基因工程的四部曲

1、基因工程的四部曲基因工程的四部曲 1應(yīng)用DNA探針技術(shù)可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基 因的存在及其完全表達(dá) ()2自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上，屬于基因工程 ()3轉(zhuǎn)抗蟲基因的植物，不會(huì)導(dǎo)致昆蟲群體抗性基因頻率增加 ()4國(guó)際上大多數(shù)國(guó)家 都在轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)簽上警示性注明可能的危害 ()5每個(gè)普通質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn) ()6 外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制 ()答案1. 2. 3. 4. 5. 6 . 自我檢查自我檢查1、 基因工程操作步驟：基因工程操作步驟： 。（1）獲取目的基因的方法有）獲取目的基因的方法有

2、 。（2） 是關(guān)鍵步驟，基因表達(dá)載體的組是關(guān)鍵步驟，基因表達(dá)載體的組成：成： 。 一、自主導(dǎo)學(xué)：一、自主導(dǎo)學(xué)：獲取目的基因、制備重組獲取目的基因、制備重組DNA分子（基因表達(dá)載體的構(gòu)建）、分子（基因表達(dá)載體的構(gòu)建）、受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選、目的基因的檢測(cè)與表達(dá)受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選、目的基因的檢測(cè)與表達(dá)通過(guò)基因文庫(kù)獲取、通過(guò)基因文庫(kù)獲取、PCR技術(shù)擴(kuò)增、人工合成（反轉(zhuǎn)錄法和化技術(shù)擴(kuò)增、人工合成（反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)方法合成學(xué)方法合成），真核生物常用），真核生物常用 人工合成人工合成 方法方法。基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等（3

3、）受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選：基因工程中常用的受體細(xì)胞）受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選：基因工程中常用的受體細(xì)胞 有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。動(dòng)物常把等。動(dòng)物常把 細(xì)胞作為受體細(xì)胞。導(dǎo)入植物細(xì)胞的細(xì)胞作為受體細(xì)胞。導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有方法有 等；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可以將目的基因?qū)У龋晦r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可以將目的基因?qū)爰?xì)胞并把其整合到受體細(xì)胞的入細(xì)胞并把其整合到受體細(xì)胞的 上，導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞上，導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的方法有的方法有 ；如果運(yùn)載體是質(zhì)粒，受體細(xì)胞是細(xì)；如果運(yùn)載體是質(zhì)粒，受體細(xì)胞是細(xì)菌，一般是將細(xì)菌用菌，一般是將細(xì)菌用 處理，以增大細(xì)菌處理

4、，以增大細(xì)菌 的通透的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞。目的基因?qū)?，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由入受體細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于于 ，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得得 。受精卵受精卵農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法染色體染色體DNA顯微注射法顯微注射法CaCl2細(xì)胞壁細(xì)胞壁細(xì)菌繁殖的速度非?？旒?xì)菌繁殖的速度非?？旄鶕?jù)受體種類不同，選擇的受體細(xì)胞也不同，為根據(jù)受體種類不同，選擇的受體細(xì)胞也不同，為什么？什么？大量的目的基因大量的目的基因（4）、檢測(cè)目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞可以用）、檢測(cè)目

5、的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞可以用 方法，用方法，用 方法檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，用方法檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，用免疫（免疫（ ）法檢測(cè)目的基因是否表達(dá)。另外也）法檢測(cè)目的基因是否表達(dá)。另外也可進(jìn)行個(gè)體水平檢測(cè)。如可進(jìn)行個(gè)體水平檢測(cè)。如 。2、基因拼接成功的原因、基因拼接成功的原因_ 。 轉(zhuǎn)基因表達(dá)成功的原因是生物轉(zhuǎn)基因表達(dá)成功的原因是生物 ?；蚬こ痰囊饬x：基因工程的意義： 。DNA分子雜交分子雜交DNA與與RNA雜交雜交抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)讓蟲子啃食棉葉，觀察蟲子的存活狀態(tài)讓蟲子啃食棉葉，觀察蟲子的存活狀態(tài)脫氧核苷酸且遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則脫氧核苷酸且遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則共用一套遺傳密碼共用一套遺

