實驗性根尖周炎模型大鼠核因子

1、www.CRTER.org葉丹丹，等. 實驗性根尖周炎模型大鼠核因子B的表達(dá)實驗性根尖周炎模型大鼠核因子B的表達(dá)葉丹丹，王婷婷，董 明，金海威，牛衛(wèi)東(大連醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院口腔內(nèi)科，遼寧省大連市 116044)引用本文：葉丹丹，王婷婷，董明，金海威，牛衛(wèi)東. 實驗性根尖周炎模型大鼠核因子B的表達(dá)J.中國組織工程研究，2016，20(49):7431-7436.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.49.020 ORCID: 0000-0003-1778-6209(葉丹丹)文章快速閱讀：成功構(gòu)建大鼠實驗性根尖周炎并檢測核因子B的表達(dá)葉丹丹，女，1990年生，安徽

2、省青草鎮(zhèn)人，漢族，大連醫(yī)科大學(xué)在讀碩士，主要從事口腔內(nèi)科的研究。通訊作者：牛衛(wèi)東，博士，教授，大連醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院口腔內(nèi)科，遼寧省大連市 116044中圖分類號:R318文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B文章編號:2095-4344(2016)49-07431-06稿件接受：2016-09-06蘇木精-伊紅染色觀察根尖周炎病理特征，免疫組織化學(xué)方法檢測核因子B的表達(dá)根尖周炎模型左側(cè)下頜第1牙不做處理設(shè)為陰性對照右側(cè)下頜第1牙開髓術(shù)為實驗組開髓后1，2，3，4周分別取大鼠雙側(cè)下頜骨造模方法 文題釋義：根尖周炎：是指發(fā)生于根尖周圍組織的炎癥性疾病，又稱根尖周病，多為牙髓病的繼發(fā)病，主要由根管內(nèi)的感染通過根尖孔作用于

3、根尖周組織引發(fā)炎癥反應(yīng)，同時引起骨破壞的一類疾病。NF-B：作為一種分布和作用均十分廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，NF-B的激活不需要新翻譯出的蛋白進(jìn)行調(diào)控。因此，它可以在第一時間對有害細(xì)胞的刺激做出反應(yīng)。大多數(shù)的細(xì)菌可以結(jié)合細(xì)胞膜表面的受體，從而激發(fā)NF-B信號通路改變基因的表達(dá)。摘要背景：研究指出核因子B在人根尖周炎組織中mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常根尖周組織。目的：觀察核因子B在大鼠實驗性根尖周炎部位的表達(dá)。方法：取6周齡雄性SD 大鼠 20只，右側(cè)下頜第1磨牙建立根尖周炎模型為實驗組；左側(cè)下頜第1磨牙為正常對照組。分別于術(shù)后 1，2，3，4 周隨機取 5 只鼠，取下頜骨組織塊制作冰凍切片。

4、蘇木精-伊紅染色觀察根尖區(qū)組織炎癥的病理特征，免疫組織化學(xué)染色檢測核因子B 在大鼠根尖周炎組織中的表達(dá)與分布。 結(jié)果與結(jié)論：蘇木精-伊紅染色見實驗側(cè)下頜第1磨牙根尖周組織炎性浸潤，向周圍牙槽骨擴散蔓延；正常對照組未見病理表現(xiàn)；說明建模成功；免疫組織化學(xué)染色顯示，造模后 1，2，3，4 周，實驗組的根尖周炎癥區(qū)域中均可見核因子B呈陽性表達(dá)。從 1 周至 2 周其表達(dá)量增加，2 周時核因子B 的表達(dá)量呈現(xiàn)高峰，3 周開始降低，4 周時最低，各個時間點的表達(dá)差異均有顯著性意義(P < 0.05)；實驗組的陽性細(xì)胞數(shù)均高于正常對照組(P < 0.05)；結(jié)果表明，核因子B 的表達(dá)情況與根尖

