Sanger測(cè)序原理實(shí)用教案_第1頁
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1、 1977年，英國人Fred Sanger 發(fā)現(xiàn)，如果在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，就會(huì)產(chǎn)生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過(tnggu)電泳按長(zhǎng)度分辨。 不同末端終止DNA鏈的長(zhǎng)度是由摻入到新合成鏈上隨機(jī)位置的ddNTP決定的。 由此誕生了以Sanger命名的測(cè)序原理即雙脫氧鏈終止法測(cè)序原理。Sanger簡(jiǎn)介(jin ji)第1頁/共5頁第一頁，共6頁。dNTP和ddNTPoHoPHCH2堿基HOH23oo-oPoo-oPoo-o-2-脫氧核糖核苷酸HHoHoPHCH2堿基HH23oo-oPoo-oPoo-o-2，3-脫氧核糖核苷酸HH第2頁/共5頁第二頁，共6頁。雙脫氧(tu yng

2、)末端終止oHHCH2 AHOH23HH正常(zhngchng)延伸延伸(ynshn)終止oHHCH2HO23oPoo-oPoo-oPoo-o-HHoPoo-磷酸二酯鍵-T GCoHHCH2 THOH23HHoHHCH2H23oPoo-oPoo-oPoo-o-HHoPoo-磷酸二酯鍵無法形成-A CGHdNTPdNTPdNTPddNTP繼續(xù)延伸第3頁/共5頁第三頁，共6頁。測(cè)序反應(yīng)(fnyng)5DNA Template3ACTTCGACAACTGATTCGGAATTG53ddNTPLarge fragmentsSmall fragments毛細(xì)管電泳(din yn)熒光(ynggung)檢測(cè)TACTGATGTG熒光檢測(cè)結(jié)果：53TACTGATGTGDNA測(cè)序結(jié)果：35TCA CAG CATA第4頁/共5頁第四頁，共6頁。感謝您的觀看(gunkn)！第5頁/共5頁第五頁，共6頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)1977年，英國人Fred Sanger 發(fā)現(xiàn)，如果在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，就會(huì)產(chǎn)生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長(zhǎng)度分辨。不同末端終止DNA鏈的長(zhǎng)度是由摻入到新合成鏈上隨機(jī)(su j)位置的ddNTP決定的。由此誕生了以Sanger命名的測(cè)序原理即雙脫氧鏈終止法測(cè)序原理。2，3-脫氧核糖核苷酸。熒光檢測(cè)結(jié)

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