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文檔簡介
1、食品中 5 種 -受體阻斷類藥物的測定BJS 2018081 范圍本方法規(guī)定了食品(含保健食品)中酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于糖果(硬質(zhì)糖果、凝膠糖果)、酒、茶飲料等食品及片劑、口服液、膠囊劑等保健食品中酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林的測定和確證。其他類似基質(zhì)可參照本方法檢測。2 原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取,過濾后,濾液供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除另有規(guī)定外,本方法中所用試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 乙腈(CH3CN):色譜純。3.1.2 甲
2、酸(CH2O2):色譜純。3.1.3 甲醇(CH3OH):色譜純。3.1.4 0.1%甲酸水溶液:精密量取甲酸(3.1.2) 1 mL,用水稀釋至1000 mL。3.1.5 0.1%甲酸乙腈溶液:精密量取甲酸(3.1.2) 1 mL,用乙腈(3.1.1 )稀釋至1000 mL。3.2 標(biāo)準(zhǔn)品甲磺酸酚妥拉明、鹽酸哌唑嗪、鹽酸特拉唑嗪、鹽酸育亨賓、鹽酸妥拉唑林標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量和折算系數(shù)詳見附錄A,甲磺酸酚妥拉明、鹽酸哌唑嗪、鹽酸育亨賓、鹽酸妥拉唑林純度均99%,鹽酸特拉唑嗪純度92%。3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液(500 g/mL):精
3、密稱取標(biāo)準(zhǔn)品(3.2),分別折算成酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林(3.2)各10 mg,用甲醇(3.1.3)溶解,并轉(zhuǎn)移至20 mL 容量瓶中,定容至刻度,制成濃度為500 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,-18 保存,有效期6 個月。3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 g/m):準(zhǔn)確吸取酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林標(biāo)準(zhǔn)L儲備液 ( 3.3.1 ) 各 1 mL, 置于 50 mL 容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻, 制成濃度為10 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液,4 避光保存,有效期3 個月。3.3.3 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液:準(zhǔn)確吸取酚妥拉明標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.3.2) 2 mL、哌唑嗪標(biāo)準(zhǔn)中間液
4、(3.3.2)2 mL、特拉唑嗪標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.3.2) 1 mL、育亨賓標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.3.2) 1 mL、妥拉唑林標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.3.2) 8 mL,置于同一100 mL 容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成混合標(biāo)準(zhǔn)中間液, 臨用新制。其中酚妥拉明、哌唑嗪濃度為200 ng/mL, 特拉唑嗪、育亨賓濃度為100 ng/mL,妥拉唑林濃度為800 ng/mL 。3.3.4 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液( 3.3.3) 0.1 mL、 0.2 mL、 1.0 mL、 2.0 mL、5.0 mL ,置于 20 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,作為系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液
5、S1S5,酚妥拉明、哌唑嗪濃度均依次為1 ng/mL、 2 ng/mL、 10 ng/mL、 20 ng/mL、 50 ng/mL ,特拉唑嗪、育亨賓濃度均依次為0.5 ng/mL 、 1 ng/mL 、 5 ng/mL 、 10 ng/mL、 25 ng/mL,妥拉唑林濃度依次為4 ng/mL 、 8 ng/mL 、 40 ng/mL、 80 ng/mL、 200 ng/mL。臨用新制或依儀器響應(yīng)情況配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源。4.2 分析天平:感量分別為0.00001g 和 0.0001g。4.3 超聲波清洗器。5 分析
6、步驟5.1 試樣制備5.1.1 固體試樣:取適量混勻,研細(xì),稱取粉末1 g(精確至0. 001 g),置具塞試管中,精密加入甲醇 10 mL,密塞,超聲提取30 min,冷卻至室溫,搖勻,過濾膜(0.22 m ,有機(jī)相),取濾液,根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi),備用。5.1.2 液態(tài)試樣:取適量搖勻,稱取液體1 g(精確至0.0001 g) 于 10 mL 容量瓶中,加入甲醇8 mL,超聲提取30 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至10mL,過濾膜(0.22 m ,有機(jī)相),取濾液,根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi),備用。5.1.3 空白試驗:不加試樣按試樣同法處理,制得空白溶液,備用。稱取與
7、試樣等量的空白基質(zhì)試樣,按試樣同法處理,制得空白基質(zhì)試樣溶液,備用。5.2 儀器參考條件5.2.1 色譜條件a)色譜柱:C18柱( 2.1 ×100 mm,2.6 m),或性能相當(dāng)者。b)流動相:A 為0.1%甲酸水溶液(3.1.4),B 為 0.1%甲酸乙腈溶液(3.1.5),參考梯度洗脫程序見表 1。c)流速:300 L/min。d) 柱溫: 40 。e) 進(jìn)樣量:5 L 。表 1 參考梯度洗脫程序表梯度時間/min流動相A( %)流動相B( %)0.0090101.0090107.00109011.00109011.50901015.009010注:在有共流出成分影響目標(biāo)化合物
8、檢測時,可以適當(dāng)調(diào)節(jié)流動相比例,使盡可能與干擾成分分離,減少干擾。5.2.2 質(zhì)譜條件a)電離方式:電噴霧正離子模式。b)檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM )。c)電噴霧電壓:5500 V。d)離子源溫度:550 。e)霧化氣壓力:55 psi。f)氣簾氣壓力:35 psi。g)輔助氣體壓力:55 psi。h)定性離子對、定量離子對及其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。表 2 5 種 -受體阻斷類藥物離子選擇參數(shù)表序號化合物名稱母離子( m/z)子離子( m/z)碰撞能量(eV)去簇電壓(V)1酚妥拉明282.191.0*41100212.0122哌唑嗪384.2247.0*3870366.2353特拉唑嗪388
