試驗(yàn)一薄層板的制備

1、實(shí)驗(yàn)一薄層板的制備、活度測定及應(yīng)用1 .目的要求掌握薄層板的制備及薄層層析的操作方法掌握吸附劑活度測定的原理及方法應(yīng)用薄層層析法檢測以中草藥化學(xué)成分2 .實(shí)驗(yàn)原理薄層層析是一種微量、快速的層析方法.它不僅可以用于純物質(zhì)的鑒定,也可用于混合 物的別離、提純及含量的測定.還可以通過薄層層析來摸索和確定柱層析時(shí)的洗脫條件. 根據(jù)別離的原理不同,薄層層析可以分為兩類：用吸附劑鋪成的薄層所進(jìn)行的層析為吸 附薄層層析；用纖維素粉、硅膠、硅藻土為支持劑鋪成的薄層,屬于分配薄層層析.薄 層層析中以吸附簿層為多用,吸附薄層中常用的吸附劑為氧化銷和硅膠.吸附簿層主要是利用吸附劑對樣品中各成分吸附水平不同,及展開劑

2、對它們的解吸附能力的小同,使各成分到達(dá)別離.吸附作用主要由于物體外表作用力、氫鍵、絡(luò)合、靜電 引力、范德華力等產(chǎn)生.吸附強(qiáng)度決定于吸附劑的吸附水平,還受被吸附成分的性質(zhì)影 響,更與展開劑的性質(zhì)有關(guān).分配簿層層析的原理是,用極性溶劑吸附在同體支持劑上所形成的混合物,鋪成簿層或 裝柱,然后活化、點(diǎn)樣或上樣,再用極性較弱的展開劑或洗脫劑進(jìn)行展開.在 展開過程中,各成分在固定相和流動相之間作連續(xù)不斷的分配.由于各成分在兩相間的 分配系數(shù)不同,因而可以到達(dá)相互別離的目的.2. 4由于化合物的極性不同,吸附水平不相同,在展開劑上移動,進(jìn)行不同程度的解析,根據(jù)原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中央及展開劑前沿的距離,計(jì)算比移值

3、Rf:化合物的吸附水平與它們的極性成正比,具有較大極性的化合物吸附較強(qiáng),因此 R值較 小.在給定的條件下吸附劑、展開劑、板層厚度等,化合物移動的距離和展開劑移動 的距離之比是一定的,即R值是化合物的物理常數(shù),其大小只與化合物本身的結(jié)構(gòu)有關(guān), 因此可以根據(jù)R值鑒別化合物薄層層析可適用小量樣品幾到幾十微克甚至 0.01 g的別離：也可用于多達(dá)500mg樣品的別離,是近代有機(jī)化學(xué)中用于定性、定量的一種重要手段.特別適用于那些揮發(fā)性 小的化合物,以及在高溫下易發(fā)生化學(xué)變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì).3實(shí)驗(yàn)材料材料：硅膠GF254,硅膠H,竣甲基纖維素鈉,玻璃片,市售薄層板溶劑：石油醴,乙酸乙酯,二乙胺

4、等4實(shí)驗(yàn)步驟硅膠(H)竣甲基纖維鈉(CMC-Na而層板的制備取竣甲基纖維納10ml,倒入燒杯中,然后逐步參加薄層層析用硅膠克,不斷振搖 成均勻的稀糊,把兩塊載玻片面對面結(jié)合在一起,這樣每片只有一面與硅膠糊接觸, 使薄片浸入硅膠稀糊中,然后慢慢取出,分開二塊薄片,將未粘附硅膠糊的那一面水 平放在一張清潔的紙上,讓其自然陰干,100c下烘30分鐘.冷后于枯燥器內(nèi)備用. 未消耗的硅膠稀糊可貯存在廣口瓶內(nèi),以供再用.吸附劑的活度測定一般選用三種染料的薄層層析法進(jìn)行測定,即用甲基黃(Dimethy-yellow.P-Dimethylaminoazobenzene ).蘇丹紅(Sudan m ), 靛酚藍(lán)

5、(Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline )的苯溶液各 10 屋 點(diǎn)滴于硅膠 H薄層上, 以苯為展開劑,展開10cm (約20分鐘),觀察染料別離情況.薄層層析的應(yīng)用湖北貝母生物堿成分的TLC檢識分別用毛細(xì)管吸取湖北貝母總生物堿氯仿溶液點(diǎn)滴在硅膠CMC-Na薄層上,以QH-EtoAc-NHEt2(6 : 4: 1)的比例配成展開劑展開,待展開劑展開至離薄板上端邊緣約 1cm時(shí),取出薄板自然吹干,然后噴灑顯色劑改進(jìn)碘化鈿鉀噴霧,晾干,觀察并記錄 TLC 別離結(jié)果.丹參色素的TLC檢識分別用毛細(xì)管吸取丹參乙醴提取液點(diǎn)滴在硅膠

6、 CMC-Nat層上,以石油醴-醋酸乙酯 (9 : 1)的比例配成展開劑展開,待展開劑展開至離薄板上端邊緣約 1cm時(shí),取出薄板自 然吹干,然后噴灑顯色劑改進(jìn)碘化鈿鉀噴霧,晾干,觀察并記錄 TLC別離結(jié)果.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論實(shí)驗(yàn)制備的硅膠CMC-Nat層外表均勻,無明顯氣泡出現(xiàn),但活化后觸碰薄層時(shí),容易 出現(xiàn)掉粉現(xiàn)象,粘合效果欠佳,這說明薄層板的質(zhì)量仍有待提升.對薄層板進(jìn)行活度測試,觀察薄板,可以看到拖尾現(xiàn)象,且薄板經(jīng)溶劑浸泡后有少許地 方吸附劑出現(xiàn)明顯脫落現(xiàn)象,這可能是由于竣甲基纖維鈉參加的量不夠引起的.用%:甲基黃、蘇丹紅田,靛酚藍(lán)的苯溶液各10仙1點(diǎn)滴于硅膠H薄層上,以苯為展開劑, 展開后,三種染料別離明顯：靛酚藍(lán)斑點(diǎn)接近于起始線,二甲基黃斑點(diǎn)靠近薄層中間位 置,蘇丹紅斑點(diǎn)那么于兩種染料斑點(diǎn)之間.取硅膠Gf高效板對湖北貝母生物堿成分進(jìn)行檢識,在展開劑C6H5-EtoAc-NHEt2(6:4 : 1)展開之后,吹干,觀察薄層板無明顯現(xiàn)象,放在紫外燈下明顯看到樣品點(diǎn)接近原點(diǎn),無 展開現(xiàn)象,而噴灑顯色劑之后,原點(diǎn)上的兩個(gè)樣品變成黑色.換成展開劑為 G*EtoAc-NHEt2 (3 : 4: 1),其極性提升,樣品點(diǎn)有稍微的上升,說明樣品中生物堿的 極性較高,需要換成極性高的展開劑才能得到好的別離效果.取硅膠Gf高