腫瘤分子診斷

1、腫瘤分子診斷服務(wù)介紹腫瘤分子診斷服務(wù)介紹2標(biāo)準(zhǔn)化用藥個(gè)體化用藥個(gè)體化用藥標(biāo)準(zhǔn)化用藥標(biāo)準(zhǔn)化用藥個(gè)體化用藥標(biāo)準(zhǔn)療法1標(biāo)準(zhǔn)療法2標(biāo)準(zhǔn)療法3腫瘤藥物與相關(guān)靶標(biāo)腫瘤藥物與相關(guān)靶標(biāo)4如何實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥？如何實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥？分子分型分子分型 藥物療效藥物療效目前的服務(wù)目前的服務(wù)目前的平臺目前的平臺目前的客戶目前的客戶腫瘤TaqMan-ARMs醫(yī)院感染性疾病測序健康管理公司新生兒篩查實(shí)時(shí)定量PCR研究所qPCR-HRM藥廠循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）保險(xiǎn)公司mRNA表達(dá)檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC)檢測基因多態(tài)性檢測體細(xì)胞基因突變檢測體細(xì)胞基因突變檢測EGFR, K-RAS, B-RAF，C-KIT8 qPCR-HRM

2、 qPCR-HRM（可用于血漿標(biāo)本檢測）（可用于血漿標(biāo)本檢測） Taqman-ARMS Taqman-ARMS（與國際獲批的技術(shù)相當(dāng)）（與國際獲批的技術(shù)相當(dāng)） DNA DNA測序（基因突變檢測的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)）測序（基因突變檢測的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)）9 所有定量所有定量PCRPCR儀均可使用。儀均可使用。 主要用于各類組織，包括手術(shù)、穿刺或鏡檢組織類。主要用于各類組織，包括手術(shù)、穿刺或鏡檢組織類。 2 2小時(shí)即可完成檢測小時(shí)即可完成檢測 試劑盒商業(yè)化程度高，臨床認(rèn)可程度高試劑盒商業(yè)化程度高，臨床認(rèn)可程度高 國內(nèi)已有試劑盒獲批國內(nèi)已有試劑盒獲批SFDASFDA10 qPCR-HRM qPCR-HRM技術(shù)是基

3、于高效穩(wěn)健的技術(shù)是基于高效穩(wěn)健的PCRPCR上的高分辨熔解曲線分析上的高分辨熔解曲線分析（High-Resolution Melting）技術(shù)，靈敏度可以達(dá)到技術(shù)，靈敏度可以達(dá)到1%-0.1%1%-0.1%，既能檢測已，既能檢測已知突變，也能檢測未知突變。知突變，也能檢測未知突變。 qPCR-HRMqPCR-HRM的突變檢測已獲國際多中心雙盲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（的突變檢測已獲國際多中心雙盲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（Journal of Journal of Molecular Diagnostics, Vol. 11, No. 6, November 2009Molecular Diagnostics, Vol. 11

4、, No. 6, November 2009）。實(shí)例圖：利用實(shí)例圖：利用HRM技術(shù)對技術(shù)對7個(gè)樣本分別進(jìn)行個(gè)樣本分別進(jìn)行EGFR（左圖）、（左圖）、KRAS（右圖）突變檢測，（右圖）突變檢測，紅色表示該樣本發(fā)生突變，藍(lán)色表示未突變，藍(lán)色橫直線為陰性對照。左圖顯示紅色表示該樣本發(fā)生突變，藍(lán)色表示未突變，藍(lán)色橫直線為陰性對照。左圖顯示2個(gè)樣個(gè)樣本發(fā)生了本發(fā)生了EGFR突變；右圖顯示突變；右圖顯示4個(gè)樣本發(fā)生了個(gè)樣本發(fā)生了KRAS突變。突變。EGFRKRAS11 血漿血漿EGFREGFR突變檢測：突變檢測： 18 18號外顯子：無突變號外顯子：無突變1919號外顯子：突變號外顯子：突變2020號外顯

