菌落總數(shù)的測定

1、實驗九菌落總數(shù)的測定一、目的要求學習掌握菌落總數(shù)測定的基本原理和方法， 了解食品上微生物的 分布和繁殖動態(tài)。二、實驗說明菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得 1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標志， 也可以應(yīng)用這一 方法觀察細菌在食品中繁殖動態(tài)，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價時 提供依據(jù)。每種細菌都有它一定的生理特性，培養(yǎng)時應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及 其他生理條件(如溫度、培養(yǎng)時間、pH、需氧性質(zhì)等)去滿足其要求 才能將各種細菌都培養(yǎng)出來。但在實際工作中，一般都只用一種常用 的方法去作。細菌菌落總數(shù)的測定，所得結(jié)果，只包括一君能在營養(yǎng) 瓊脂上發(fā)

2、育的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。三、實驗材料(1)培養(yǎng)箱36 ±1C(2)恒溫水浴46 ±1C(3)天平。(4)可調(diào)式電爐。(5)吸管1.0ml、10.0ml,標有0.1ml單位刻度。(6)廣口瓶500ml ,有蓋。(7)玻璃珠直徑5mm(8)平皿皿底直徑9.0cm。(9)試管 18 x 200mm(10)酒精燈。(11)試管架。(12)研缽。(13)滅菌刀和剪刀。(14)滅菌鐐子。(15)酒精棉球。(16)玻璃蠟筆。(17)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。(18)滅菌生理鹽水、分裝于試管中，每管 9.0ml。(19)食品檢樣。四、檢驗程序(圖9-1)五、方法步驟(0檢驗稀釋和培養(yǎng)1、以無菌

3、操作，將檢樣25g (或25ml)剪碎放于含有225ml滅 菌生理鹽水的廣口瓶內(nèi)(瓶內(nèi)置有適量玻璃珠)或滅菌研缽內(nèi)，經(jīng)充 分振搖或研磨用成1: 10的均勻稀釋液。2、用1.0ml滅菌吸管吸取1: 10稀釋液1.0ml,沿管壁徐徐注 入含有9.0ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)液 面)，振搖試管混合均勻，作成1: 100的稀釋液。3、另取1.0ml滅菌吸管，按上述操作作10倍稀釋，如此每遞增稀釋一次，即換1支1.0ml吸管。4、根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)吮疚廴境潭鹊墓烙?，選擇 2-3個適 宜稀釋度，分別作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋液的吸管 移1.0ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，

4、每個稀釋度作兩個平皿。5、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時將涼至 46 c營養(yǎng)瓊脂（可放于 46 X1C水浴保溫）注入平皿約15ml,并移動平皿使混合均勻。同時將 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1.0ml滅菌生理鹽水的平皿內(nèi)作空白對照。6、待稀釋液入平皿后，翻轉(zhuǎn)平板，置 36X1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h （肉、水產(chǎn)品、乳和蛋品為 48±2h）取出，計算平板內(nèi)菌落數(shù)， 乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（或 ml）樣品所含菌落總數(shù)。（二）計算方法1、平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30-300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平板應(yīng)采用兩上平板的平均數(shù)， 其中一個平板有較大 片狀菌落生長時，則不

5、宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該 稀釋度的菌落可計算半個平板后乘以代表全皿菌落數(shù)。2、稀釋度的選擇（1）應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù) 報告之（表9-1例1）。（2）若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)在 30-300之間，則視二 者之比如何來決定。若其比值小于 2,應(yīng)報告其平均數(shù)，若大于2, 則報告其中較小的數(shù)字（表9-1例2及3）。（3）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（表9-1例4）（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30則應(yīng)以稀釋度最低的 平均菌落數(shù)乘以薰度倍數(shù)報告之（表 9-1例5）。（5）若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于 1 （1）乘以最低稀 釋倍數(shù)報告之（表9-1例6）。（6）若所有薰度的平均菌落數(shù)無法不在 30-300之間，其中一部 分大于300,而另一部分則小于30,則以最接近30或300的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（表 9-1例7）。3、菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，小于100時采用二位有 效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法來計算，為了 縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示（表9-1 “報告方式” 欄）。六、實驗作業(yè)1、食品中檢出的菌落數(shù)是