人Human白細(xì)胞介素

1、人（Human）白細(xì)胞介素-2 （IL-2 ） ELISA 檢測試劑盒使用方法用途:人IL-2 ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細(xì)胞上清液及各種體液 中的IL-2。本試劑盒可以檢測天然和重組的IL-2。本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。試驗原理：人IL-2試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ ELISA）.已知IL-2濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃 度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-2和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-2的濃

2、度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8 C保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：800pg/ml1 瓶（ 0.6ml）1 瓶（0.3ml）按說明書進(jìn)行稀稀空白對照1 瓶（1.0ml）1 瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1 瓶（5ml）1 瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗IL-2抗體1 瓶（6ml）1 瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1 瓶（10ml）1 瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1 瓶（60ml）1 瓶（30ml）按說明書進(jìn)行稀釋底物A1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即

3、用型底物B1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型終止液1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型自備材料1. 蒸餾水。2. 加樣器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。3. 振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1. 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒有實驗室可完全保證此血制品不會傳染 肝炎、AIDS或其它傳染病，依據(jù)當(dāng)?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。2. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。3. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。4. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作

4、注意事項1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物 A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7. 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。 避免用手接觸， 有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取0D值。&am

5、p; 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、 血清-操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000x g 離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、 血漿-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000 x g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液-1000 x g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 保存如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 C保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37C或更高的

6、溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按F表中進(jìn)行:800 pg/ml（6號標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。400 pg/ml（5號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200 pg/ml（4號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100 pg/ml（3號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 pg/ml（2號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25 pg/ml（1號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的

7、2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0 pg/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2. 洗滌緩沖液（20X ）的稀釋：蒸餾水 20倍稀釋。操作步驟1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生 加樣上的誤差。2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個 樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品 50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37C溫育1小時。4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，

8、振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如 果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37C溫育30分鐘。6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如 果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7. 每孔加入底物 A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37C溫育15分鐘。避免光照。& 取出酶標(biāo)板，迅速加入 50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的 OD值。建議使用的實驗方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（pg/ml）A800800樣品樣品:樣品樣品樣品樣品樣品樣品:樣品樣品B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C200200樣品樣品:樣品樣品樣品樣品樣品樣品:樣品樣品D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2525樣品樣品:樣品樣品樣品樣品樣品樣品:樣品樣品G00樣品樣品:樣品樣品樣品樣品樣品樣品:樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品結(jié)果分析以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo) （X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-2 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)