中藥分析學(xué)(第2章)

1、 1 1 1 第二章第二章中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)分析中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)分析 2 2 2 主 要 內(nèi) 容v1.1.中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)檢查的一般要求中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)檢查的一般要求v2.2.中藥雜質(zhì)及常規(guī)檢查方法中藥雜質(zhì)及常規(guī)檢查方法v3.3.重金屬及有害殘留物分析重金屬及有害殘留物分析v4.4.內(nèi)源性有害物質(zhì)分析內(nèi)源性有害物質(zhì)分析v5.5.黃曲霉毒素及微生物學(xué)檢查黃曲霉毒素及微生物學(xué)檢查 3 3 3 本章學(xué)習(xí)要求本章學(xué)習(xí)要求要求3 4 4 4 雜質(zhì)：雜質(zhì)：無治療作用，影響藥物療效和穩(wěn)定性，甚至 對人體健康有害。雜質(zhì)檢查：雜質(zhì)檢查：保證藥物的安全、有效、均一和純度雜質(zhì)來源：雜質(zhì)來源：主要來源于藥物的加

2、工、生產(chǎn)和貯藏三個環(huán)節(jié)。內(nèi)源性有害物質(zhì)：內(nèi)源性有害物質(zhì)：中藥本身含具有毒副作用的化學(xué)成分，如馬兜鈴酸、烏頭堿、吡咯里西啶類生物堿。外源性有害物質(zhì)：外源性有害物質(zhì)：殘留農(nóng)藥、有機溶劑、大孔樹脂，重金屬及有害元素，微生物和黃曲霉毒素等。第一節(jié)中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)檢查的一般要求第一節(jié)中藥雜質(zhì)及有害物質(zhì)檢查的一般要求 5 5 5 限量檢查雜質(zhì)限量不影響療效和不發(fā)生毒性的前提下，藥物中可能存在的雜質(zhì)，允許還有一定量，最大允許量為雜質(zhì)限量。藥物中雜質(zhì)的檢查一般只檢查是否超過限量，這種方法稱雜質(zhì)的限量檢查。通常用百分之幾（%）或百萬分之幾（ppm）或mg/kg來表示。雜質(zhì)限量=雜質(zhì)限量雜質(zhì)最大允許量樣品量雜質(zhì)

3、及有害物質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)及有害物質(zhì)的限量檢查 6 6 6 檢查方法對照法對照法靈敏度法靈敏度法 含量測定法含量測定法比較法比較法最大限度量待檢雜質(zhì)或待檢物對照品（或標準品）溶液，與供試品溶液，在相同條件下實驗，比較結(jié)果，以確定是否超過限量。在供試品溶液中加入試劑，在一定條件下反應(yīng)，觀察有無陽性結(jié)果出現(xiàn)，以判斷雜質(zhì)是否超限。取供試品一定量，依法檢查，測定待測品的某些特征參數(shù)，與規(guī)定的限量比較，以判斷是否超限。用規(guī)定的方法測定雜質(zhì)的含量，與規(guī)定的限量比較，以判斷雜質(zhì)是否超限。限量檢查方法限量檢查方法 7 7 7 v1.1.雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查v2.2.干燥失重（詳見藥典）干燥失重（詳見藥典）v3.3.

4、水分測定水分測定v4.4.灰分測定灰分測定v5.5.色度檢查（詳見藥典）色度檢查（詳見藥典）v6.6.酸敗度測定（詳見藥典）酸敗度測定（詳見藥典）第二節(jié)中藥雜質(zhì)及常規(guī)檢查方法第二節(jié)中藥雜質(zhì)及常規(guī)檢查方法 8 8 8 篩選稱重Your textYour text取規(guī)定量樣品，攤開，用肉眼或放大鏡（5-10倍）觀察，將雜質(zhì)檢出。將各類雜質(zhì)分別稱重，計算其在供試品中的含量（%），如丁香中雜質(zhì)不得過2%，女貞子中雜質(zhì)不得過3%1.外觀難以鑒別時，可進行顯微或理化鑒別試驗，證明其為雜質(zhì)后，計入雜質(zhì)重量中。2.雜質(zhì)檢查所用的供試品量，除另有規(guī)定外，按藥材和飲片取樣法稱取。3.需采用特殊方法進行檢查的雜質(zhì)，