5、子：無突變號外顯子：無突變2121號外顯子：無突變號外顯子：無突變附圖附圖主要特點(diǎn)：主要特點(diǎn)： 實(shí)現(xiàn)血漿中來自腫瘤的微量實(shí)現(xiàn)血漿中來自腫瘤的微量DNADNA的的突變檢測。突變檢測。 目前所做的臨床實(shí)驗(yàn)?zāi)壳八龅呐R床實(shí)驗(yàn)中，中，血漿血漿EGFREGFR檢測結(jié)果檢測結(jié)果與與其其手術(shù)標(biāo)本手術(shù)標(biāo)本之間的整體符之間的整體符合率合率符合率達(dá)到符合率達(dá)到91.25%91.25%。 是臨床上不能手術(shù)、也同時(shí)不愿穿是臨床上不能手術(shù)、也同時(shí)不愿穿刺患者的替代檢測方案；也可刺患者的替代檢測方案；也可 獲得獲得性耐藥進(jìn)行預(yù)先檢測。性耐藥進(jìn)行預(yù)先檢測。國際公認(rèn)的分子檢測金標(biāo)準(zhǔn)有明確的物價(jià)收費(fèi)實(shí)驗(yàn)流程較復(fù)雜，需要大型儀器

6、突變突變檢測技術(shù)之一檢測技術(shù)之一 DNADNA測序測序腫瘤類型腫瘤類型靶向藥物靶向藥物基因基因療效佳的情況療效佳的情況非小細(xì)胞肺癌易瑞沙（Iressa）特羅凱（Tarceva）EGFRKRASEGFR突變/KRAS野生 胃腸間質(zhì)瘤格列衛(wèi)（Gleevec）C-KitC-kit第11外顯子突變/PDGFR突變 結(jié)直腸癌愛必妥KRASBRAF野生型突變檢測項(xiàng)目列舉突變檢測項(xiàng)目列舉EGFR突變檢測突變檢測EGFR E19 / E21EGFR E19 / E21敏感突變敏感突變 適合使用適合使用TKITKI藥物治療藥物治療耐藥位點(diǎn)檢測耐藥位點(diǎn)檢測T790MT790MK-RAS突變檢測突變檢測BRAFNC

7、CNNCCN 2010年NCCN結(jié)直腸結(jié)直腸癌臨床實(shí)踐指南癌臨床實(shí)踐指南指出： K-ras基因?yàn)橐吧投瑫r(shí)具有BRAF V600E突變的患者，靶向EGFR抗體治療無效。腫瘤學(xué)臨床實(shí)踐指南（中國版）2010第一版藥物名稱藥物名稱檢測靶標(biāo)檢測靶標(biāo)檢測內(nèi)容檢測內(nèi)容檢測結(jié)果檢測結(jié)果預(yù)測內(nèi)容預(yù)測內(nèi)容吉非替尼/厄洛替尼EGFR基因突變野生型耐藥突變型敏感西妥昔單抗K-ras，B-raf基因突變野生型敏感突變型耐藥伊馬替尼C-Kit基因突變野生型耐藥突變型敏感基因多態(tài)性檢測與藥物代謝毒性(UGT1A1,CYP,DPD)2021-12-2519單核苷酸多態(tài)性（SNP）是最常見的基因變異至少至少1%1%的人群

8、的人群絕大多數(shù)人群絕大多數(shù)人群共有序列共有序列G to CG to CSNPSNP 位點(diǎn)位點(diǎn)變異的序列變異的序列最常見的基因多態(tài)性 SNP2021-12-2520為什么為什么 SNPs SNPs 重要重要? ?個(gè)體個(gè)體 1 1個(gè)體個(gè)體 2 2= SNP variations in DNA= SNP variations in DNASNPSNP標(biāo)志基因標(biāo)志基因 A A基因基因 B B基因基因 A ASNP SNP 可能使基因可能使基因 B B 產(chǎn)生變產(chǎn)生變異的蛋白質(zhì)分子異的蛋白質(zhì)分子2021-12-2521個(gè)體的個(gè)體的SNP SNP 譜譜SNP SNP 譜譜A ASNP SNP 譜譜B BSN

