乙型肝炎病毒表面抗原檢測(cè)

1、乙型肝炎病毒表面抗原檢測(cè)（ELISA）1原理：在微孔板上預(yù)包被被純化的乙肝表面抗體（HBsAb ,配以酶標(biāo)記抗體 （HbsAb-HRP及TM播其它試劑，采用夾心法原理檢測(cè)人血清（或血漿） 中乙肝表面抗原（HBsAg 。2試劑：2.1 試劑名稱：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）2.2 試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司2.3 包裝規(guī)格：96Test/Kit2.4 試劑盒組成：HbsAb預(yù)包被微孔板（包被 HbsA。，HbsAg酶標(biāo)抗體 （含HRPfe記HbsAb） , HbsAg陽(yáng)性對(duì)照（含基因工程 HbsAg , HbsAg陰 性對(duì)照（正常人血清），HbsAg樣品稀釋液（含

2、BS砥沖液），濃縮洗滌液 （PBS-T緩沖液），底物A （含H2O2 ,底物B （含TMB ,終止液（含H2 SO4 ,封板膜，自封袋，說明書。2.5試劑儲(chǔ)存條件及有效期：28c避光保存，有效12個(gè)月。3樣本采集：取靜脈血3-4ml于干凈容器中分離出血清或血漿標(biāo)本，如不及時(shí)測(cè)定可 輅于4c冰箱保存，如長(zhǎng)期保存需輅于-15至-20 C凍存，并避免樣本反復(fù) 凍融。高脂血、高膽紅素及溶血樣本可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議 不使用。4所需儀器4.1 全自動(dòng)酶免分析儀4.2 新鮮蒸儲(chǔ)水或去離子水4.3 酶標(biāo)儀（單波長(zhǎng)450nm雙波長(zhǎng)450nm/630nm4.4 微量移液器4.5 37 C恒溫箱或水浴箱

3、1/5下載文檔可編輯4.6 洗板機(jī)或洗瓶5檢驗(yàn)方法5.1 平衡：將試劑盒各組分從盒中取出，平衡至室溫（1825C）,微孔 板板開封后，余者即時(shí)以自封袋封存。5.2 配液：濃縮洗滌液配輅前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解），濃縮 洗滌液和蒸儲(chǔ)水去離子水按1:19稀釋后使用。5.3 編號(hào)：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按序編號(hào)。5.4 稀釋：每孔加入20ul樣品稀釋液。5.5 加樣：分別在相應(yīng)孔中加入100ul陰、陽(yáng)性對(duì)照血清或待測(cè)樣本。5.6 溫育：輅37c溫育60min。5.7 加酶：分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體 50ul。5.8 溫育：輅37c溫育30min。5.9 洗滌：用洗滌液充分洗滌5次、洗滌

4、后扣干（每次應(yīng)保持3060s的 浸泡時(shí)間）。5.10 顯色：每孔加入底物 A、B各50ul,輕拍混勻，37c暗輅30min。5.11 終止：每孔加入終止液50ul ,混勻。5.12測(cè)定：用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng) 450nm或雙波長(zhǎng)450nm/630nmM定各孔OD 值（用單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，需用空白對(duì)照調(diào)零），并記錄結(jié)果。6結(jié)果判定與分析臨界值（C.O.）的計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔O評(píng)均值*2.1 ;陰性對(duì)照 OD勻值小于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。結(jié)果判定：樣本 ODg S/C.O.>=1者為HbsAg陽(yáng)性 樣本OD® S/C.O.<1 者為HbsAg陰性陰性對(duì)照均值>0.1或陽(yáng)性

5、對(duì)照均值<0.4時(shí)，實(shí)驗(yàn)無效，應(yīng)重新試驗(yàn)。7質(zhì)量控制2/5下載文檔可編輯每次試驗(yàn)用HBsAg勺質(zhì)控血清同步檢測(cè)，S/CO值應(yīng)在控制范圍內(nèi)；如失 控，檢查試劑校期、儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確， 直至從新試驗(yàn)使其在控。8參考范圍陰性9臨床意義在血清或血漿中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或?yàn)闊o癥狀攜 帶者。10操作性能靈敏度為ng/ml ,特異性高11方法的局限性11.1 此方法僅適用于個(gè)體的血清或血漿樣本的檢測(cè)， 不適合與混合血清 或血漿樣本及其他體液樣本。11.2 該方法僅作為定性檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原。11.3試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照不能作為靈敏度的考核指標(biāo)，陽(yáng)性

