重酒石酸去甲腎上腺素

1、重酒石酸去甲腎上腺素的雜質(zhì)檢驗研究方法C8H11NO3.C4H6O6本品為(R)-4-(2- 氨基-1- 羥基乙基 )-1，2-苯二酚重酒石酸鹽一水合物。按無水物計算，含C8H11NO3.C4H6O6不得少于99.0%?！?. 性狀】1.1 重酒石酸去甲腎上腺素為白色或類白色結(jié)晶性粉末，無臭，味苦。遇光或遇空氣易變質(zhì)。（本品分子結(jié)構(gòu)中具有鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，露置空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深，故因注意貯藏條件。）1.2 溶解度 易溶于水，微溶于乙醇，難溶于乙醚、氯仿。(去甲腎上腺素含有酚羥基,氨基等親水基團,極性偏大;其在酸性條件下較穩(wěn)定,故一般與重酒石酸形成的形式;)1.3 熔點 熔點為1001

2、06，熔融時同時分解，并顯渾濁。（可以用熔點,熔程鑒別化合物,但本品熔融時同時分解，故用熱分析法分析鑒別較適宜）1.4 比旋度 取本品精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含50mg的溶液，比旋度為-10.0°至-12.0°(左旋去腎上腺素的活性是右旋去甲腎上腺素的27倍,藥用常用左旋體,根據(jù)比選度的測量也可作為其鑒別的方法之一)【2. 鑒別】重酒石酸去甲腎上腺素屬于兒茶酚胺類藥物，根據(jù)其根結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，可采取如下方法進(jìn)行鑒別試驗。2.1 與三氯化鐵反應(yīng)2.1.1原理重酒石酸去甲腎上腺素分子結(jié)構(gòu)中具有鄰苯二酚，其酚羥基極易被Fe3+氧化而現(xiàn)色;堿性條件氧化加劇，加入碳酸

3、氫鈉試液后產(chǎn)物顏色加深。2.1.2方法取本品約10mg，加水1ml溶解后，加三氯化鐵試液1滴，振搖，即顯翠綠色：再緩緩加碳酸氫鈉試液，即顯藍(lán)色，最后變成紅色。2.1.3方法學(xué)考察專屬性：應(yīng)不受可能共存的物質(zhì)干擾，其他結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)(本法專屬性差)耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大2.2 氧化反應(yīng)2.2.1原理本品結(jié)構(gòu)中具有酚羥基，易被碘氧化而呈色。加硫代硫酸鈉過剩的碘被還原。2.2.2方法取本品約1mg，加酒石酸氫鉀的飽和溶液10ml溶解后，加碘試液1ml，放置5分鐘后，加硫代硫酸鈉試液2ml，溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色。2.2.3方法學(xué)考察

4、專屬性：應(yīng)不受可能共存的物質(zhì)干擾，其他結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。(本法專屬性差)耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大2.3紫外分光光度法（UV）2.3.1原理 比較重酒石酸去甲腎上腺素在最大吸收波長與最小吸收波長處吸光度的比值。2.3.2方法 對照品比色法：分別制備標(biāo)準(zhǔn)對照品和樣品溶液，進(jìn)行紫外分光光度測定，對比對照品和樣品分別在最大與最小吸收波長處吸光度的比值。2.3.3方法學(xué)考察專屬性：考察其他可能共存的物質(zhì)在去甲腎上腺素最大與最小吸收波長處的吸收行為，不應(yīng)有干擾。(本法專屬性較好)耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大2