9、P SNP 譜譜C CSNP SNP 譜譜F FSNP SNP 譜譜E ESNP SNP 譜譜D D2021-12-2522SNP SNP 譜有助于確定藥物的療效和副作用譜有助于確定藥物的療效和副作用乳腺癌病人乳腺癌病人個(gè)體的個(gè)體的SNP SNP 譜可以分成不同的類型譜可以分成不同的類型SNP SNP 譜譜 A A對藥物有期望的反應(yīng)對藥物有期望的反應(yīng)對藥物沒有期望的反應(yīng)對藥物沒有期望的反應(yīng)SNP SNP 譜譜 A A的人對藥物的人對藥物有期望的反應(yīng)有期望的反應(yīng)SNP SNP 譜譜E ESNP SNP 譜譜 B BSNP SNP 譜譜 C CSNP SNP 譜譜D D藥物代謝與藥物代謝與SNP檢

10、測檢測化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除，通過其活性物質(zhì)對治療靶點(diǎn)的直接化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除，通過其活性物質(zhì)對治療靶點(diǎn)的直接攻擊而發(fā)揮作用，整個(gè)過程需要多種蛋白質(zhì)攻擊而發(fā)揮作用，整個(gè)過程需要多種蛋白質(zhì)/ /酶的共同參與和協(xié)同作用。酶的共同參與和協(xié)同作用。SNP SNP 主要是指在基因組水平上變異頻率大于主要是指在基因組水平上變異頻率大于1%1%的單核苷酸變異所引起的的單核苷酸變異所引起的DNADNA序列多序列多態(tài)性，多態(tài)性會導(dǎo)致不同個(gè)體體內(nèi)各種蛋白，酶活性的差異，因此導(dǎo)致藥物使用情態(tài)性，多態(tài)性會導(dǎo)致不同個(gè)體體內(nèi)各種蛋白，酶活性的差異，因此導(dǎo)致藥物使用情況的不同。況的不

11、同。膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（UGT1A1UGT1A1）UGT1A1*27(C686A)或UGT1A1*28(TA)7TAA: 野生型：6個(gè)TA UGT1A1*6(G211A)：使使UGT1A1UGT1A1的轉(zhuǎn)錄活性下降了三分之二。的轉(zhuǎn)錄活性下降了三分之二。導(dǎo)致對伊立替康的毒性增加。導(dǎo)致對伊立替康的毒性增加。FDA提示：UGT1A1的多態(tài)性-伊立替康伊立替康的毒性增加的毒性增加(6TA)此型的酶活性是野生型的此型的酶活性是野生型的4949 。25CYP19A1CYP19A1是芳香化酶的編碼基因，臨床研究已證實(shí)有著很大的影響是芳香化酶的編碼基因，

12、臨床研究已證實(shí)有著很大的影響作用。在接受芳香化酶抑制劑治療的乳腺癌患者中，攜帶作用。在接受芳香化酶抑制劑治療的乳腺癌患者中，攜帶CYP19A1CYP19A1基因基因rs4646rs4646（GTGT）突變患者的治療效果較無此突變的患者顯著）突變患者的治療效果較無此突變的患者顯著2-42-4（下圖）。（下圖）。CYP19A1 rs4646CYP19A1 rs4646（GTGT）SNPSNP是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制劑治是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制劑治療療效的有效預(yù)測指標(biāo)療療效的有效預(yù)測指標(biāo)。 如圖一項(xiàng)對乳腺癌患者的臨床研究顯示：如圖一項(xiàng)對乳腺癌患者的臨床研究顯示：CYP19A1CYP19A1基

13、因基因rs4646rs4646突變的患者使用芳香化突變的患者使用芳香化酶抑制劑藥物療效明顯優(yōu)于野生型患者酶抑制劑藥物療效明顯優(yōu)于野生型患者（p0.0001p0.0001）1 1。參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)1. Ian ES et al. N Engl J Med. 2003;384:2431-42.1. Ian ES et al. N Engl J Med. 2003;384:2431-42.2. Ramon C et al. Clin Cancer Res. 2008;14:811-6. 2. Ramon C et al. Clin Cancer Res. 2008;14:811-6. 3. Luna