9、.1247.1*41120290.2304育亨賓355.2144.2*28120212.0315妥拉唑林161.265.1*4412090.540為定量離子;方法提供的監(jiān)測離子對等測定條件為推薦條件,各實驗室可根據(jù)所配置儀器的具體情況作適當(dāng)調(diào) 整;在樣品基質(zhì)有測定干擾的情況下,可選用其他監(jiān)測離子對。5.3 定性測定按照高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物 的色譜保留時間,試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較,變化范圍在± 2.5%內(nèi),并且所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子相對豐度比的偏差不超過表
10、3 規(guī)定的范圍,每個定性離子的信噪比應(yīng)大于等于3,可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。表 3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度(%)>50>2050>1020 10允許的相對偏差(%)± 20± 25± 30± 505.4 定量測定5.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.3.4)分別按儀器參考條件(5.2)進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。必要時可用空白基質(zhì)試樣溶液(5.1.3)配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測(MRM
11、 )色譜圖參見附錄B。5.4.2 試樣溶液的測定將試樣溶液(5.1)按儀器參考條件(5.2)進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度。6 結(jié)果計算-質(zhì)譜測得的濃度代入下式計算含量:將液相色譜cV1)Xc K1000 m式中:X 試樣中各待測物的含量,單位為毫克每千克(mg/kg );c 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的試樣溶液中各待測物的濃度,單位為納克每毫升(ng/mL );V 樣液最終定容體積,單位為毫升(mL );m 試樣溶液所代表的質(zhì)量,單位為克(g);K 稀釋倍數(shù);計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重
12、復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 準(zhǔn)確度本方法的添加濃度范圍及回收率實驗數(shù)據(jù)見表4。表 4 本方法添加濃度范圍及回收率目標(biāo)化合物添加濃度范圍( mg/kg)回收率(%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%)酚妥拉明0.010.170120 20哌唑嗪0.010.170120 20特拉唑嗪0.0050.0570120 20育亨賓0.0050.0570120 20妥拉唑林0.040.470120 159 其它當(dāng)取樣量為1.0 g, 定容體積為10 mL 時, 本方法中酚妥拉明與哌唑嗪檢出限均為0.005 mg/kg,定量限為0.01 mg/kg;特拉唑嗪與育亨賓的檢出限均為0.
13、0025 mg/kg,定量限為0.005 mg/kg ;妥拉唑林的檢出限為0.02 mg/kg,定量限為0.04 mg/kg。標(biāo)準(zhǔn)品信息表 A 標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量和折算系數(shù)序號中文名稱英文名稱CAS 登錄號分子式相對分子質(zhì)量折算系數(shù)1甲磺酸酚妥拉明PhentolamineMesylate65-28-1C17H19N3O· CH3SO3H377.460.7452鹽酸哌唑嗪PrazosinHydrochloride19237-84-4C19H21N5O4·HCl419.860.9133鹽酸特拉唑嗪TerazosinHydrochlo
14、ride63074-08-8C19H25N5O4·HCl423.890.9144鹽酸育亨賓YohimbineHydrochloride65-19-0C21H26N2O3·HCl390.910.9075鹽酸妥拉唑林TolazolineHydrochloride59-97-2C10H12N2·HCl196.680.815為定量離子對。標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測(MRM )色譜圖XIC of + M RM (1 0 pairs ): 1 6 1 .200/9 0.500 D a ID : tu olaz uolin 1 fro m S ample 28 (B Z) o fM ax
15、. 5 .8e5 cp sXIC of + MRM (1 0 p airs): 1 61 .20 0/6 5.1 00 D a ID : tu olazu olin2 fro m Sa mple 2 8 (BZ ) o fM ax. 6 .1 e 5 cp s妥拉唑林6 .0e55 .5e5161.2>90.55.0e55 .0e54.5e54 .5e54.0e54 .0e53.5e53 .5e53.0e53 .0e52.5e52 .5e52.0e52 .0e51.5e51 .5e51.0e51 .0e55.0e45 .0e40.0T ime , m inXIC2 .0e51 .7e1
16、.6e51 .8e5388.1>290.21 .4e1 .6e51 .4e51 .2e1 .2e51 .0e51 .0e58.0e8 .0e46.0e6 .0e44.0e4 .0e42.0e2 .0e40.0Tim e , m inT ime , m in2 .5e52 .0e51 .5e51 .0e501 .20e51 .6e51 .4e51 .2e51 .0e58 .0e46 .0e44 .0e42 .0e400000Tim e, m in3.0 e52.5 e5282.1>212.01 4e5s2.0 e51 .2e5cp1 .0e51.5 e58 .0e4In1.0 e56
17、 .0e44 .0e45.0 e42 .0e40.00.51.01 .52.02.5s n55.8e.5e55s tne In3.5Tim e, m in3.5Tim e, m in3.5Tim e , m in3.5Tim e , m in3 .03.5Tim e, m in3.5Tim e , m inM ax. 1 .7e5XIC of + M R161.2>65.10.00.00.0s cpn te Ins cps tne Ins cpn te Ins cpne Inn te Inf + MRM (1 0): 3 88 .1 0 0/2 47388.1>247.12 .9e55 .0e41 .8e5384.2>247.0355.2>144.2282.1>91.0s cpn te Ins cps cpne tIns cpne In0.00.06 .0e45 .5e45 .0e44 .5e44 .0e43 .5e43 .0e42 .
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