5、周炎的進(jìn)程密切相關(guān)，提示核因子B 參與了根尖周炎的炎癥反應(yīng)過程。 關(guān)鍵詞：實驗動物；口腔損傷與修復(fù)動物模型；根尖周炎；NF-B；大鼠；炎癥模型；免疫組化；骨吸收；核轉(zhuǎn)錄因子；國家自然科學(xué)基金主題詞：NF-B ；牙；尖周炎；組織工程基金資助：國家自然科學(xué)基金項目(81171538)3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 kf23385083Expression of nuclear factor-kappa B in rat models of periapical periodontitisYe Dan-dan, Wang Ting-ting, Dong Ming, Ji

6、n Hai-wei, Niu Wei-dong (Department of Oral Medicine, School of Stomatology of Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China)AbstractBACKGROUND: mRNA expression level of nuclear factor-kappa B (NF-B) in periapical periodontitis has been shown to be significantly higher than that

7、 in normal periapical tissue. OBJECTIVE: To observe the expression of NF-B in rats with periapical periodontitis.METHODS: Twenty male Sprague-Dawley rats aged 6 weeks were enrolled to establish apical periodontitis model at the right mandibular first motar (experimental group), and the left mandibul

8、ar first motar as normal control group. Five rats were randomly selected at postoperative 1, 2, 3, and 4 weeks to make frozen sections of the mandibular tissue. The morphology of the periapical tissue was observed through hematoxylin-eosin staining, and the expression level and distribution of NF-B

9、were detected by immunohistochemical staining. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Hematoxylin-eosin staining showed that the apical periodontal tissue of the mandibular first molar at the right side had local inflammatory response and spread to peripheral tissues; while there was no pathological changes in

10、 the control group. (2) Immunohistochemistry results revealed that NF-B expression increased from the 1st week to 2nd week after surgery, and then went down at the 3rd week and reached the lowest point at the 4th week; moreover, the expression level at each time exhibited significant differences (P

11、< 0.05). The amount of NF-B-positive cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). (3) These findings suggest that the expression level of NF-B holds close correlation with the process of periapical periodontitis indicating that NF-B may pa

12、rticipate in the inflammatory reaction of periapical periodontitis. Subject headings: NF-kappa B; Tooth; Periodontitis; Tissue EngineeringFunding: the National Natural Science Foundation of China, No. 81171538Cite this article: Ye DD, Wang TT, Dong M, Jin HW, Niu WD. Expression of nuclear factor-kap

13、pa B in rat models of periapical periodontitis. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(49):7431-7436.Ye Dan-dan, Studying for masters degree, Department of Oral Medicine, School of Stomatology of Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, ChinaCorresponding author: Niu Wei-dong,

14、M.D., Professor, Department of Oral Medicine, School of Stomatology of Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China7433ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction根尖周炎是由多種細(xì)菌及其毒力因子入侵根尖周組織，引起組織炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致根尖周骨吸收和破壞的一類疾病1。NF-B(nuclear factor kappa-light- chain-enhancer

15、of activated B cells)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄蛋白因子，可以促進(jìn)多種細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中起重要作用?，F(xiàn)已證實核因子B的失控與癌癥、炎癥和自身免疫性疾病、感染性休克、病毒感染等均有較大關(guān)聯(lián)2-11。Crabtree等12對38位根尖周炎患者根尖周組織做RT-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)核因子B mRNA的表達(dá)明顯高于正常根尖周組織。核因子B作為一個關(guān)鍵的炎癥調(diào)控因子在慢性牙周炎的發(fā)展中也有一定作用。Arabaci 等13學(xué)者對臨床重度牙周炎患者牙齦組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，發(fā)現(xiàn)牙周炎患者牙周組織中核因子B活性明顯高于正常牙周組織。核因子B可以誘導(dǎo)炎性因子如腫瘤壞死因子