5、.4紅外分光光度法(IR)2.4.1原理 化合物分子通過分子轉(zhuǎn)動和振動能級的躍遷吸收紅外光而形成紅外吸收光譜，通過比較標(biāo)準(zhǔn)對照品德紅外譜圖來進(jìn)行鑒別分析。2.4.2方法 與標(biāo)準(zhǔn)對照品圖譜進(jìn)行對比，觀察其吸收峰，應(yīng)一致。2.4.3方法學(xué)考察專屬性：其他可能共存的物質(zhì)的紅外吸收圖譜應(yīng)不對其造成干擾。(本法專屬性好)耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大2.5 HPLC法2.5.1原理 HPLC法以一定的流動相將樣品輸入色譜柱，根據(jù)各組分的不同極性而實現(xiàn)分離，再進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測。2.5.2方法 與對照品圖譜進(jìn)行對比，供試品峰的保留時間應(yīng)與對照品峰一致。(本法專屬性較

6、好)2.5.3方法學(xué)考察專屬性：考察其他可能共存的物質(zhì)與主成分的分離度，應(yīng)大于1.5。耐用性：不同廠牌、不同批號同類型的色譜柱，柱溫，流動相組分、pH值,流速等因素發(fā)生微小變動后，考察理論塔板數(shù)，分離度，拖尾因子等能否通過系統(tǒng)適用性實驗,保留時間是否一致。2.6 TLC法2.6.1原理 利用對照品及樣品溶液在薄層板上的展開行為對比，根據(jù)其比移值和分離效能進(jìn)行鑒別。2.6.2方法選用同濃度的對照品與供試品溶液在同一波層上點板，觀察斑點的大小、位置、顏色是否一致2.6.3方法學(xué)考察專屬性：其他可能共存的物質(zhì)應(yīng)與主斑點能良好分離。（本法專屬性較好）耐用性：不同批號同類型的薄層板，流動相組分、溫度等因

7、素發(fā)生微小變動后，考察分離度等能否通過系統(tǒng)適用性實驗，比移值是否一致。2.7 鑒別方法的最終確定在眾多的鑒別方法中，本文僅簡單闡述了以上幾種。與三氯化鐵顯色反應(yīng)以及氧化反應(yīng)操作簡便，耗時短，但存在專屬性差的缺點；UV法和TLC法操作簡便，準(zhǔn)確度較高，專屬性較顯色反應(yīng)和氧化反應(yīng)好；IR法和HPLC法具有特征性強，專屬性好的優(yōu)點。在綜合考慮各種方法之后，最終選用與三氯化鐵試液的顯色反應(yīng)，IR和HPLC法進(jìn)行重酒石酸去甲腎上腺素的鑒別試驗，通過這三種原理不同的方法，可以對重酒石酸去甲腎上腺素的鑒別試驗達(dá)到良好的效果?！?. 檢查】3.1 溶液的澄清度與顏色依據(jù)：去甲腎上腺素極易氧化變質(zhì)，可能產(chǎn)生沉淀

8、，顏色改變，故應(yīng)對其進(jìn)行澄清度與顏色檢查方法：目測其液體制劑應(yīng)澄清無色，其原料藥用適宜的溶劑溶解后，應(yīng)澄清無色。專屬性：由于目測，本法專屬性低檢測限：人視覺可以判斷的限度耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大3.2 酮體依據(jù)：藥物在生產(chǎn)中均由其酮體氫化還原制得，若氫化不完全，易引入酮體雜質(zhì)。酮體在310nm處有最大吸收方法：取本品，加水制成每1ml中含2.0mg的溶液，照紫外-可見分光光度法，在310nm的波長處測定，吸光度不得超過0.05。專屬性：其他可能共存的物質(zhì)和去甲腎上腺素在310nm處沒有吸收，本法專屬性較好。檢測限：不同儀器不同方法有不同檢測限。耐用

9、性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大3.3 水分依據(jù)：利用碘將二氧化硫氧化為三氧化硫時，需要一定的水分參與反應(yīng)，根據(jù)消耗碘的量來測定水分的含量。方法：取供試品適量，加入無水甲醇，不斷攪拌下，用費休氏試液滴定至終點。另取無水甲醇同量，按同法進(jìn)行空白試驗。水分應(yīng)為5.0%-6.0%。專屬性：原料藥中去甲腎上腺素易與水結(jié)合，其他可能共存的物質(zhì)不含結(jié)合水，本法測定水分含量專屬性較高。耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大3.4熾灼殘渣依據(jù)：有機藥物經(jīng)炭化后，高溫?zé)胱?，能產(chǎn)生非揮發(fā)性的無機雜質(zhì)的硫酸鹽。方法：取供試品適量，置已熾灼至恒重的坩鍋

