黃芩總黃酮提取技術(shù)及其抑菌活性研究

1、黃芩總黃酮提取技術(shù)及其抑菌活性研究【摘要】 目的研究黃芩中的黃酮提取方法和抗菌活性。方法利用超聲波技術(shù)通過正交實(shí)驗(yàn)提取黃芩中的黃酮，杯碟法對(duì)其進(jìn)行抗菌活性的研究。結(jié)果超聲波最佳的提取條件為功率235 W，60%乙醇，料液比為120，提取時(shí)間為9 min，黃酮提取率為10.35%。該提取液對(duì)金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉都有明顯的抑菌效果，最低抑菌濃度分別為：1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小殺菌濃度為：1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。結(jié)論超聲波技術(shù)是提取黃芩黃酮的高效方法，黃芩具有較強(qiáng)的抗菌活性。 【關(guān)鍵詞】

2、 超聲波提取 黃芩 黃酮 抑菌活性黃芩Scutellaria baicalensis Georgi為常用中藥之一，是唇形科植物黃芩的干燥根1。其有效成分主要為黃酮類化合物。據(jù)報(bào)道，黃芩黃酮是一類生物活性較強(qiáng)的天然產(chǎn)物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、降血壓等作用2，3。超聲波具有加速藥材中有效成分溶解、縮短提取時(shí)間、提高有效成分的提取率等優(yōu)點(diǎn)4，因此，本文通過正交實(shí)驗(yàn)探討超聲波提取黃芩黃酮的最佳提取條件，為大規(guī)模高效生產(chǎn)黃芩黃酮提供了有力的理論依據(jù)。黃芩黃酮的體外抗菌的研究較少，本研究將最佳提取條件下的黃酮提取液對(duì)一些細(xì)菌和真菌進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn)，旨在開發(fā)一種天然的抑菌劑，并為臨床用藥提供

3、理論依據(jù)。1 材料黃芩購于湖南長沙康爾佳藥店，粉碎過40目篩，80烘干備用。蘆丁對(duì)照品購于中國上海醫(yī)藥化學(xué)試劑公司；供試菌種金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉由本實(shí)驗(yàn)室保存并培養(yǎng)。2 方法2.1 提取方法超聲波提取法：稱取黃芩粉5.0 g，采用L9（34）按表1方法進(jìn)行超聲波提取，提取液過濾，合并濾液，定容至100 ml，搖勻備用。表1 因素水平（略）對(duì)比實(shí)驗(yàn)：煎煮法：稱取黃芩粉5.0 g，加水100 ml，浸泡30 min，煮沸后，文火煎60 min，過濾，共煎煮兩次，合并濾液，定容至100 ml，搖勻備用。連續(xù)回流提取法：稱取黃芩粉5.0 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流

4、90 min，過濾，共提取兩次，合并濾液，定容至100 ml，搖勻備用。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取在105下干燥恒重的蘆丁對(duì)照品10 mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10 ml使之成為濃度為1 mg·ml-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為儲(chǔ)備液備用。量取上述溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分別加水至3 ml，加5%的亞硝酸鈉溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸鋁溶液0.5 ml，搖勻，放置6 min，后加5%的氫氧化鈉溶液2.5 ml，混勻，放置15 min后蒸餾水定容10 ml，用紫外分光光度計(jì)在510 nm處測(cè)其吸光度，得到回歸方程為：A9

5、.933 9C0.001 73（R2=0.997 5）。2.3 黃芩黃酮的抑菌實(shí)驗(yàn)采用杯碟法測(cè)定其抑菌作用，取濃度106107CFU/ml的各種待試菌懸液0.2 ml，與相應(yīng)滅菌培養(yǎng)基15 ml混合制成混菌平板，凝固后，在平板上等距離放入4個(gè)滅菌牛津杯，每個(gè)菌設(shè)置3個(gè)重復(fù)，一個(gè)無菌生理鹽水為對(duì)照，取0.1 ml黃酮提取液加入牛津杯中，細(xì)菌37，真菌28培養(yǎng)1824 h后，移去牛津杯，量取抑菌圈直徑，直徑越大抗菌活性越強(qiáng)。2.4 最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定用無菌水將黃芩黃酮提取液稀釋，終濃度分別為4，2，1，0.5，0.25 mg·ml-1。取2 ml提取稀釋

6、液至15 ml培養(yǎng)基，混勻后，倒入平板，凝固后加入100 l 106107 CFU/ml的菌液，涂布均勻，放至37/28培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度即MIC。培養(yǎng)48 h后，菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度為MBC。表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）利用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化黃芩黃酮提取條件結(jié)果（見表2），各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響順序?yàn)镃>A>B>D，即乙醇濃度對(duì)黃酮提取率的影響效果最為顯著，其次是超聲波功率。最佳提取條件為A3B3C2D3，即在功率為235 W，料液比為120，60%乙醇，提取時(shí)間為9 min條件下黃芩提取液

7、黃酮含量最高。以該最佳提取條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，黃芩黃酮提取率為10.35%，RSD0.70%（n6），因此該最佳提取條件是可行的。2.5 提取方法的比較結(jié)果見表3。由表3可知，超聲波提取方法的提取率明顯高于其它兩種方法，且提取時(shí)間最短，提取溶劑用量最少。表3 不同的提取方法與黃酮含量的關(guān)系（略）2.6 抑菌圈的確定結(jié)果見表4。由表4可以看出黃芩黃酮提取液對(duì)金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉都有較強(qiáng)的抑菌效果。而且對(duì)細(xì)菌的抑制效果強(qiáng)于真菌。表4 黃芩黃酮提取液的抑菌效果（略）2.7 最低抑菌濃度和最低殺菌濃度的確定結(jié)果見表5。由表5可知，黃芩黃酮對(duì)金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲

8、霉、青霉的最低抑菌濃度分別1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小殺菌濃度為1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。表5 黃芩黃酮最低抑菌濃度和最小殺菌濃度（略）3 討論 目前，黃芩總黃酮的提取方法有水煎煮法、乙醇提取法、超聲波法、超濾法、微波提取法、高速逆流色譜法、亞臨界水提取法等多種方法5。本實(shí)驗(yàn)用水煎煮法、乙醇回流提取法、超聲波提取法比較黃芩總黃酮的提取率，結(jié)果表明，超聲波提取法的效率最高，達(dá)10.35%，提取時(shí)間最短。黃酮類化合物是藥用植物的一大類有效成分，具有多種生物活性，主要的作用之一是抑菌或殺菌。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩黃酮對(duì)真菌的有一定的抑制作用，是一種天然的抑菌劑，有望用于食品保藏，抗菌消炎等，為黃芩的綜合利用開辟了新的途徑?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1宋雙紅,張媛.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地黃芩中黃酮化合物的含量J.中國中藥雜志,2006,31(7):598.2關(guān)曉燕,楊 潔.黃芩藥理研究概況J.中國醫(yī)藥信息,2006,23(4):21.3姚干,何宗玉,方積年.黃芩總黃酮提取及純化工藝的研究J.中成藥,2006,28