16、、白細(xì)胞介素1表達(dá)增加，這些物質(zhì)又可以作為激動劑進(jìn)一步作用于核因子B，使其活性更加增強，形成了核因子B活化的正反饋調(diào)節(jié)14，導(dǎo)致牙周炎癥的進(jìn)一步加重。Takashiba等15學(xué)者，從牙齦卟啉單胞菌提取脂多糖作用于人類單核細(xì)胞系后，運用凝膠遷移和RT-PCR 方法檢測核因子B的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)用脂多糖作用的人類單核細(xì)胞核因子B的表達(dá)量比正常人單核細(xì)胞核因子B 的表達(dá)增加。 Mukaida等16學(xué)者以脂多糖刺激體外培養(yǎng)的人牙齦成纖維細(xì)胞，并加入核因子B抑制劑TPCK，檢測白細(xì)胞介素8 mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)加入TPCK的牙齦成纖維細(xì)胞中白細(xì)胞介素8 mRNA的表達(dá)比未加入TPCK的牙齦成纖維細(xì)胞有所降低。

17、實驗以大鼠為研究對象，采用髓腔內(nèi)封入PBS棉球，建立大鼠根尖周炎動物模型，應(yīng)用蘇木精-伊紅染色、免疫組織化學(xué)染色方法，研究核因子B在根尖周炎中的表達(dá)。1 材料和方法 Materials and methods 1.1 造模動物及材料 實驗于2013年1月至2014年1月于大連醫(yī)科大學(xué)完成。6 周齡健康雄性SD大鼠20只，體質(zhì)量180-220 g，大連醫(yī)科大學(xué)SPF動物實驗中心提供。動物許可證號：SCXK(遼)2008-0002。1.2 構(gòu)建大鼠實驗性根尖周炎的動物模型 雄性SD大鼠20只采用小號球鉆于右側(cè)下頜第1磨牙牙合面近中窩行開髓術(shù)后，髓腔內(nèi)封入PBS棉球，采用進(jìn)口玻璃離子粘固劑封閉髓腔設(shè)

18、為實驗組；左側(cè)下頜第1磨牙為正常對照組。1.3 造模成功的檢測標(biāo)準(zhǔn) 實驗側(cè)下頜第1磨牙根尖周組織局部炎性滲出，形成漿液性根尖周炎(圖1A)。隨炎癥進(jìn)展，炎性浸潤向周圍牙槽骨擴散蔓延，形成局限性牙槽骨骨髓炎(圖1B)。正常對照組未見病理表現(xiàn)。AB圖1 低倍鏡下右側(cè)下頜第1磨牙(實驗組)蘇木精-伊紅染色結(jié)果(標(biāo)尺=500 m)Figure 1 Hematoxylin-eosin staining of the right mandibular first motar (experimental group) at low magnification (scale bar=500 m)圖注：圖A可見

19、根尖周組織局部炎性滲出(紅框部分)；B可見形成局限性牙槽骨骨髓炎(黃框部分)。1.4 制作冰凍切片 常規(guī)條件飼養(yǎng)，分別于術(shù)后 1，2，3，4周4個時間點隨機各取 5 只鼠，乙醚麻醉后，進(jìn)行多聚甲醛心內(nèi)固定，剖取下頜骨，中線處縱行分離，修整為包含第1，2，3磨牙的約1 cm×1 cm×1 cm正方形骨組織塊，EDTA脫鈣，低溫液氮冷凍，OCT包埋，平行于牙長軸矢狀面，制作冰凍切片。1.5 蘇木精-伊紅染色 冰凍切片0.02 mol/LPBS漂洗，蘇木精染色12 min，1%鹽酸乙醇分化1-3 s，流動水稍作沖洗，60 溫水返藍(lán)，伊紅染色25 s，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固，光

20、學(xué)顯微鏡觀察。1.6 免疫組織化學(xué)染色 從-80 中取出切片后放入 37 恒溫培養(yǎng)箱烘干至少60 min；PBS漂洗3次，每次10 min；用體積分?jǐn)?shù)75%甲醇和體積分?jǐn)?shù)3%過氧化氫配置的溶液固定組織1 h；PBST溶液漂洗組織3次，10 min/次； 滴加正常山羊血清封閉液室溫孵育1 h；核因子B多克隆抗體(1250)(AB20133b，Sangon Biotech)4 冰箱過夜孵育；PBST漂洗3次，10 min/次；滴加生物素化抗，室溫孵育1 h；PBST漂洗3次， 10 min/次；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，作用時間50 min；PBS漂洗2次，10 min/次，TBS漂洗2次，