14、rdi G et al. J Clin Oncol. 2009; 27: 555. 3. Lunardi G et al. J Clin Oncol. 2009; 27: 555. 4. Fasching PA et al. Breast Cancer Res Tr. 2008;112:89-4. Fasching PA et al. Breast Cancer Res Tr. 2008;112:89-98.98.基因表達(dá)檢測（基因表達(dá)檢測（mRNAmRNA表達(dá)）表達(dá)）(ERCC1BRCA1TUBB3TS)(ERCC1BRCA1TUBB3TS)相關(guān)腫瘤相關(guān)腫瘤藥物名稱藥物名稱檢測靶標(biāo)檢測靶標(biāo)檢

15、測內(nèi)容檢測內(nèi)容檢測結(jié)果檢測結(jié)果預(yù)測內(nèi)容預(yù)測內(nèi)容結(jié)直腸癌貝伐單抗VEGFRmRNA表達(dá)水平高療效好低療效差乳腺癌曲妥珠單抗HER-2FISH/mRNA表達(dá)水平高療效好低療效差肝癌索拉非尼pDGFRmRNA表達(dá)水平低療效好高療效差28靶向藥物靶向藥物項(xiàng)目名稱項(xiàng)目名稱樣本樣本結(jié)果結(jié)果療效關(guān)系關(guān)系曲妥珠單抗HER2乳腺癌（手術(shù)/穿刺）+陽性療效好-HER2HER2基因表達(dá)基因表達(dá)檢測檢測采用采用RT-PCRRT-PCR方法替代方法替代FISHFISH或免疫組化方法，臨床準(zhǔn)確率或免疫組化方法，臨床準(zhǔn)確率達(dá)達(dá)97%97%以上。以上。主要特點(diǎn)：主要特點(diǎn)：客觀，不用人為觀察。客觀，不用人為觀察。時(shí)間短，整個(gè)檢

16、測時(shí)間短，整個(gè)檢測6060分鐘左右完成。分鐘左右完成。高通量，一次可以檢測高通量，一次可以檢測6 6人份。人份。PDGFR 低表達(dá)患者的無進(jìn)展生存期和總生存期明顯長于高表達(dá)患者索拉菲尼檢測基因索拉菲尼檢測基因-PDGFR-PDGFR貝伐單抗檢測基因貝伐單抗檢測基因-VEGFR藥物名稱檢測靶標(biāo)檢測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達(dá)水平5-FU/培美曲賽TSmRNA表達(dá)水平紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達(dá)水平替莫唑胺MGMTmRNA表達(dá)水平阿霉素/表柔比星TOPOamRNA表達(dá)水平吉西他濱RRM1mRNA表達(dá)水平ERCC1ERCC1表達(dá)與鉑類

17、藥物療效相關(guān)表達(dá)與鉑類藥物療效相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)的臨床數(shù)據(jù) ERCC1ERCC1陰性患者，能從鉑類輔助化療中獲益陰性患者，能從鉑類輔助化療中獲益. .BRCA1/2BRCA1/2表達(dá)與鉑類藥物療效相表達(dá)與鉑類藥物療效相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)關(guān)的臨床數(shù)據(jù) BRCA1BRCA1過度表達(dá)過度表達(dá)鉑類耐藥的預(yù)測因子鉑類耐藥的預(yù)測因子 抗微管類藥物的敏感因子抗微管類藥物的敏感因子34 低低TS mRNA水平的腫瘤水平的腫瘤患者接受氟類化療的效患者接受氟類化療的效果較好，中果較好，中位生存期較位生存期較長。長。 TSTS低表達(dá)的患者對培低表達(dá)的患者對培美曲賽的療效好。美曲賽的療效好。TSTS高表達(dá)影響氟類和培美曲塞藥效

