色譜PPT課件.

1、第七章第七章 色譜色譜色譜部分色譜部分第一節(jié)第一節(jié) 色譜法概述色譜法概述7.1.1 色譜法的特點(diǎn)、分類和作用色譜法的特點(diǎn)、分類和作用俄國植物學(xué)家茨維特在俄國植物學(xué)家茨維特在19061906年使用的裝置：年使用的裝置：色譜原型裝置，如圖。色譜原型裝置，如圖。 1、概述、概述n色譜法色譜法(chromatography)：以試樣：以試樣組分組分在固定相和流動(dòng)相間的在固定相和流動(dòng)相間的溶解、吸附、分配、溶解、吸附、分配、離子交換或其他親和作用的差異為依據(jù)離子交換或其他親和作用的差異為依據(jù)而而建立起來的各種建立起來的各種分離分析方法分離分析方法稱色譜法。稱色譜法。有關(guān)名詞：有關(guān)名詞：色譜法的共同特點(diǎn)：

2、色譜法的共同特點(diǎn)： 任何色譜法都存在兩個(gè)相，即流動(dòng)相和固定任何色譜法都存在兩個(gè)相，即流動(dòng)相和固定相；流動(dòng)相；流動(dòng) 相可以是氣體或液體，固定相為固體或涂漬相可以是氣體或液體，固定相為固體或涂漬在固體表在固體表 面的高沸點(diǎn)液體；面的高沸點(diǎn)液體； 流動(dòng)相對固定相作相對運(yùn)動(dòng)，它攜帶樣品通過固定相；流動(dòng)相對固定相作相對運(yùn)動(dòng)，它攜帶樣品通過固定相； 被分離樣品中各組分與色譜兩相間具有不同的作用力，被分離樣品中各組分與色譜兩相間具有不同的作用力， 這種作用力一般表現(xiàn)為吸附力或溶解能力，正是這種這種作用力一般表現(xiàn)為吸附力或溶解能力，正是這種 作用力的差異導(dǎo)致通過各組分通過固定相時(shí)達(dá)到彼此作用力的差異導(dǎo)致通過各

3、組分通過固定相時(shí)達(dá)到彼此 分離。分離。2、色譜法分類、色譜法分類 （1 1）氣相色譜）氣相色譜：流動(dòng)相為氣體（稱為載氣）。流動(dòng)相為氣體（稱為載氣）。 按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細(xì)管柱色譜按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細(xì)管柱色譜 按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜（2 2）液相色譜）液相色譜：流動(dòng)相為液體（也稱為淋洗液）。流動(dòng)相為液體（也稱為淋洗液）。 按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。 (3)其他色譜方法：其他色譜方法：薄層色譜和紙色譜、凝膠色譜法、薄層色譜和紙色譜、凝膠色譜法、 高效毛細(xì)管

4、電泳法等。高效毛細(xì)管電泳法等。 第二節(jié)第二節(jié) 氣相色譜法氣相色譜法(GC)Gas Chromatography（1）分離效率高：分離效率高： 復(fù)雜混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體。手性異構(gòu)體。復(fù)雜混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體。手性異構(gòu)體。（2 2） 靈敏度高：靈敏度高： 可以檢測出可以檢測出g.gg.g-1-1(10(10-6-6) )級(jí)甚至級(jí)甚至ng.gng.g-1-1(10(10-9-9) )級(jí)的物質(zhì)量級(jí)的物質(zhì)量. .（3 3） 分析速度快：分析速度快： 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。（4 4） 應(yīng)用范圍廣：應(yīng)用范圍廣： 適用于沸點(diǎn)