21、 5 min/次；DAB發(fā)色：加A液一滴于1 000 L去離子水中，吹打混勻，逐次加入一滴B液與C液，再次吹打混勻。顯微鏡下對發(fā)色結(jié)果進(jìn)行實時觀察，發(fā)色結(jié)束即刻終止；TBS漂洗2次，每次10 min；PBS漂洗2次，10 min/次；直接蘇木精復(fù)染：蘇木精染色3 min，1%鹽酸乙醇分化 1-3 s，流水沖洗30 min；梯度乙醇脫水，3 min/次；二甲苯中潔凈；封固，拍照。PBS代替一抗，作為陰性對照組。1.7 主要觀察指標(biāo) 以冰凍切片上下頜第1磨牙的近中牙槽骨區(qū)域(n=15)為計數(shù)對象，采用OLYMPUS (BX-43)光學(xué)顯微鏡觀察免疫組織化學(xué)結(jié)果并攝片，計算下頜第1磨牙根尖病變區(qū)核因

22、子B陽性細(xì)胞總數(shù)(目鏡10倍，物鏡40倍，單位：個/3×104 m2)，每個時間點每只動物隨機選取3張非連續(xù)切片進(jìn)行計數(shù)，取其均值作為一個時間點的陽性細(xì)胞數(shù)。 1.8 統(tǒng)計學(xué)分析 采用 SPSS16.0 For Windows 軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用t 檢驗分析不同時間點核因子B的表達(dá)情況。計量數(shù)據(jù)用±s表示。P < 0.05 為差異有顯著性意義。 2 結(jié)果 Results2.1 造模成功動物數(shù)量及過程 納入動物20只，無死亡，進(jìn)入結(jié)果分析數(shù)量為20只。造模動物流程圖見圖2。2周5只3周5只1周5只取雙側(cè)下頜骨行蘇木精-伊紅染色及免疫組織化學(xué)染色右側(cè)下頜第

23、1磨牙行開髓術(shù)；左側(cè)下頜第1磨牙不做任何處理設(shè)為對照20只雄性6周齡SD大鼠隨機分組4周5只圖2 根尖周炎動物模型的制作流程圖Figure 2 Flow chart of establishing the rat model of periapical periodontitis2.2 模型創(chuàng)新性/材料、方法的改進(jìn) 對SD 大鼠右側(cè)下頜第1磨牙采用髓腔內(nèi)封入浸有PBS的無菌小棉球，并用玻璃離子黏固劑封閉髓腔的方法造根尖周炎模型。2.3 模型更接近人類或臨床實踐/模型穩(wěn)定性 造模方法簡單易行，模擬臨床上由無菌性異物刺激引發(fā)的根尖周炎模型，此模型穩(wěn)定性強，可重復(fù)性高。2.4 蘇木精-伊紅染色結(jié)果

24、術(shù)后1-4周實驗組各時間點的蘇木精-伊紅染色結(jié)果見圖3。術(shù)后1周，可見實驗側(cè)根尖周炎病變范圍較小，漿液性滲出伴隨血管擴張，形成炎性細(xì)胞浸潤灶，以淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主(圖3A)。 DCBA AB圖3 右側(cè)下頜第1磨牙(實驗組)1-4周蘇木精-伊紅染色結(jié)果( 所示為中性粒細(xì)胞， 所示為淋巴細(xì)胞， 所示為巨噬細(xì)胞，標(biāo)尺= 50 m) Figure 3 Hematoxylin-eosin staining of the right mandibular first motar (experimental group) at postoperative 1-4 weeks (scale b

25、ar=50 m)圖注：圖中A可見根尖周炎病變范圍較小，形成炎性細(xì)胞浸潤灶，區(qū)域內(nèi)少量炎癥細(xì)胞浸潤；圖 B可見根尖周炎癥區(qū)域增大，炎性浸潤含有大量中性粒細(xì)胞浸潤；圖 C、D 可見病灶區(qū)淋巴細(xì)胞大量浸潤。EDCBA 圖4 右側(cè)下頜第1磨牙(實驗組)根尖組織核因子B 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(標(biāo)尺=50 m) Figure 4 Immunohistochemical staining of nuclear factor-kappa B in the periapical tissue of right mandibular first motar (experimental group)(scale b

