基因工程的工具

1、善假于物也善假于物也補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子不編碼蛋白質(zhì)。不編碼蛋白質(zhì)。：編碼蛋白質(zhì)：編碼蛋白質(zhì) , ,連續(xù)不間斷連續(xù)不間斷編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)調(diào)控遺傳信息表達(dá)調(diào)控遺傳信息表達(dá), ,上上 游的游的RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn): :真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子

2、 外顯子外顯子 啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用：有調(diào)控作用, ,上游有上游有RNARNA聚合聚合酶結(jié)合位點(diǎn)酶結(jié)合位點(diǎn)( (啟動(dòng)子啟動(dòng)子) )。非編碼序列：非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的，邊的，邊_邊邊_編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的，先的，先_后后_相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的

3、都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具有和具有調(diào)控作用的調(diào)控作用的_區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯1下列關(guān)于基因結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)中，正確的是 （ ）A大豆基因中內(nèi)含子是能夠編碼蛋白質(zhì)的序列B乳酸菌與酵母菌基因結(jié)構(gòu)中都存在外顯子和內(nèi)含子C大腸桿菌基因與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)位于編碼區(qū)的下游D水稻細(xì)胞基因的編碼區(qū)中存在非編碼序列2（多選）原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的共同特點(diǎn)是 （ ）A編碼區(qū)都有能編碼蛋白質(zhì)的序列B編碼區(qū)都是連續(xù)的C非編碼區(qū)都能調(diào)控遺傳信息的表達(dá)D非編碼區(qū)都有RNA聚合酶結(jié)合的

4、位點(diǎn)DACD基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定1.基因工程的操作步驟正確的操作順序是 使目的基因與運(yùn)載體相結(jié)合將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞檢測目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求提取目的基因A B C D 目前被較廣泛提取目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。因、植物抗病基

5、因等?；虿僮鞯幕静襟E基因操作的基本步驟一、提取目的基因一、提取目的基因?qū)⑿枰幕驈墓w生物將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。的細(xì)胞內(nèi)提取出來。供體生物細(xì)胞供體生物細(xì)胞取出取出DNADNA用限制酶剪用限制酶剪去多余部分去多余部分目的基因目的基因限制酶限制酶一、提取目的基因一、提取目的基因1 1、目的基因主要是指、目的基因主要是指_編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子2 2、獲取目的基因的常用方法、獲取目的基因的常用方法（1 1）從基因文庫中獲?。幕蛭膸熘蝎@?。? 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增（3 3）人工合成）人工合成(1

6、)從基因文庫中獲取目的基因什么是基因文庫？什么是部分基因文庫？怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？概念：基因文庫 （gene library）基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫） 將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為基因文庫(gene library)基因組文庫: 基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫.部分基因文庫: 基因文庫中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫.基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系思考：基因文庫如何構(gòu)建？ 將某種生物體內(nèi)的D

7、NA全部提取出來，選用適當(dāng)?shù)南拗泼福瑢NA切成一定范圍大小的DNA片段，然后，將這些DNA片段分別與載體連接起來，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，每個(gè)受體菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是說，這個(gè)群體包含了這種生物的所有基因，這樣就構(gòu)建成了生物的基因組文庫。這種方法稱直接分離法（或鳥槍法） 如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA（也叫cDNA）片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，那么，這個(gè)受體菌群體就構(gòu)成了這種生物的cDNA文庫。這種方法稱反轉(zhuǎn)錄法l 基因組DNA文庫的構(gòu)建鳥槍法：鳥槍法：( (直接分離法直接分離法) )cDNAcDNA文庫的構(gòu)建文庫的構(gòu)建mRNA

8、 反轉(zhuǎn)錄cDNA(互補(bǔ)DNA） DNA聚合酶雙鏈DNA反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法：基因重組基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA基因組基因組DNADNA文庫文庫cDNAcDNA文庫文庫基因組基因組DNADNA文庫與文庫與cDNAcDNA文庫的比較文庫的比較（3）如何從基因文庫中得到所需要的基因？依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì) 等特性。1、構(gòu)建基因組DNA文庫時(shí)，首先應(yīng)分離細(xì)胞的A、染色體DNA B、線粒體DNAC、總mRNA D、tRNA 2、目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關(guān)基因文庫的

9、描述正確的是A、某生物的全套基因就是一個(gè)基因文庫B、將含有某種生物不同的許多DNA片段，導(dǎo)入某個(gè)生物 體內(nèi)，則這個(gè)生物就是一個(gè)基因文庫C、含有一種生物所有基因的基因文庫叫做基因組文庫D、含有一種生物的一部分基因的基因文庫叫cDNA文庫AC2 2、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一項(xiàng)生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。PCR技術(shù) 原理： 前提： 原料 方式PCR擴(kuò)增儀DNA復(fù)制一段已知目的基因的核苷酸序列：以：以_方式擴(kuò)增，方式擴(kuò)增， 即即_（n n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）指數(shù)指數(shù)2 2n n模板DNA；DNA引物；四種

10、脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）；離子n 過程變性、退火、延伸三步曲變性：加熱至9095雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：冷卻至5560部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合延伸：加熱至7075以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新DNA鏈變性退火延伸1、在遺傳工程中，若有一個(gè)控制有利性狀的DNA分子片段為ATGTGTACAC，要使其數(shù)量增多，可用PCR技術(shù)進(jìn)行人工復(fù)制，復(fù)制時(shí)應(yīng)給予的條件是 雙鏈DNA分子為模板 ATGTG或TACAC模板鏈 四種脫氧核苷酸 四種核苷酸 DNA聚合酶 熱穩(wěn)定DNA聚合酶引物 溫度變化 恒溫A BC DD2、在基因工程中，把選出的目的基因（共10

