鏡下隨機選取3個視野。將每個視野圖像攝入計算機，對圖像進行裁剪，選定要測量的區(qū)域。將圖像分割，利用顏色的差異把“熱點”圖像與周圍的背景分開。對分割后的圖像進行過濾和提取，然后由計算機對圖像進行分析，得出結果。用平均吸光度（AOD）值表示抗原的表達水平，切片陽性表達的強弱與AOD值呈正相關。 1.5 統(tǒng)計學處理 結果應用SPSS 13.0 For Windows統(tǒng)計軟件包進行分析?？谇话┡越M織與癌組織比較（方差不齊）采用Wilcoxon方法進行檢驗；口腔癌旁組織、高分化鱗狀細胞癌、中

10、低分化鱗狀細胞癌（方差不齊）組織比較采用Mann-Whitney U方法進行檢驗；兩檢測指標與臨床病理因素的關系及兩檢測指標之間的關系采用Spearman相關分析。 2 結果 2.1 口腔鱗狀細胞癌組織與癌旁正常組織中P73、P53蛋白的分布 在癌旁正常黏膜中P73蛋白均陰性，P53蛋白大部分為陰性，僅少數(shù)病例基底層細胞核有弱陽性表達?？谇击[狀細胞癌P73與P53蛋白均定位于細胞核，少數(shù)可見胞漿弱陽性。染色分布形式不一，可出現(xiàn)在整個腫瘤區(qū)或腫瘤部分區(qū)域，胞核著色強度在不同病例之間或同一瘤體之內均有差異。分化好的癌巢中，蛋白積聚常位于癌巢邊緣部分，中央部分的癌細胞染色陰性；分化較差的癌組織中，陽

11、性細胞密集或彌散分布，陽性細胞數(shù)量較多。 2.2 癌旁正常組織、高分化鱗狀細胞癌、中低分化鱗狀細胞癌組織P73、P53的表達 口腔鱗狀細胞癌組織中P73、P53的表達明顯高于癌旁正常組織，差異有極顯著意義 （u=2.798、2.913，P0.01）。高分化鱗狀細胞癌組織P73的表達與中低分化鱗狀細胞癌比較，差異無顯著意義 （u=1.132，P0.05），但高分化鱗狀細胞癌或中低分化鱗狀細胞癌組織中的表達卻明顯高于癌旁正常組織（u=2.716、3.070，P0.01）。P53的表達三者之間均有統(tǒng)計學差異，即中低分化鱗狀細胞癌組織中的表達明顯高于高分化鱗狀細胞癌（u=2.11，P0.05），高分化

12、鱗狀細胞癌中的表達明顯高于癌旁正常組織（u=2.764，P0.01）。見表1。表1 口腔鱗狀細胞癌與癌旁正常組織P53、P73的表達（略） 2.3 口腔鱗狀細胞癌組織P73、P53的表達與臨床病理指標的關系 P73的表達與口腔鱗狀細胞癌病人的性別、年齡、腫瘤生長部位、病理分級無明顯的相關性；與T分期、生長方式、淋巴結狀況呈明顯正相關。P53的表達與口腔鱗狀細胞癌病人的性別、年齡、T分期、生長方式、生長部位無明顯的相關性；與病理學分級、淋巴結狀況呈正相關，見表2。表2 口腔鱗狀細胞癌組織P53、P73的表達與臨床病理指標的關系（略）注：*P0.05，*P0.01 2.4 口腔鱗狀細胞癌P53、P

13、73表達的相關性分析 口腔鱗狀細胞癌組織中P73與P53的表達無明顯相關性（r=0.172，P>0.05）。 3 討 論 p53抑癌基因是細胞抑癌基因中研究最廣泛和深入的基因之一。p53基因位于人17號染色體短臂，分為野生型和突變型。野生型p53基因是一種腫瘤抑制基因，參與細胞的分化調控，并以基因調控方式阻抑癌基因的活動，阻止異常染色體的形成。突變型p53基因表達則喪失抑癌功能，反而具有促進惡性轉化的活性4，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉移及預后相關5,6。p73基因的表達產(chǎn)物P73蛋白與P53蛋白功能相似，在序列上具有同源性，被認為是候選的抑癌基因。P73蛋白對細胞生長和凋亡有雙

14、重調節(jié)作用，與多種腫瘤有關。在多種人類腫瘤組織中P73蛋白過表達，在正常組織中不表達7。 口腔鱗狀細胞癌具有較高的侵襲性和淋巴結轉移能力，早期的診斷和治療具有重要的意義。有研究顯示，p73、p53基因在口腔某些腫瘤組織中具有較高水平的表達，p73還可能參與了癌細胞的生長與增殖8。本文結果顯示，P73在癌旁正常組織中表達的量很低，癌組織中的表達量明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義，但其表達在高分化鱗狀細胞癌與中低分化鱗狀細胞癌之間卻無統(tǒng)計學差異。P73表達同時還與腫瘤T分期及局部淋巴結轉移呈正相關。 P73表達隨著腫瘤的增大、浸潤及淋巴結轉移而不斷增高，說明了P73與口腔鱗狀細胞癌的體積大小及腫瘤的淋巴

15、轉移有關，很可能參與了癌細胞的增殖、侵襲及轉移，對預測口腔腫瘤的生長發(fā)展及淋巴轉移具有一定的價值。這一結論與TANNAPFEL等9對肝細胞性肝癌的研究相一致。毛馳等10研究顯示，P53陽性表達與口腔鱗狀細胞癌病人性別、年齡、腫瘤大小、發(fā)生部位、病理分級以及淋巴結轉移情況均無直接關系，同時亦未得出其表達和預后之間的關系。而國外亦有報道認為P53表達和臨床病理指標之間無相關性，但是對于無淋巴結轉移的病人P53陽性表達提示預后差11。GEISLER等也得出P53是頭頸部腫瘤病人預后的因素之一的結論。本研究顯示，P53的表達與病人性別、年齡、腫瘤部位、T分期、生長方式均無關，與腫瘤病理分級、區(qū)域淋巴結

16、轉移呈正相關性。說明P53蛋白與口腔鱗狀細胞癌的惡性程度及腫瘤的淋巴轉移有關。 口腔鱗狀細胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個多基因相互作用的復雜過程，但癌基因、抑癌基因也有可能各自獨立發(fā)揮一定作用。本研究結果顯示，P73、P53蛋白陽性表達并無相關性。有人對頭頸鱗狀細胞癌組織中p53、p63、p73基因進行直接DNA序列檢測，發(fā)現(xiàn)p53基因頻發(fā)突變，而p63和 p73罕見突變。認為當p53基因發(fā)生突變時，p73、p63基因并不能取代p53基因的作用。因此，我們認為p73、p53基因可作為評估口腔鱗狀細胞癌癌生物學行為和預后的獨立指標。 【參考文獻】 1KAGHAD M, BONNET H, YANG A,

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