常用生物化學檢驗技術(shù)PPT學習教案

1、會計學1常用生物化學檢驗技術(shù)常用生物化學檢驗技術(shù)2概念概念：利用物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或散射光譜譜系的特點，對物質(zhì)進行：利用物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或散射光譜譜系的特點，對物質(zhì)進行定性或定量定性或定量的分析方法的分析方法第1頁/共61頁3u發(fā)射光譜發(fā)射光譜 火焰光度法、原子發(fā)射光譜法、熒光光譜法火焰光度法、原子發(fā)射光譜法、熒光光譜法u吸收光譜吸收光譜 紫外、可見光、紅外光及原子吸收分光光度法紫外、可見光、紅外光及原子吸收分光光度法u散光光譜散光光譜 比濁法比濁法光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)第2頁/共61頁4第3頁/共61頁5第4頁/共61頁6第5頁/共61頁第6頁/共61頁8分光光度技術(shù)的基本原理分光光度技

2、術(shù)的基本原理透光度與吸光度透光度與吸光度T=I/IOT%=T100%A=-lgT=-lg I/IO =lgIO/I第7頁/共61頁9Lambert-Beer定律定律A=KLC適用用于可見光、紫外光、紅外光和適用用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體均勻非散射的液體（摩爾吸光系數(shù)）：（摩爾吸光系數(shù)）：當液層厚度為當液層厚度為1cm1cm，物質(zhì)濃度為，物質(zhì)濃度為1mol/L1mol/L時時波長下的吸光度值波長下的吸光度值第8頁/共61頁10第9頁/共61頁11第10頁/共61頁12第11頁/共61頁13第12頁/共61頁14第13頁/共61頁15第14頁/共61頁16第15頁/共61頁17第

3、16頁/共61頁18第17頁/共61頁19第18頁/共61頁20第19頁/共61頁21第20頁/共61頁22 溶液中帶電粒子在直流電場中向溶液中帶電粒子在直流電場中向電性相反電極移動的現(xiàn)象稱為電性相反電極移動的現(xiàn)象稱為電電泳泳。 電電 泳泳第21頁/共61頁23 利用帶電粒子在電場作用下利用帶電粒子在電場作用下定向移動的特性，對混合物組分定向移動的特性，對混合物組分進行分離、純化和測定的技術(shù)稱進行分離、純化和測定的技術(shù)稱為為電泳技術(shù)電泳技術(shù)。電泳技術(shù)電泳技術(shù)第22頁/共61頁24 COO- H C NH3+ R COO- H C NH2 R COOH H C NH3+ RH+H+OH-OH-p

4、H = pIpHpI原理原理第23頁/共61頁人血清蛋白的等電點和電泳遷移率人血清蛋白的等電點和電泳遷移率 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 等電點等電點 電泳遷移率電泳遷移率cm2.s-1.v-1 白蛋白白蛋白 4.84 5.910-5 球蛋白球蛋白 5.06 5.110-5 球蛋白球蛋白 5.06 4.110-5 球蛋白球蛋白 5.12 2.810-5 球蛋白球蛋白 6.857.30 1.010-5 第24頁/共61頁26第25頁/共61頁27第26頁/共61頁28根據(jù)根據(jù)StokeStoke定律定律第27頁/共61頁291 1、根據(jù)被分離的樣品多少分為、根據(jù)被分離的樣品多少分為 分析電泳分析電泳 制備電泳制

5、備電泳2 2、根據(jù)電泳時電壓的高低分為、根據(jù)電泳時電壓的高低分為 高壓電泳高壓電泳 （50 V/cm50 V/cm以上）以上） 常壓電泳常壓電泳 （50 V/cm50 V/cm以下）以下） 電泳的分類電泳的分類第28頁/共61頁303 3、根據(jù)電泳媒介的不同分為、根據(jù)電泳媒介的不同分為 自由電泳自由電泳 （溶液）（溶液） 區(qū)帶電泳區(qū)帶電泳 （支持介質(zhì)）（支持介質(zhì)） 4 4、根據(jù)電泳系統(tǒng)是否均一分為、根據(jù)電泳系統(tǒng)是否均一分為 連續(xù)電泳連續(xù)電泳 不連續(xù)電泳不連續(xù)電泳第29頁/共61頁31第30頁/共61頁32v組成成分組成成分pH pH pHpH與與pIpI比較，比較，4.5-9.0,4.5-9.

6、0,正極正極pH pH 負極負極v離子強度離子強度離子強度越大，緩沖容量越大，離子強度越大，緩沖容量越大，pHmol/LpHmol/L3 3、緩沖液、緩沖液第31頁/共61頁335 5、蒸發(fā)作用、蒸發(fā)作用6 6、樣品、樣品4 4、支持物、支持物v吸附作用吸附作用v電滲作用電滲作用第32頁/共61頁34 電電 泳泳 儀儀 由由直流電源直流電源和和電泳槽電泳槽兩部分組兩部分組成。成。一、直流電源一、直流電源 一般由交流電經(jīng)過整流獲得一般由交流電經(jīng)過整流獲得 恒壓電源恒壓電源 恒流電源恒流電源 恒功電源恒功電源第33頁/共61頁35二、電泳槽二、電泳槽 蓋蓋 電極及電極室電極及電極室 支架支架第34

7、頁/共61頁36第35頁/共61頁37第36頁/共61頁38第37頁/共61頁39第38頁/共61頁40第39頁/共61頁41第40頁/共61頁42第41頁/共61頁43第42頁/共61頁44第43頁/共61頁45第44頁/共61頁46第45頁/共61頁第46頁/共61頁48第47頁/共61頁49第48頁/共61頁50 不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點，利用具有線性不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點，利用具有線性pHpH梯度的電泳介質(zhì)來分離等電點不同的蛋白質(zhì)，這種電泳技術(shù)稱為梯度的電泳介質(zhì)來分離等電點不同的蛋白質(zhì)，這種電泳技術(shù)稱為等電聚焦電泳等電聚焦電泳。第49頁/共61頁51進行等電聚焦電泳的條件進行

8、等電聚焦電泳的條件1.1.有一個在電泳條件下基本穩(wěn)定的、有一個在電泳條件下基本穩(wěn)定的、 重復性良好的重復性良好的pHpH 分離的區(qū)帶。分離的區(qū)帶。第50頁/共61頁52 雙向電泳雙向電泳是先把樣品從一個方向進行電泳分離，接著再與其成是先把樣品從一個方向進行電泳分離，接著再與其成9090方向進行第二次電泳分離。方向進行第二次電泳分離。 第一次電泳以其電荷性質(zhì)為基礎(chǔ)；第二次電泳則按分子量不同進行分離。第一次電泳以其電荷性質(zhì)為基礎(chǔ)；第二次電泳則按分子量不同進行分離。第51頁/共61頁53 轉(zhuǎn)移電泳轉(zhuǎn)移電泳是將凝膠電泳的高分辯率與放射標記或酶標記等免疫化學方法的高靈敏度結(jié)合起來的電泳技術(shù)。是將凝膠電泳的高分辯率與放射標記或酶標記等免疫化學方法的高靈敏度結(jié)合起來的電泳技術(shù)。第52頁/共61頁54第53頁/共61頁55第54頁/共61頁56第55頁/共61頁57 核酸轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或重氮芐氨核酸轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或重氮芐氨 基甲基紙上?；谆埳?。 3.3.鑒定紙上的蛋白質(zhì)或核酸鑒定紙上的蛋白質(zhì)