5、低于適用于沸點(diǎn)低于400400的各種有機(jī)或無機(jī)試樣的分析。的各種有機(jī)或無機(jī)試樣的分析。 不足之處：不足之處： 不適用于高沸點(diǎn)、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析。不適用于高沸點(diǎn)、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析。 被分離組分的被分離組分的定性定性較為困難。較為困難。1、氣相色譜法的特點(diǎn)、氣相色譜法的特點(diǎn)7.2.1 概述概述當(dāng)試樣由載氣攜帶進(jìn)入色譜柱與固當(dāng)試樣由載氣攜帶進(jìn)入色譜柱與固定相接觸時(shí)，被固定相溶解或吸附定相接觸時(shí)，被固定相溶解或吸附。隨著載氣的不斷通入，被溶解或吸隨著載氣的不斷通入，被溶解或吸附的組分又從固定相中揮發(fā)或脫附附的組分又從固定相中揮發(fā)或脫附，揮發(fā)或脫附下的組分隨著載氣向前揮發(fā)或脫附下的組

6、分隨著載氣向前移動(dòng)時(shí)又再次被固定相溶解或吸附移動(dòng)時(shí)又再次被固定相溶解或吸附。隨著載氣的流動(dòng)，溶解、揮發(fā)，或隨著載氣的流動(dòng)，溶解、揮發(fā)，或吸附、脫附的過程反復(fù)地進(jìn)行。吸附、脫附的過程反復(fù)地進(jìn)行。 組分在固定相和流動(dòng)相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、組分在固定相和流動(dòng)相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮發(fā)的過程叫做分配過程。在一定溫度下，組分在兩相間揮發(fā)的過程叫做分配過程。在一定溫度下，組分在兩相間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度（單位：分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度（單位：g / mL）比，稱為分配系數(shù)，）比，稱為分配系數(shù)，用用K 表示，即：表示，即： 組分在流動(dòng)相中的濃度組分在固定相中的濃度K 一定溫度下，組分的分配系數(shù)一

7、定溫度下，組分的分配系數(shù)K越大，出峰越慢；越大，出峰越慢；試樣一定時(shí)，試樣一定時(shí)，K主要取決于固定相性質(zhì)；主要取決于固定相性質(zhì)；每個(gè)組份在各種固定相上的分配系數(shù)每個(gè)組份在各種固定相上的分配系數(shù)K不同；不同；選擇適宜的固定相可改善分離效果；選擇適宜的固定相可改善分離效果；試樣中的各組分具有不同的試樣中的各組分具有不同的K值是分離的基礎(chǔ)；值是分離的基礎(chǔ)；某組分的某組分的K = 0時(shí)，即不被固定相保留，最先流出。時(shí)，即不被固定相保留，最先流出。 組分在流動(dòng)相中的濃度組分在固定相中的濃度K7.2.2 氣相色譜儀氣相色譜儀包括進(jìn)樣裝置和氣化室包括進(jìn)樣裝置和氣化室氣相色譜的分離系統(tǒng)是氣相色譜的分離系統(tǒng)是色

8、譜柱色譜柱，常，常用的色譜柱有用的色譜柱有填充柱填充柱和和毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱兩兩種：種：填充柱填充柱是以固體吸附劑或涂漬是以固體吸附劑或涂漬了固定液的載體顆粒填充到柱管內(nèi)形成的柱子；了固定液的載體顆粒填充到柱管內(nèi)形成的柱子；毛細(xì)毛細(xì)管柱管柱內(nèi)沒有填充顆粒，是將固定相涂漬或者以化學(xué)鍵內(nèi)沒有填充顆粒，是將固定相涂漬或者以化學(xué)鍵合方式附著到管內(nèi)壁上。由于混合物各組分的分離在合方式附著到管內(nèi)壁上。由于混合物各組分的分離在這里完成，所以它是色譜儀中最重要的部件之一。這里完成，所以它是色譜儀中最重要的部件之一。氣液色譜填充柱的固定相通常由一種惰性多孔固體（稱為氣液色譜填充柱的固定相通常由一種惰性多孔固體（稱