10、中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在700800熾灼至恒重，不得過0.1%。專屬性：本法檢測樣品中的金屬含量專屬性較好耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大3.5 有關(guān)物質(zhì)取本品，加流動相A溶解并稀釋制成每1 ml中約含5 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用流動相A定量稀釋制成每1 ml 中約含15 ug的溶液，作為對照溶液。 高效液相色譜法試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.05%庚烷磺酸鈉的溶液（用磷酸調(diào)節(jié)PH值至2.2）為流動相A；乙腈-0.05%庚烷磺酸鈉溶液（1:1）（用磷酸調(diào)

11、節(jié)pH值至2.4）為流動相B，照下表進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為280 nm；流速為每分鐘1.5 ml。 時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0982198220703025505025.198235982取本品10 mg，加0.1mol/L鹽酸溶液5 ml使溶解，取1 ml，加30%過氧化氫溶液0.1 ml，搖勻，在紫外燈光（254 nm）下照射90分鐘，加流動相A 9ml，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，取系統(tǒng)適用性試驗溶液20 ul，注入液相色譜儀，主成分峰的保留時間約為11 分鐘，主成分峰后應(yīng)出現(xiàn)一個未知降解產(chǎn)物峰與去甲腎上腺酮峰，去甲腎上腺酮峰的相對保留時間約為1.3，理論板數(shù)按去甲腎

12、上腺素峰計算不低于5000，主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合要求，取對照溶液各20 ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如有與去甲腎上腺酮峰保留時間一致的色譜峰，其峰面積乘以0.3后不得大于對照溶液主峰面積的1/3（0.1%）；其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/3（0.1%）；雜質(zhì)總量不得過0.3%。供試品溶液色譜圖中任何小于對照溶液主峰面積1/6倍的峰可忽略不計。專屬性：其他可能共存的物質(zhì)和去甲腎上腺素分離良好，本法專屬性好。檢測限：一般以信噪比（S/N）=3:1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本

13、法測量結(jié)果變化不大；不同廠牌、不同批號同類型的色譜柱，柱溫，流動相組分、pH值,流速等因素發(fā)生微小變動后，考察理論塔板數(shù)，分離度，拖尾因子等能否通過系統(tǒng)適用性實驗,保留時間是否一致。4. 含量測定4.1 非水溶液滴定法4.1.1 原理重酒石酸去甲腎上腺素分子結(jié)構(gòu)中含有顯弱堿性的N原子，可采用非水溶液滴定法測定其含量。4.1.2方法取供試品適量，精密稱定，用冰醋酸溶解，加結(jié)晶紫試液，以高氯酸滴定液滴定至顯藍(lán)綠色，同法進(jìn)行空白試驗校正。以消耗高氯酸滴定液的體積和相應(yīng)滴定度計算供試品含量。實驗條件控制：1.采用非水溶液滴定法進(jìn)行含量測定時，如果測定藥物堿性較弱，終點不夠明顯可加入醋酐，以提高其堿性，

14、使終點突越明顯。2.如果測定氫鹵酸鹽時，常常需要加入醋酸汞試液以消除氫鹵酸的干擾。本品為重酒石酸鹽，產(chǎn)生的重酒石酸不會對測定產(chǎn)生干擾。4.1.3 方法學(xué)考察專屬性：應(yīng)不受可能共存的物質(zhì)干擾，并制備模擬樣品，其他結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。精密度：精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素供試品適量，配制成溶液，分別取樣6次，進(jìn)行滴定，考察結(jié)果的RSD值。重現(xiàn)性：分別精密稱取6份適量的重酒石酸去甲腎上腺素供試品，配制成6份溶液溶液，同法依次分別滴定，考察結(jié)果的RSD值。穩(wěn)定性：配制已知濃度的重酒石酸去甲腎上腺素供試品溶液，在室溫下放置，于0，1，2，3，4，5，6 h分別滴定，計算含量，考察其RSD值。耐用性