26、ar=50 m)圖注：圖 A為術(shù)后1周染色結(jié)果，可見少量核因子B陽性細(xì)胞，胞漿或胞核呈棕黃色深染；圖 B為2周，可見大量核因子B陽性細(xì)胞，紅色箭頭所指即為核因子B陽性細(xì)胞；圖C為3周，可見核因子B陽性細(xì)胞逐漸減少；圖D為4周，可見核因子B陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)量最低。圖a，b，c，d 中標(biāo)尺=20 m。圖E為正常根尖周組織核因子B 免疫組化染色結(jié)果(標(biāo)尺= 50 m)，可見正常根尖周組織中少量核因子B陽性細(xì)胞；圖i中標(biāo)尺=20 m。706050403020100核因子B陽性細(xì)胞數(shù)1周 2周 3周 4周實驗組正常對照組圖5 核因子B 陽性細(xì)胞在根尖周組織中的表達(dá) (±s，n=15) Figur

27、e 5 Expression of nuclear factor-kappa B-positive cells in the periapical tissue圖注：與正常對照組比較，aP < 0.05；與1周比較，bP < 0.05；與2周比較，cP < 0.05。表1 核因子B陽性細(xì)胞在根尖周組織中的表達(dá)(±s，n=15)Table 1 Expression of nuclear factor-kappa B-positive cells in the periapical tissue表注：與正常對照組比較，aP < 0.05；與1周比較，bP <

28、 0.05；與2周比較，cP < 0.05。時間實驗組正常對照組1周34.00±3.12a15.70±3.65 2周59.00±6.76ab15.70±3.65 3周45.44±7.50abc15.70±3.65 4周32.00±5.03a15.70±3.65術(shù)后2周可見根管內(nèi)牙髓壞死，根尖周炎癥區(qū)域增大，炎性浸潤灶含有大量中性粒細(xì)胞浸潤(圖3B)。術(shù)后3周(圖3C)到4周(圖3D)，病灶區(qū)淋巴細(xì)胞大量浸潤。2.5 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 術(shù)后 1-4 周，在實驗組(圖4A-D)的根尖周滲出液的炎癥區(qū)域可見核因

29、子B呈陽性表達(dá)，主要位于中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞中，細(xì)胞圓形或橢圓形，胞漿或胞核呈棕黃色深染，中性細(xì)胞為單核或多核。實驗組從1周至2周，核因子B 表達(dá)量增加，2周時核因子B的表達(dá)量呈現(xiàn)高峰，3周時開始降低，4周時核因子B陽性細(xì)胞表達(dá)量最低。正常對照組可見少量 核因子B陽性細(xì)胞(圖4E)。2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗組從1周至2周，核因子B表達(dá)量增加，2周時核因子B的表達(dá)量呈現(xiàn)高峰，3周開始降低，4周時核因子B陽性細(xì)胞表達(dá)量最低。各個時間點的表達(dá)差異有顯著性意義(P < 0.05)，見表1及圖5。3 討論 Discussion國內(nèi)外對于建立根尖周炎的動物模型因?qū)嶒災(zāi)康摹⒎椒皟?nèi)容的不同采用不同的動

30、物品種和不同的造模方法。實驗動物的選擇主要有猴、狗及大鼠等。猴的實驗成本較高，抓捕困難，應(yīng)用較少。狗的牙弓排列和生理特點等與人類相似，費用較低，較多應(yīng)用于評價根管治療藥物、充填材料及治療方法等的優(yōu)劣。大鼠價格低廉，易飼養(yǎng)，其第1磨牙的形態(tài)和人類第1磨牙極為接近，頜骨骨密度及鈣化程度較低，抗感染力弱，炎癥進(jìn)展較快，但根管狹小，一般用于根尖周炎的發(fā)病機制研究。造模方法上，主要分為髓腔直接暴露法17、封菌法及封脂多糖棉球等18-19。實驗參照以往的造模方法，在SD大鼠第1磨牙開髓后直接封入PBS小棉球并用玻璃離子封固，構(gòu)成異物刺激源，用蘇木精-伊紅染色方法觀察病理過程，發(fā)現(xiàn)與以往研究的大鼠根尖周炎的