18、高表達(dá)影響氟類和培美曲塞藥效Shirota Y et al. J Clin Oncol. 2001;19:4298-304Shirota Y et al. J Clin Oncol. 2001;19:4298-304藥物名稱檢測靶標(biāo)檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預(yù)測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達(dá)水平高療效差低療效好5-FU/培美曲賽TSmRNA表達(dá)水平高療效差低療效好紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達(dá)水平高療效差低療效好替莫唑胺MGMTmRNA表達(dá)水平高療效差低療效好阿霉素/表柔比星TOPOamRNA表達(dá)水平高療效好低療效差吉西他濱RRM1mRNA表

19、達(dá)水平高療效差低療效好分子靶標(biāo)分類靶向藥物靶標(biāo)基因突變EGFR突變K-RAS突變B-RAF突變基因表達(dá)VEGFR表達(dá)pDGFR表達(dá)HER-2表達(dá)化療藥物靶標(biāo)基因表達(dá)ERCC1表達(dá)TS表達(dá)RRM1表達(dá)基因多態(tài)性UGT1A1多態(tài)性CYP19A1多態(tài)性DPD多態(tài)性藥物名稱靶標(biāo)檢測內(nèi)容化療藥物鉑類ERCC1，BRCA1mRNA水平，2項(xiàng)XRCC1， GSTP1， MRP2基因多態(tài)性，4項(xiàng)（女，6項(xiàng)）BRCA1(女)異環(huán)磷酰胺CYP2C9*3基因多態(tài)性，1項(xiàng)絲裂霉素NQO1基因多態(tài)性，1項(xiàng)依托泊苷TopomRNA水平，1項(xiàng)CYP3A4*4 ,MDR1基因多態(tài)性，2項(xiàng)紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱TUBB3

20、,STMN1mRNA水平，2項(xiàng)CYP8*3基因多態(tài)性，1項(xiàng)伊立替康UGT1A1*6, UGT1A1*28基因多態(tài)性，2項(xiàng)吉西他濱RRM1mRNA水平，1項(xiàng)CDA基因多態(tài)性，1項(xiàng)培美曲賽TSmRNA水平，1項(xiàng)靶向藥物吉非替尼/厄洛替尼EGFR (Exon19/20/21)基因突變，3項(xiàng)西妥昔單抗K-ras , B-raf基因突變，3項(xiàng)EGFRmRNA水平，1項(xiàng)貝伐單抗VEGFRmRNA水平，1項(xiàng)NSCLCNSCLC個(gè)體化用藥系統(tǒng)方案個(gè)體化用藥系統(tǒng)方案 遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC)是由DNA錯(cuò)配修復(fù)基因（MMR)發(fā)生基因突變導(dǎo)致的一種單基因的顯性遺傳疾病，又稱lynch綜合癥，發(fā)生基因異常

21、的個(gè)體其患發(fā)結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)約為60%。HNPCC實(shí)驗(yàn)室檢測流程目前已發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致人類HNPCC發(fā)生的MMR有MSH2、MLH1、MSH6、PMS1、PMS2，其中MSH2和MLH1基因的功能最重要，其突變占已發(fā)現(xiàn)突變的90%左右。39研究顯示， 約有86%-95%的HNPCC具有MSI特征， 而散發(fā)型大腸癌中只有16%。 MSI所產(chǎn)生的遺傳不穩(wěn)定性將加速惡性腫瘤的發(fā)生。1997年美國NCI (national cancer institution)將MSI確定為檢測和篩選HNPCC的重要方法之一，并推薦將BAT26、BAT25、D2S123、D5S346和D17S250 5個(gè)位點(diǎn)作為檢測HNPC