15、：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大。4.2 高效液相色譜法4.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.14%庚烷磺酸鈉溶液-甲醇（65:35），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1，作為流動相；檢測波長為280nm；流速：1ml/min；柱溫：30；進(jìn)樣量：20l。理論板數(shù)按重酒石酸去甲腎上腺素峰計算不低于3000。4.2.2 方法精密量取本品適量（約相當(dāng)于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（125）稀釋至刻度，搖勻，取20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎上腺素對照品適量，精密稱定，加醋酸溶

16、液（125）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。4.2.3 方法學(xué)考察專屬性試驗：取空白輔料溶液及重酒石酸去甲腎上腺素注射液的供試品溶液、對照品溶液各20l，進(jìn)樣測定，空白輔料應(yīng)不干擾重酒石酸去甲腎上腺素注射液的含量測定。線性關(guān)系及范圍：分別精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素適量，分別配成6種不同濃度的溶液，測定，記錄色譜圖。以重酒石酸去甲腎上腺素峰面積（X）對其質(zhì)量濃度(Y，mg/ml)進(jìn)行回歸，得重酒石酸去甲腎上腺素的回歸方程，從而得出線性關(guān)系與范圍。檢測限的考察：按信噪比3:1測得重酒石酸去甲腎上腺素的最小檢測限。精密度試驗：配制含量測定供試品溶液共 6

17、份，分別進(jìn)樣 20µl，測定重酒石酸去甲腎上腺素注射液的標(biāo)示量 RSD 值。準(zhǔn)確度試驗：按處方量的 80%、100%、120%分別配制三種不同濃度的重酒石酸去甲腎上腺素溶液，依法測定，計算重酒石酸去甲腎上腺素的平均回收率及RSD值。耐用性：將樣品試液放置一段時間后（樣品穩(wěn)定性），用本法測量結(jié)果變化不大；不同廠牌、不同批號同類型的色譜柱，柱溫，流動相組分、pH值,流速等因素發(fā)生微小變動后，考察理論塔板數(shù)，分離度，拖尾因子等能否通過系統(tǒng)適用性實驗,保留時間是否一致。4.3紫外分光光度法4.3.1原理基本原理在鑒別項中已述，利用其吸光度在一定濃度范圍內(nèi)與吸光度成正比，測定280nm處的吸光

18、度，所得結(jié)果進(jìn)行定量分析，再進(jìn)一步確定其含量。4.3.2方法選用對照品比色法。重酒石酸去甲腎上腺素對照品溶液的配制：精密稱定重酒石酸去甲腎上腺素對照品適量，以去離子水配制成一定濃度的對照品溶液。供試品溶液的配制：精密稱定重酒石酸去甲腎上腺素試品適量，以去離子水配制成供試品溶液。含量測定：分別測定對照品和供試品在280nm處的吸光度，利用朗博比爾定律計算供試品的含量。4.3.3方法學(xué)考察專屬性：考察其他可能共存的物質(zhì)在280nm處的吸收行為，不應(yīng)有干擾。線性范圍：精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素對照品適量，配制成一定濃度的對照品儲備液；精密量取該貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分別置于25ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，制成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，分別測定在280nm處的吸光度，以吸光度對濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。精密度：精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素供試品適量，配制成溶液，在280nm處連續(xù)測定6次，考察結(jié)果的RSD值。重現(xiàn)性：精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素供試品適量，配制成6份溶液溶液，在280nm處分別測定其吸光度，考察結(jié)