11、00個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌嶺脫氧核苷酸是460個(gè)）放入DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是A.540個(gè) B.8100個(gè) C.17280個(gè)D.7560個(gè)Bv 3 、人工合成根據(jù)已知的氨基酸序列合成根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA DNA 蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測推測推測目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成1、在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是A、化學(xué)合成法 B、基因組文庫法C、cDNA文庫法 D、聚合酶鏈反應(yīng)2、下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是從

12、基因文庫中獲取目的基因 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 反轉(zhuǎn)錄法 通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成A B C DAD( (二二) )基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心核心（1 1）用一定的）用一定的_切切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出露出_。（2 2）用）用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，再加入適量處，再加入適量_，形成了一個(gè)重組，形成了一個(gè)重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性

13、末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同1.1.過程過程: :質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因限制酶處理限制酶處理一個(gè)切口一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口兩個(gè)切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶表表達(dá)達(dá)載載體體同一種同一種1.1.過程過程: :1. 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合所需的條件有 同一種限制酶 具有抗性基因的質(zhì)粒 RNA聚合酶 目的基因 DNA連接酶 四種脫氧核苷酸 ATP A BC DD2、基因表達(dá)載體的作用a、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代b、同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用思考：作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因?yàn)槟?/p>

14、的基因在表達(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2） 通過通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（3） 目的基因是否導(dǎo)

15、入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因（或做成目的基部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。3.3.基因表達(dá)載體的組成：基因表達(dá)載體的組成：它們有什么作用？a、目的基因b、啟

16、動(dòng)子c、終止子d、標(biāo)記基因位于基因的首端,是mRNA結(jié)合位點(diǎn)位于基因的末端,終止轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞1、（多選）一個(gè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建應(yīng)包括A目的基因 B啟動(dòng)子 C終止子 D標(biāo)記基因ABCD2、下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是A啟動(dòng)子是與RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，是起始密碼B啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，對(duì)mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用C標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因從而便于篩選D基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同而有所差別A三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法特點(diǎn):能感染雙子葉植物和祼子植物,對(duì)單子葉植物無感染能

17、力Ti質(zhì)粒的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到其染色體上轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞插入植物細(xì)胞染色DNA表達(dá)新性狀轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌（2）基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。（3）花粉通道發(fā) 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆螅ǚ坌纬傻幕ǚ酃苓€未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法: 顯微注射技術(shù)操作程序:提純含目的基因表達(dá)載體取受精卵顯微注射移植

18、到子宮受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法：Ca2+處理常用菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少過程：Ca2+處理大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA1、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是 A結(jié)構(gòu)簡單、操作方便 B繁殖速度快 C遺傳物質(zhì)含量少、簡單 D性狀穩(wěn)定、變異少2、基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌 枯草桿菌 支原體 動(dòng)植物細(xì)胞A B C DBD3、基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是A.人工合成基因 B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C.

19、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D.目的基因的檢測和表達(dá)C8. 采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的DNA序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中 將編碼毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)人細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)A B C DC( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達(dá)檢測表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測轉(zhuǎn)錄檢測分子雜交分子雜交翻譯檢測翻譯檢測抗原抗體雜交

20、雜交分分子子檢檢測測法法鑒定鑒定抗蟲鑒定抗蟲鑒定抗病鑒定抗病鑒定活性鑒定等活性鑒定等個(gè)體水平的鑒定知識(shí)延伸知識(shí)延伸DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù) 該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開，把單股的解開，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的DNA中的中的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的DNA或基因?；蚧?。DNA附著在膜上附著在膜上硝化纖維素硝化纖維素加探針加探針報(bào)告基因（含熒光素分子）報(bào)

21、告基因（含熒光素分子）變性變性DNA雜交雜交（如檢測（如檢測SARS病毒等）病毒等）abcd1.1.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。腸桿菌中生

22、產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。2.-2.-珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的-珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？尋根問底：1.1.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸

23、桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。2.-2.-珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的-珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？尋根問底：復(fù)習(xí)題1.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞有哪些方法?(試舉例說明)2.簡述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法3.根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理,你能分析出不能導(dǎo)入單子葉植物的原因嗎?若將一個(gè)抗病基因?qū)胄←溨?理論上講你應(yīng)該怎樣做?要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬?/p>

24、有的農(nóng)桿菌菌株都要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的的Vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上。上。4.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過鑒定和檢測才能知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是檢測受體細(xì)胞中是否有目的基因 檢測受體細(xì)胞中是否有致病基因

25、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA 檢測目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)A B C D（多選）人們利用基因工程的方法，用大腸桿菌生產(chǎn)人類胰島素，這一過程涉及到A.用適當(dāng)?shù)拿笇?duì)胰島素基因與運(yùn)載體進(jìn)行切割并連接B.把重組后的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增C.檢測重組DNA分子是否導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)并表達(dá)出性狀D.篩選出能產(chǎn)生胰島素的“工程菌” 下列哪項(xiàng)不屬于基因工程技術(shù)的步驟 A基因轉(zhuǎn)移 B基因擴(kuò)增C基因檢測 D基因表達(dá) 非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)RNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子終止子終止子基因的結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子啟動(dòng)子原核原核真核真核基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系n 過程變性、退火、延伸三步曲變性：加熱至9095雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：冷卻至5560部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合延伸：加熱至7075以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新DNA鏈變性退火延伸不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基