5、應(yīng)給出具體方法。注意事項一、藥材中混存雜質(zhì)檢查法一、藥材中混存雜質(zhì)檢查法 9 9 9 烘干法二、水分測定法二、水分測定法甲苯法減壓干燥法氣相色譜法甲苯法水分測定裝置甲苯法水分測定裝置適用于含揮發(fā)性成分的藥品，不適用于微量水分的測定。因200ml甲苯可吸水0.1ml，故需預(yù)處理。甲苯先加少量水，充分振搖后放置，將水層棄去，甲苯經(jīng)蒸餾后使用。 10 1010 總灰分：中藥經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一z留的無機物。酸不溶性灰分：中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨欲}酸處理，得到不溶于鹽酸的灰分。三、灰分測定及熾灼殘渣檢查三、灰分測定及熾灼殘渣檢查 11 1111 1總灰分測定法取適量供試品于熾灼至恒重的坩

6、堝中，稱定重量，緩緩熾熱，避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500-600，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算總灰分的含量（%）。2酸不溶性灰分測定法取總灰分，先用稀鹽酸加熱溶解，無灰濾紙濾過，再洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。干燥，熾灼至恒重，計算酸不溶性灰分的含量（%）。3注意事項供試品需適量粉碎，使其能通過2號篩，將粉末混合均勻后再取樣。如供試品不易灰化，可將坩鍋放冷，加熱水或10硝酸銨溶液2ml，使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，得到的殘渣再按前法熾灼至坩鍋內(nèi)。( (一一) )灰分測定法灰分測定法 12 1212 取供試品適量，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放

7、冷至室溫；除另有規(guī)定外，加硫酸0.51ml使?jié)櫇?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在700800熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700800熾熱至恒重，即可。如需將殘渣留作重金屬檢查，則熾熱溫度必須控制在500600。( (二二) )熾灼殘渣檢查法熾灼殘渣檢查法中藥經(jīng)熾灼炭化，再加硫酸濕潤，加熱使硫酸蒸氣除盡后，于高溫?zé)胱浦镣耆一?，使有機物破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)（多為金屬的氧化物或無機鹽類）成為硫酸鹽，稱為熾灼殘渣。 13 1313 重金屬及有害元素包括鉛（Pb)、鎘（Cd)、砷（As）、汞（Hg）、銅（Cu）等。其毒性作用主要是由于與體內(nèi)酶蛋

8、白上的-SH和-S-S-鍵牢固結(jié)合，從而使蛋白質(zhì)變性，酶失去活性，組織細胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能上的損害。1.重金屬總量用硫代乙酰胺或硫化鈉顯色反應(yīng)比色法 測定。2.砷鹽的檢測用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸銀法3.單個鉛（Pb)、鎘（Cd)、砷（As）、汞（Hg）、銅 （Cu）元素的測定使用原子吸收光譜法和電感耦合 等離子體質(zhì)譜法進行測定。第三節(jié)重金屬及有害殘留物分析第三節(jié)重金屬及有害殘留物分析 14 1414 一、重金屬及砷鹽總量檢查法一、重金屬及砷鹽總量檢查法 pH3.5CH3CSNH2H2O CH3CONH2H2S Pb2H2S PbS（黑色）（黑色）2H原理原理方法方法第一法第一法硫代乙酰胺法

9、硫代乙酰胺法取納氏比色管兩支，甲、乙兩管中按照規(guī)定分別制成對照品、供試品溶液；同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 15 1515 1供試品如有色供試品如有色應(yīng)在加硫代乙酰胺試液以前在對照溶液管中滴加少量稀焦糖液，使之與供試品溶液管的顏色一致，然后再加硫代乙酰胺試液比色。如仍不能使兩管顏色一致時，可取兩倍量供試品加水溶解后，分成兩等份，在一份中加入硫代乙酰胺試液，經(jīng)濾膜濾過（除去金屬硫化物沉淀），加入規(guī)定量的標準鉛溶液作為對照溶液，再與另一份供試溶液按規(guī)定方法處理后比較。2 供試品如含高鐵鹽供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時，可先加抗壞血酸0.5-1.0g，并在對照液