6、對(duì)照僅用于按照說明書步驟操 作時(shí)，驗(yàn)證試劑盒中的組分是否有效。11.4 由于方法學(xué)的局限性，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅作為判斷疾病的一項(xiàng)依據(jù)， 如 需對(duì)患者進(jìn)行確診，建議施于其它檢驗(yàn)手段予以確認(rèn)。12注意事項(xiàng)12.1 試驗(yàn)前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀試劑說明書，任何違反試劑說明書的使用或操作 行為，都可能得到不準(zhǔn)確的結(jié)果。12.2 所有樣本、試劑和各種廢棄物應(yīng)按傳染物處理，嚴(yán)格防止交叉感染， 嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。對(duì)于含有傳染病和懷疑含有傳染源的物質(zhì)， 應(yīng)有合適的生物安全保證制度，下列為有關(guān)注意事項(xiàng)，但不僅限于此：1）戴手套處理樣本和試劑；2）不要用嘴吸樣；3）不可在處理這些物品時(shí)吸煙、進(jìn)食、喝飲料、美容和處理隱形眼

7、鏡等；4）用消毒劑對(duì)濺出的樣本和試劑進(jìn)行消毒；3/5下載文檔可編輯5）按科室有關(guān)條列來消毒和處理所有樣本、試劑和潛在的污染物。12.3 加試劑前應(yīng)先將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次， 使液體混勻。建議使用加液器進(jìn) 行加液，并經(jīng)常對(duì)加液器進(jìn)行校準(zhǔn)。加液時(shí)注意勿使加液槍頭接觸孔內(nèi)液 體，避免液體間相互污染。仔細(xì)操作，避免加樣時(shí)在孔中產(chǎn)生氣泡。12.4 每板設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，設(shè)空白對(duì)照1孔，空白對(duì)照不加樣本 和酶標(biāo)抗體、其余各步相同。12.5 避免在孵育和保存過程中試劑被陽(yáng)光暴曬和接觸次氯酸等強(qiáng)氧化 性物質(zhì)。12.6 孵育溫度要保持在37 C +-1C,溫度過高或者過低可能會(huì)影響檢測(cè) 結(jié)果的準(zhǔn)確性。12.7 封

8、模板為一次性使用，重復(fù)使用可能導(dǎo)致污染。12.8洗板機(jī)在使用結(jié)束后要使用新鮮蒸儲(chǔ)水或高品質(zhì)去離子水沖洗干凈，以防止管路堵塞 和腐蝕。洗滌時(shí)各孔軍需加滿但不溢出，防止孔內(nèi)有殘留物未能洗凈。12.9 每次洗滌結(jié)束請(qǐng)盡早進(jìn)行后續(xù)加液操作， 避免長(zhǎng)時(shí)間暴露而引起錯(cuò) 誤結(jié)果。12.10 使用全自動(dòng)生化儀器時(shí)，封板和洗版后扣干步驟可以省略。但需 要注意保證洗滌液的加液量，保證洗滌后將微孔板孔中的洗液充分吸干， 以免對(duì)實(shí)驗(yàn)造成錯(cuò)誤的結(jié)果。12.11 確保反應(yīng)孔板的底清潔干燥，在讀板前要確?？字幸后w沒有氣泡。12.12 終止后盡早用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)測(cè)量 （建議在10min內(nèi)完成讀值）， 避免放輅過長(zhǎng)時(shí)間而引起的錯(cuò)誤結(jié)果。12.13 檢測(cè)結(jié)果用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)測(cè)量。樣本的檢測(cè)讀數(shù)與樣本中抗原 的濃度不一定呈正相關(guān)。12.14 檢測(cè)結(jié)果呈陰性的樣本，不能絕對(duì)保證樣本中沒有低濃度抗原的 存在，不能完全排除HBV染的可能。12.15 該免疫測(cè)試不能絕對(duì)排除非特異性反應(yīng)的存在，如對(duì)檢測(cè)結(jié)果有 疑問，用相應(yīng)的確認(rèn)試劑或方法對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)。4/5下載文檔可編輯12.16 試劑盒各