31、病理進(jìn)程一致。該方法減少了使用菌類感染進(jìn)行造模處理帶來的誤差和操作不便，節(jié)約了實驗成本，重復(fù)性強，穩(wěn)定性好。該模型很好地復(fù)制了人類根尖周炎的病理特征，具有一定的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)意義。核因子B 是一種分布和作用均十分廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，能與輕鏈基因和免疫蛋白的增強子Kb序列特異結(jié)合20-21。分為兩大類22：一類含有RelA (P65)、Rel B和cRel，與轉(zhuǎn)錄活化有關(guān)；另一類含有P50(核因子B1)和P52(核因子B2)，負(fù)責(zé)結(jié)合DNA和進(jìn)行核移位。目前最常見的 核因子B二聚體是p65與p50組成的異二聚體。p50是DNA結(jié)合的部位。p65可促進(jìn)p50與DNA的結(jié)合，進(jìn)而增強核因子B的轉(zhuǎn)錄活性

32、，引發(fā)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)。未經(jīng)外界刺激時，核因子B 處于靜止?fàn)顟B(tài)，此時由于其受I-B的抑制，所以不具備活性，而當(dāng)外界給予 核因子B刺激時，IKK 可以對I-B 磷酸化，使得核因子B的核定位信(nuclear localization signal，NLS)暴露。核因子B游離后可迅速向胞核中移位，結(jié)合B的特異性序列，使得相關(guān)基因的核轉(zhuǎn)錄得以誘導(dǎo)。大量的關(guān)于核因子B抑制劑的研究表明，可以通過抑制蛋白激酶；p65乙?；种苿?；細(xì)胞薄膜的小肽；蛋白酶體抑制劑；I-B 蛋白化阻斷劑及阻止核因子B 與 DNA 連接，來抑制核因子B 的活化23-25。吡咯烷二硫代氨基甲酸酯對于核因子B有特

33、別的抑制作用，可在活化通道的不同水平抑制核因子B，如對核因子Bp65亞單位進(jìn)行抑制，對I-B的降解進(jìn)行抑制從而減少核因子B的核移位26。Muià等27學(xué)者采用建立大鼠牙周炎模型，于大鼠的腹腔中注入核因子B抑制劑PDTC(10 mg/kg/日)后，發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶以及蛋白質(zhì)氧化損傷的指標(biāo)硝基酪氨酸的表達(dá)量明顯降低，牙周炎癥得到了明顯的抑制。 本研究主要檢測核因子B在大鼠根尖周炎中的表達(dá)情況，研究結(jié)果顯示核因子B陽性細(xì)胞在大鼠實驗性根尖周炎中表達(dá)明顯高于正常組，在2周時核因子B陽性細(xì)胞表達(dá)呈峰值，且表達(dá)主要集中在中性粒細(xì)胞，說明核因子B可能在誘導(dǎo)根尖周組織的急性炎癥過

34、程中起著重要作用，并在炎癥發(fā)展的初期1周及晚期3周、4周均檢測出核因子B的表達(dá)，說明其也參與著慢性炎癥反應(yīng)。致謝：感謝導(dǎo)師的細(xì)心指導(dǎo)及同門師妹的幫助。作者貢獻(xiàn)：實驗的實施及評估均由第一作者完成。利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章內(nèi)容不涉及相關(guān)利益沖突。倫理問題：實驗動物在戊巴妥納麻醉下進(jìn)行所有的手術(shù)，并盡一切努力最大限度地減少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章出版前已經(jīng)過CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。文章外審：文章經(jīng)國內(nèi)小同行外審專家雙盲外審，符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：第一作者對研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計算機數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已按照有關(guān)

35、規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。4 參考文獻(xiàn) References1 Kakehashi S, Stanley H, Fitzgerald R. The effect of surgical exposures of d-entalpulps in germ-free and conventional laboratory rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol.1965;20(3): 340-349. 2 Karin M, Lin ANF-kappa B at the crossroads of

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