10、中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。3供試品為鐵鹽供試品為鐵鹽可在相對密度1.103-1.105的鹽酸（鹽酸9ml加水6ml）中，使大部分Fe3+生成HFeCl62（六氯合鐵離子）,用乙醚提取除去；再加氨試液使溶液呈堿性，用氰化鉀掩蔽殘留的微量鐵鹽后，加硫化鈉試液檢查鉛鹽。4藥物本身也能生藥物本身也能生成不溶性硫化物成不溶性硫化物干擾重金屬的檢查時，應(yīng)作特殊處理。供試品的處理供試品的處理 16 1616 將供試品熾灼破壞后，加硝酸加熱處理，使有機物分解破壞完全后，再按一法進行檢查。原理原理方法方法取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，按照規(guī)定分別制成對照品、供試品溶液；照一法檢查，即得。第二法第二法

11、熾灼后硫代乙酰胺法熾灼后硫代乙酰胺法 17 1717 熾灼溫度對重金屬檢查影響較大，溫度越高，重金屬損失越大，應(yīng)控制在500600熾灼使完全炭化。熾灼殘渣加硝酸加熱處理后，必須蒸干除盡氧化氮，否則亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。如使用鹽酸超過1ml（或與鹽酸1ml相當?shù)南←}酸），或氨試液超過2ml，以及用硫酸與硝酸進行有機破壞或其他試劑處理者，除另有規(guī)定外，對照品溶液應(yīng)取同樣量試劑在磁皿中蒸干。含鈉鹽或有氟的有機藥物在熾灼時能腐蝕瓷坩鍋而引入重金屬，應(yīng)改用鉑坩鍋或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。注意事項注意事項 18 1818 二、農(nóng)藥殘留量測定方法二、農(nóng)藥殘留量測定方法農(nóng)藥分類農(nóng)藥分類( (從化學(xué)成分角

12、度從化學(xué)成分角度) )殺蟲劑可分成有機氯化合物、有機磷化合物、氨基甲酸酯、有機氮化合物、擬除蟲菊酯、有機氟化合物、有機錫化合物、特異性殺蟲劑等。殺菌劑又可分成有機氯殺菌劑、有機磷殺菌劑、有機硫殺菌劑、有機汞殺菌劑、無機殺菌劑、抗菌素等。 19 1919 1.1.有機氯類農(nóng)藥有機氯類農(nóng)藥：易在脂肪中蓄積，造成慢性中毒。 2.2.有機磷類農(nóng)藥有機磷類農(nóng)藥：抑制生物體內(nèi)膽堿脂酶的酶活性，從而引發(fā)中毒。 3.3.氨基甲酸酯類農(nóng)藥氨基甲酸酯類農(nóng)藥：使膽堿酯酶喪失對乙酰膽堿的水解能力，造成一系列中毒癥狀。 4.4.擬除蟲菊酯類農(nóng)藥擬除蟲菊酯類農(nóng)藥：影響細胞色素C和電子傳遞系統(tǒng)，可直接作用于神經(jīng)末梢和腎上腺

13、髓質(zhì)。1.環(huán)境對藥材的污染2.中藥栽培中農(nóng)藥的污染3.采收、加工、貯存、運輸過程中的污染。 20 2020 常用的方法有漂洗法、振蕩法、組織搗碎法、冷浸法、索氏提取法、超聲法、固相萃取法、超臨界萃取法等。提取溶劑的選擇 考慮提取溶劑的純度、極性提取提取檢測檢測常用氣相色譜法對殘留農(nóng)藥進行定性和定量。測定有機氯農(nóng)藥時，使用電子捕獲檢測器（ECD）測定有機磷農(nóng)藥時，使用火焰光度檢測器（FPD）中藥中殘留農(nóng)藥的提取和純化中藥中殘留農(nóng)藥的提取和純化 21 2121 毛細管柱頂空進樣程序升溫法第二法有機溶劑殘留量的檢查常采用氣相色譜法，現(xiàn)行中國藥典收載有3種方法。第一法第三法毛細管柱頂空進樣等溫法溶液直