22、C的位點(diǎn)。40實(shí)驗(yàn)室檢測流程MSIMSI檢測檢測MLH1MLH1，MSH2MSH2，MSH6MSH6突變篩查突變篩查MLH1MLH1，MSH2MSH2，MSH6MSH6熱點(diǎn)突變檢測熱點(diǎn)突變檢測檢測名稱檢測名稱檢測技術(shù)檢測技術(shù)臨床意義臨床意義MSI（5個(gè)位點(diǎn)）PCR+片段分析法HNPCC風(fēng)險(xiǎn)評估明確是否檢測MMR突變MLH1,MSH2,MSH6基因突變檢測（35個(gè)外顯子）DNA測序HNPCC鑒別診斷確定突變位點(diǎn)，評估家族中高危個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)熱點(diǎn)突變檢測DNA測序確定家族中是否存在已知的突變檢測名稱檢測名稱標(biāo)本要求標(biāo)本要求MSI檢測病理蠟塊一份（或白片10片），外加5ml抗凝外周血，4度運(yùn)達(dá)MLH1,M

23、SH2,MSH6基因突變檢測病理蠟塊一份（或白片10片），常溫運(yùn)達(dá)熱點(diǎn)突變檢測5ml抗凝外周血，4度運(yùn)達(dá)腫瘤在變腫瘤在變We can look at tumors for changes at the DNA, RNA and protein levels. It certainly gives us a way of looking at what is happening inside a tumor, and thats very exciting. Dr. Gordon MillsChair Systems BiologyMD Anderson Cancer CenterHouston

24、, TxAs reported in“The Cancer Test” TIME (June 14, 2007)1869年 Aust Med J，Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到。2005年 N Engl J Med，Cristofanilli證實(shí)治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進(jìn)展生存期和總生存期的獨(dú)立預(yù)測因子。 循環(huán)腫瘤細(xì)胞指從實(shí)體瘤中脫離出來并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。循環(huán)腫瘤細(xì)胞指從實(shí)體瘤中脫離出來并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。原發(fā)腫瘤血管原發(fā)腫瘤血管生成侵潤生成侵潤侵入血管內(nèi)侵入血管內(nèi)侵入血管外侵入血管外(CTC)(CTC)血管內(nèi)增殖血管內(nèi)增殖(CTM)(CTM

25、)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移播散腫瘤細(xì)胞播散腫瘤細(xì)胞（DTCDTC）微轉(zhuǎn)）微轉(zhuǎn)移休眠灶移休眠灶循環(huán)腫瘤細(xì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞（胞（CTCCTC）循環(huán)腫瘤循環(huán)腫瘤微栓微栓（CTMCTM）凋亡的凋亡的CTCCTC侵潤侵潤腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞擴(kuò)增擴(kuò)增血管生成血管生成上皮間質(zhì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化（EMTEMT）間質(zhì)上皮間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化（METMET）轉(zhuǎn)移到骨轉(zhuǎn)移到骨髓和其他髓和其他器官器官從紅細(xì)胞和白細(xì)胞中富集惡性腫瘤細(xì)胞將惡性腫瘤細(xì)胞與紅細(xì)胞、白細(xì)胞、正常上皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等區(qū)分開來每每10mL10mL血液中可能僅含有幾個(gè)到幾十個(gè)循環(huán)血液中可能僅含有幾個(gè)到幾十個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞，而腫瘤細(xì)胞，而10mL10mL血液中含有的白細(xì)胞

26、約有血液中含有的白細(xì)胞約有1 1億個(gè)，紅細(xì)胞有億個(gè)，紅細(xì)胞有500500億個(gè)。億個(gè)。過濾法ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells8m孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細(xì)胞敏感性低梯度密度法腫瘤細(xì)胞和單核細(xì)胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細(xì)胞腫瘤細(xì)胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細(xì)胞有毒性免疫磁珠法免疫磁珠法腫瘤細(xì)胞表面抗原腫瘤細(xì)胞表面抗原EpCAMEpCAM與包繞著磁珠的特異性單與包繞著磁珠的特異性單抗相結(jié)合抗相結(jié)合CellSearchCellSearch細(xì)胞保存方法細(xì)胞保存方法長達(dá)長達(dá)9696小時(shí)小時(shí)實(shí)驗(yàn)室室間差異小實(shí)驗(yàn)室室間差異小EpCAMEpCAM的假陽性和假陰性的假陽性和假陰性90年代中期開始摸索捕獲、分析CTC的方法1999-2003 大量臨床實(shí)驗(yàn)建立CellSearch與CTC的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)2004 獲得美國