9、為擔(dān)擔(dān)體體）及在其表面上涂漬一層較薄的高沸點(diǎn)有機(jī)物（稱為）及在其表面上涂漬一層較薄的高沸點(diǎn)有機(jī)物（稱為固定固定液液）液膜構(gòu)成。）液膜構(gòu)成。1、擔(dān)體、擔(dān)體提供一個(gè)大的惰性表面，以便使涂漬的固定液膜有足夠的容量。擔(dān)體應(yīng)提供一個(gè)大的惰性表面，以便使涂漬的固定液膜有足夠的容量。擔(dān)體應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性好、熱穩(wěn)定性好、有一定的機(jī)械強(qiáng)度、合適的顆粒及均具有化學(xué)穩(wěn)定性好、熱穩(wěn)定性好、有一定的機(jī)械強(qiáng)度、合適的顆粒及均勻的粒徑。常用的有硅藻土類。勻的粒徑。常用的有硅藻土類。2、固定液、固定液對色譜分離起著決定性作用。應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、蒸汽壓對色譜分離起著決定性作用。應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、蒸汽壓低

10、、對分析樣品有適合的溶解能力，并有高的選擇性。固定液在操作溫低、對分析樣品有適合的溶解能力，并有高的選擇性。固定液在操作溫度下是一種液體，柱溫不能超過固定液的最高使用溫度，否則會(huì)使它大度下是一種液體，柱溫不能超過固定液的最高使用溫度，否則會(huì)使它大量隨載氣流失。量隨載氣流失。溫控系統(tǒng)是用來設(shè)定，控制，測量色譜柱爐、氣化溫控系統(tǒng)是用來設(shè)定，控制，測量色譜柱爐、氣化室、檢測室三處的溫度。室、檢測室三處的溫度。氣化室的溫度應(yīng)使試樣瞬時(shí)氣化而又不分解。在一氣化室的溫度應(yīng)使試樣瞬時(shí)氣化而又不分解。在一般情況下，氣化室的溫度一般應(yīng)比試樣中最高組分般情況下，氣化室的溫度一般應(yīng)比試樣中最高組分沸點(diǎn)高沸點(diǎn)高20-

11、30 C左右，左右，比柱溫高比柱溫高10 50 C。u火焰光度檢測器火焰光度檢測器flame photometric detector, FPD工作原理：工作原理：被分離的組分具有與被分離的組分具有與載氣不同的熱導(dǎo)系數(shù)，當(dāng)檢測器載氣不同的熱導(dǎo)系數(shù)，當(dāng)檢測器的金屬絲被加熱并溫度達(dá)到恒定的金屬絲被加熱并溫度達(dá)到恒定后，通過熱導(dǎo)池的載氣組成若發(fā)后，通過熱導(dǎo)池的載氣組成若發(fā)生變化就會(huì)帶走與載氣不同的熱量，生變化就會(huì)帶走與載氣不同的熱量，從而引起熱敏元件阻值的變化。從而引起熱敏元件阻值的變化。工作原理：工作原理：以氫氣和空氣的混合物燃燒火焰為能源，將進(jìn)入檢測以氫氣和空氣的混合物燃燒火焰為能源，將進(jìn)入檢測

12、器的有機(jī)物離子化，生成許多離子對，帶電離子被安裝在檢測器器的有機(jī)物離子化，生成許多離子對，帶電離子被安裝在檢測器上的電極吸引產(chǎn)生微弱的電流，經(jīng)放大被記錄儀記錄。對含碳物上的電極吸引產(chǎn)生微弱的電流，經(jīng)放大被記錄儀記錄。對含碳物質(zhì)檢測靈敏度高，而對不含碳物質(zhì)無響應(yīng)。質(zhì)檢測靈敏度高，而對不含碳物質(zhì)無響應(yīng)。7.2.3 色譜理論基礎(chǔ)色譜理論基礎(chǔ)無試樣通過檢測器時(shí)，檢測到的信無試樣通過檢測器時(shí)，檢測到的信號(hào)即為基線號(hào)即為基線。基線基線基線漂移基線漂移2、色譜術(shù)語、色譜術(shù)語保留值保留值 A、時(shí)間表示的保留值、時(shí)間表示的保留值 保留時(shí)間（保留時(shí)間（tR）：）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)組分從進(jìn)樣到柱后出

