(精編資料推薦)實(shí)驗(yàn)六淀粉酶的專一性和溫度pH激動(dòng)劑抑制劑對(duì)酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)六淀粉酶的專一性和溫度、pH、激活劑及抑制劑對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證型目的和要求1. 通過本實(shí)驗(yàn)觀察、驗(yàn)證酶的專一性和溫度、pH、激動(dòng)劑及抑制劑對(duì)酶活性的影響。2. 熟悉淀粉及其酶解產(chǎn)物的特殊顯色方法；電熱恒溫水浴的使用。3. 了解唾液淀粉酶的收集與預(yù)處理。原理酶具有高度專一性，一種酶只能催化一種或一類底物發(fā)生反應(yīng)，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。當(dāng)?shù)矸郾坏矸勖笍氐姿鉃檫€原性麥芽糖和葡萄糖時(shí)，能使班氏試劑的 Cu2+ 還原成 Cu1+，生成磚紅色 Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受溫度、 pH、激動(dòng)劑及抑制劑、酶濃度以及作用時(shí)間等多種因素影響，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。

2、不同程度的水解糊精可與碘反應(yīng)生成紫色、棕色或紅色絡(luò)合物。通過上述特征性反應(yīng)，并以蔗糖等作對(duì)照，便可觀察、驗(yàn)證淀粉酶是否具有專一性以及它的催化活性是否受到影響。操作方法一、唾液淀粉酶的收集與處理1. 制備唾液實(shí)驗(yàn)者先將痰咳盡， 用自來水漱口， 以清除口腔內(nèi)食物殘?jiān)?再在口腔內(nèi)含蒸餾水約 15ml ，并作咀嚼咕漱運(yùn)動(dòng)， 3 分鐘后吐入墊有兩層經(jīng)潤(rùn)濕處理的脫脂紗布的漏斗內(nèi)，過濾于小燒杯中備用，為與下面稀釋唾液相區(qū)別，此稱制備唾液。2. 煮沸唾液取上述唾液約2ml ，盛入 1 中號(hào)試管中 , 置沸水浴煮沸5 分鐘備用。3. 稀釋唾液調(diào)整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8 、37和既無激動(dòng)劑又無抑制劑條

3、件下，作用 5min，水解淀粉至紅色糊精為宜。具體做法是取12 凹白瓷反應(yīng)板一塊，按下列步驟操作：第 1 排每凹各加1 滴制備唾液，12、 13、 14 凹分別加生理鹽水1、 2、 3 滴，用滴管采用抽吸法，由稀到濃（1412）小心混勻各凹，勿使濺入相鄰凹中。每混勻一凹便取其1 滴放入同列的 2 排凹中，剩余稀釋唾液應(yīng)全部放回原凹中。在盛有不同稀釋度唾液的第2 排各凹中，均加入4 滴緩沖液（ pH6.8 ），2 滴 1%的淀粉液和 2 滴蒸餾水，用混勻法充分混勻，置37下 5min。在第 2 排各凹中加I 液一滴，混勻，觀察比較各凹顏色，以淺棕-紅色對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋3ml 制備唾

4、液備用。二、唾液淀粉酶的專一性以及溫度、pH、激活劑和抑制劑對(duì)唾液淀粉酶活性影響的觀察1（一）取試管3 支編號(hào)，按下表1 操作表 1唾液淀粉酶專一性的實(shí)驗(yàn)觀察試劑pH6.8 緩沖1淀粉溶1蔗糖制 備 唾煮沸唾液液液溶液液試管120 滴10 滴5 滴220 滴10 滴5 滴320 滴10 滴5 滴將上述各管混勻后，置 37水浴中保溫10 分鐘，然后每管加入班氏試劑20 滴，再放入沸水浴中煮沸約15 分鐘，觀察各管顏色反應(yīng)，并說明原因。（二）溫度影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察1.取試管 3支編號(hào)，按下表2 操作：表 2溫度影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察管號(hào)123試劑1.pH6.8緩沖液20 滴20 滴20 滴2.

5、1 淀粉溶液10 滴10 滴10 滴3. 預(yù)熱 5min37水浴沸水浴冰浴4. 直接加入稀釋唾5 滴5 滴5 滴液，立即混勻、計(jì)時(shí)5. 保溫 10min37水浴沸水浴冰浴2.將一、二管移入冰水浴中，待各管溫度一致后速向各管加入碘液1 滴，混勻后觀察各管顏色的區(qū)別，并說明溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響。四、 pH 影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察1. 取試管3 支編號(hào)，按下表3 操作：表 3pH 影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察pH4.0 緩沖液 pH6.8 緩沖pH8.0 緩沖1淀粉溶稀釋唾液液液液試管 120 滴10 滴5 滴試管 220 滴10 滴5 滴試管 320 滴10 滴5 滴2.將上述各管混勻后，置 37水浴中

6、保溫 10 分鐘，然后每管加入碘液 1 滴，混勻后觀察各管顏色的區(qū)別，并說明 pH 對(duì)酶促反應(yīng)的影響。2五、激動(dòng)劑和抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察1. 取試管 4 支編號(hào)，按下操作：表 4 激動(dòng)劑和抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察pH 6.81 淀粉蒸餾水0.911稀 釋 唾緩沖液溶液NaClCuSO4Na2SO4液120 滴10 滴10 滴5 滴220 滴10 滴10 滴5 滴320 滴10 滴10 滴5 滴420 滴10 滴10 滴5 滴2. 將上述各管放入 37水浴中保溫 10 分鐘怎么減肚子 ，然后每管加入碘液 1 滴，混勻后觀各管顏色的區(qū)別，并說明激動(dòng)劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)的影響。注意事項(xiàng)1.反

7、應(yīng)試管應(yīng)清洗干凈，不同酶液、試劑及其滴管不能交叉混用；2.使用混合唾液，或通過預(yù)試選出合適的唾液稀釋度，效果更為顯著。試劑和器材一、器材1. 滴管、燒杯、試管（架）及試管夾。2. 恒溫水浴箱與水浴鍋。3. 脫脂棉、漏斗及紗布。4. 白瓷反應(yīng)盤二、試劑1.1 淀粉稱取淀粉1g，岳陽(yáng)家政 加少量水調(diào)成糊狀，加入煮沸的0.3 NaCl 溶液至 100m1。2.1 蔗糖溶液3. 班氏試劑A 液：取檸檬酸鈉 173，無水碳酸鈉 100，加水 600ml ，加熱溶解，冷卻后稀釋至 850ml； B 液：取結(jié)晶硫酸銅（ CuSO4· 5H2O） 17.3 溶于 100ml 預(yù)熱的蒸餾水中，冷卻后加水至 150ml。將 A 液緩慢倒入 B 液中混勻置試劑瓶備用。4. 碘液：稱取碘 4g、碘化鉀 6g 溶于 l000ml 蒸餾水中，置棕色瓶?jī)?nèi)貯存?zhèn)溆谩?. 各種 pH 緩沖液3 pH6.8 緩沖液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 772ml ，0.1mol/L 怎么減肚子 檸檬酸溶液 228ml混合即成。 pH4.0 緩沖液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 385.5ml ， 0.1mol/L 檸檬酸溶液 614.5ml 混合即成。 pH8.0 緩沖液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 972ml ，0.1