14、接進樣法溶液直接進樣法三、有機溶劑殘留物測定法三、有機溶劑殘留物測定法 22 2222 一類不帶離子交換基團的多孔交聯(lián)聚合物,可通過物理吸附從溶液中選擇性吸附有機物質(zhì)，在中藥的分離純化中被廣泛應(yīng)用。其制備過程中使用了苯乙烯和二乙烯苯等作為原料,并加入了一定比例的致孔劑,殘留物有正己烷、苯、正己烷、苯、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1 1，2-2-二乙二乙基苯和二乙烯苯基苯和二乙烯苯 氣相色譜法，采用聚乙二醇為固定相的彈性石英毛細管柱，氫火焰離子化檢測器，外標法。四、大孔樹脂殘留物測定法四、大孔樹脂殘留物測定法 23 2323 23第四節(jié)、黃曲霉毒素及微生物

15、學(xué)檢查第四節(jié)、黃曲霉毒素及微生物學(xué)檢查一、一、 黃曲霉毒素測定黃曲霉毒素測定 黃曲霉毒素（aflatoxin）是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物，是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，基本結(jié)構(gòu)都有二呋喃和香豆素二呋喃和香豆素（氧雜萘鄰?fù)?，有較強毒性。 24 2424 第四節(jié)、黃曲霉毒素及微生物學(xué)檢查第四節(jié)、黃曲霉毒素及微生物學(xué)檢查黃曲霉素性質(zhì)黃曲霉素性質(zhì)耐熱，在280時可發(fā)生裂解。低濃度毒素B1易受紫外線破壞。遇氧化性物質(zhì)、氫氧化鈉和氨水等均可被破壞。在水中溶解度很低，易溶于油及一些有機溶劑，如氯仿、丙酮、甲醇等，但不溶于乙醚、石油醚和己烷中。 25 2525 黃曲霉毒素的測定方法黃曲霉毒素的測定方法1.1.微

16、柱法微柱法本法做中成藥中黃曲霉毒素篩選用，不能分辨黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2等。測得結(jié)果為黃曲霉毒素的總量。將樣品提取液通過氧化鋁-硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品中的雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素則被硅鎂型吸附劑吸附。在紫外光燈下觀察熒光環(huán)與標準比較定量。 26 2626 黃曲霉毒素的測定方法黃曲霉毒素的測定方法樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)提取、濃縮和用單向展開法在薄層上分離后，在365nm紫外光燈下產(chǎn)生藍紫色熒光。根據(jù)在薄層上顯示熒光的最低檢出量定量。 單向展開單向展開2.2.薄層色譜法薄層色譜法單向展開后，若黃曲霉毒素B1含量低，無法觀察到熒光時，需改用雙向展開法。先用無水乙醚對薄層做橫向展

17、開，再用氯仿-丙酮（98：2）混合液做縱向展開。雙向展開雙向展開 27 2727 黃曲霉毒素的測定方法黃曲霉毒素的測定方法3.3.高效液相色譜法高效液相色譜法黃曲霉毒素都具有紫外吸收，但熒光較弱，常通過衍生使熒光增強?？捎弥叭宜嵫苌?、柱后碘衍生和柱后過溴化溴化吡啶（PBPB）衍生，用熒光監(jiān)測器進行檢測。1.配制黃曲霉B1、B2、G1、G2的混標溶液及黃曲霉素衍生標樣2.樣品提取及凈化：樣品粉末先后用石油醚（或正己烷）、甲醇-水提取、氯仿萃取后，加無水硫酸鈉、弗羅里硅土除雜，收集氯仿-己烷、氯仿-甲醇、丙酮-水的淋洗液，回收溶劑至干。3.制備衍生物：加衍生試劑后，水浴反應(yīng)4.測定：流動相為甲醇-0.01mol/L KH2PO4，熒光檢測器，激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長425nm。 28 2828 中藥的微生物學(xué)檢查中藥的微