13、現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間所需的時(shí)間 死時(shí)間（死時(shí)間（tM）：）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時(shí)間。留時(shí)間。 調(diào)整保留時(shí)間（調(diào)整保留時(shí)間（tR ）：）：tR= tRtM B、用體積表示的保留值、用體積表示的保留值 保留體積（保留體積（VR）：VR = tRF0 （ F0為色譜柱出口處的載氣流量，為色譜柱出口處的載氣流量， 單位：單位：m L / min。）。） 死體積（死體積（VM）： VM = tM F0 調(diào)整保留體積（調(diào)整保留體積（VR）： V R = VR VM 組分組分2與組分與組分1調(diào)整保留值之比：調(diào)整保留值之比： r21 = tR2 / tR

14、1= VR2 / V R1 相對保留值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，與其他相對保留值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，與其他色譜操作條件無關(guān)，它表示了固定相對這兩種組分色譜操作條件無關(guān)，它表示了固定相對這兩種組分的選擇性。的選擇性。C. 相對保留值相對保留值r213、色譜分析的基本理論、色譜分析的基本理論4、色譜操作條件的選擇、色譜操作條件的選擇(1)、 固定相的選擇固定相的選擇 氣液色譜，應(yīng)根據(jù)“相似相溶”的原則分離非極性組分時(shí)，通常選用非極性固定相。各組分按沸點(diǎn)順序出峰，低沸點(diǎn)組分先出峰。 分離極性組分時(shí)，一般選用極性固定液。各組分按極性大小順序流出色譜柱，極性小的先出峰。分離非極性和極性的（或易被極

15、化的）混合物，一般選用極性固定液。此時(shí)，非極性組分先出峰，極性的（或易被極化的）組分后出峰。醇、胺、水等強(qiáng)極性和能形成氫鍵的化合物的分離，通常選擇極性或氫鍵性的固定液。組成復(fù)雜、較難分離的試樣，通常使用特殊固定液，或混合固定相。(2)、柱長和柱內(nèi)徑的選擇、柱長和柱內(nèi)徑的選擇 增加柱長對提高分離度有利，但組分的保留時(shí)間tR ，且柱阻力，不便操作。 柱長的選用原則是在能滿足分離目的的前提下，柱長的選用原則是在能滿足分離目的的前提下，盡可能選用較短的柱，有利于縮短分析時(shí)間。盡可能選用較短的柱，有利于縮短分析時(shí)間。填充色譜柱的柱長通常為13米，內(nèi)徑34厘米。 首先應(yīng)使柱溫控制在固定液的最高使用溫度（超

16、過該溫度固定液易流失）和最低使用溫度（低于此溫度固定液以固體形式存在）范圍之內(nèi)。 柱溫升高，分離度下降，色譜峰變窄變高。柱溫，被測組分的揮發(fā)度，即被測組分在氣相中的濃度，K，tR，低沸點(diǎn)組份峰易產(chǎn)生重疊。 柱溫，分離度，分析時(shí)間。對于難分離物質(zhì)對，降低柱溫雖然可在一定程度內(nèi)使分離得到改善，但是不可能使之完全分離，這是由于兩組分的相對保留值增大的同時(shí)，兩組分的峰寬也在增加，當(dāng)后者的增加速度大于前者時(shí)，兩峰的交疊更為嚴(yán)重。 柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)的溫度。 組分復(fù)雜，沸程寬的試樣，采用程序升溫。A.A.利用純物質(zhì)定性的方法利用純物質(zhì)定性的方法 利用保留值定性利用保留值定性：通過對比

17、試樣中具有與純物質(zhì)相同保通過對比試樣中具有與純物質(zhì)相同保留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質(zhì)及在色譜圖留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質(zhì)及在色譜圖中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比。 利用加入法定性利用加入法定性：將純物質(zhì)加入到試樣中，觀察各組分將純物質(zhì)加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對變化。色譜峰的相對變化。 B.B.利用文獻(xiàn)保留值定性利用文獻(xiàn)保留值定性 相對保留值相對保留值r r2121：相對保留值相對保留值r r2121僅與柱溫和固定液性質(zhì)有僅與柱溫和固定液性質(zhì)有關(guān)。在色譜手冊中都列有各種物質(zhì)在不同固定液上的保留關(guān)

18、。在色譜手冊中都列有各種物質(zhì)在不同固定液上的保留數(shù)據(jù)，可以用來進(jìn)行定性鑒定。數(shù)據(jù)，可以用來進(jìn)行定性鑒定。5、色譜定性、定量分析方法、色譜定性、定量分析方法小型化的臺(tái)式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）色譜-紅外光譜儀聯(lián)用儀；組分的結(jié)構(gòu)鑒定將待測組分的純物質(zhì)配成將待測組分的純物質(zhì)配成不同濃度不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使?jié)舛扰c待的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使?jié)舛扰c待測組分接近，然后取固定量的上述溶液進(jìn)行色譜分析，得到測組分接近，然后取固定量的上述溶液進(jìn)行色譜分析，得到各標(biāo)準(zhǔn)樣品的對應(yīng)色譜圖。各標(biāo)準(zhǔn)樣品的對應(yīng)色譜圖。圖圖 某組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖某組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖圖圖 某樣品的色譜圖某樣品的色譜圖圖圖 標(biāo)準(zhǔn)（工作）曲線圖標(biāo)

19、準(zhǔn)（工作）曲線圖內(nèi)標(biāo)物要滿足以下要求：內(nèi)標(biāo)物要滿足以下要求：（1）試樣中不含有該物質(zhì)；）試樣中不含有該物質(zhì)；（2）與被測組分性質(zhì)比較接近；）與被測組分性質(zhì)比較接近；（3）不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；）不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（4）出峰位置應(yīng)位于被測組分附近，且無組分峰影響。）出峰位置應(yīng)位于被測組分附近，且無組分峰影響。試樣配制：試樣配制：準(zhǔn)確稱取一定量的試樣準(zhǔn)確稱取一定量的試樣W，加入一定量內(nèi)標(biāo)物，加入一定量內(nèi)標(biāo)物mS計(jì)算式：計(jì)算式：SsiisiSsiisiAfAfmmAfAfmm;100100100SsiiiSsiiiiiAfAfWmWAfAfmWmc%1. 內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍

20、許變內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍許變動(dòng)對定量結(jié)果的影響不大。動(dòng)對定量結(jié)果的影響不大。2. 每個(gè)試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試樣每個(gè)試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試樣的快速分析。的快速分析。3. 若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則：若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則：常數(shù)SiiAAc %第三節(jié)第三節(jié) 高效液相色譜（高效液相色譜（HPLC） 特點(diǎn)：高壓、高效、高速特點(diǎn)：高壓、高效、高速 高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。1.1.流程流程(1) 高壓輸液泵高壓輸液泵主要部件

21、之一，壓力：主要部件之一，壓力：150350105 Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液），液體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性外梯度外梯度: 利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)

22、梯度內(nèi)梯度: 一臺(tái)高壓泵一臺(tái)高壓泵, 通過比例調(diào)節(jié)閥通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。一定的比例抽入高壓泵中混合。 流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示： 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長，柱長540 cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 紫外光度檢測器（紫外光度檢測器（UV）：）：最小檢測量最小檢測量10-9gmL-1，對流量和溫度的波動(dòng)不敏感，可用于梯度洗脫。最常用的對流量和溫度的波動(dòng)不敏感，可用于梯度洗脫。最

23、常用的檢測器。檢測器。4 4、利用手性固定相可以拆分分離具有手性的化、利用手性固定相可以拆分分離具有手性的化合物。合物。 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。選用原則與氣相色譜一樣。 選擇合適的固定相，降低填料粒度可顯著提高柱效，選擇合適的固定相，降低填料粒度可顯著提高柱效，但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。高的工作，一般很少自行制備。 選擇短柱、細(xì)內(nèi)徑提高分析速度；選擇短柱、細(xì)內(nèi)徑提高分析速度； 研制高效柱填料是一活躍領(lǐng)

24、域。研制高效柱填料是一活躍領(lǐng)域。 （1）可顯著改變組分分離狀況的流動(dòng)相選擇在液相色譜）可顯著改變組分分離狀況的流動(dòng)相選擇在液相色譜中顯得特別重要。中顯得特別重要。 液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫劑。劑。 （2）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。相柱。 （3）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型

25、分離柱上液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。的出峰順序相反。 （1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。相等。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。淀并在柱中沉積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