6、傳密碼目的性強(qiáng)；克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙目的性強(qiáng)；克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙DNA都是雙螺旋結(jié)構(gòu)，基本組成單位都是都是雙螺旋結(jié)構(gòu)，基本組成單位都是人人( (人胰島素人胰島素) )大腸桿菌大腸桿菌( (無(wú)胰島素基因）無(wú)胰島素基因）人的胰島人的胰島素基因素基因與載體（與載體（DNA)DNA)結(jié)合結(jié)合導(dǎo)入導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞大腸桿菌細(xì)胞獲取獲取分離分離發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)( (含胰島素基因含胰島素基因) )胰島素胰島素（抗性檢測(cè)與鑒定）（抗性檢測(cè)與鑒定）Insulin（Levemir ）諾和諾德公司研制諾和諾德公司研制 glargine （Lantus）安萬(wàn)特公司研制安萬(wàn)特公司研制胰島素是治療糖尿病的特效藥，

7、長(zhǎng)期以來(lái)只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺胰島素是治療糖尿病的特效藥，長(zhǎng)期以來(lái)只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺中提取，中提取，1000Kg胰腺只能提取胰腺只能提取40-50g的胰島素，其產(chǎn)量之的胰島素，其產(chǎn)量之低低和價(jià)格之和價(jià)格之高高可可想而知。能否想而知。能否用大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素？如果能，如何實(shí)現(xiàn)？用大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素？如果能，如何實(shí)現(xiàn)？1.獲取目的基因獲取目的基因(1)(1)從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因(2)(2)利用利用PCR(PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) )技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因在生物體外復(fù)制特定在生物體外復(fù)制特定DNADNA片段的核酸合成技術(shù)?？?/p>

8、以獲得大量的目的基因。片段的核酸合成技術(shù)?？梢垣@得大量的目的基因。包括：變性、退火、延伸三部曲包括：變性、退火、延伸三部曲變性變性(95):(95):雙鏈雙鏈DNADNA解旋成為單鏈解旋成為單鏈DNADNA退火退火(55):(55):部分引物與模板的單鏈部分引物與模板的單鏈DNADNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合延伸延伸(72):(72):以目的基因?yàn)槟０澹谝阅康幕驗(yàn)槟０?，在DNADNA聚合酶的作用下，合成互補(bǔ)的新聚合酶的作用下，合成互補(bǔ)的新DNADNA鏈鏈PCRPCR緩沖溶液中：緩沖溶液中：目的基因、目的基因、4 4種脫氧核苷酸、兩種引物、種脫氧核苷酸、兩種引物、

9、 耐高溫的耐高溫的DNADNA聚合酶、能源物質(zhì)聚合酶、能源物質(zhì)(3)(3)人工合成目的基因人工合成目的基因基因比較小，核苷酸序列已知，可以通過(guò)基因比較小，核苷酸序列已知，可以通過(guò)DNADNA合成儀人工合成合成儀人工合成DNA DNA 二二、理解基因工程的四部曲理解基因工程的四部曲相同點(diǎn)：都由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)相同點(diǎn)：都由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)構(gòu)成?？刈饔玫姆蔷幋a區(qū)構(gòu)成。不同點(diǎn)：原核細(xì)胞基因的編碼區(qū)是連續(xù)的；真不同點(diǎn)：原核細(xì)胞基因的編碼區(qū)是連續(xù)的；真核細(xì)胞的編碼區(qū)是間隔的，不連續(xù)的。核細(xì)胞的編碼區(qū)是間隔的，不連續(xù)的。真核，原核生物基因比較：真核，原核生物基因比

10、較：編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)（能編碼蛋白質(zhì)）（能編碼蛋白質(zhì)）啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)（不能編碼蛋白質(zhì)）（不能編碼蛋白質(zhì)）真核生物基因結(jié)構(gòu)真核生物基因結(jié)構(gòu)限制酶限制酶基因組基因組DNADNA基因重組基因重組轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌體外包裝體外包裝1)1)基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)(Genomic library) (Genomic library) 是指將某種生物體的是指將某種生物體的全部基因組全部基因組DNADNA用限制性內(nèi)切酶切割成一定用限制性內(nèi)切酶切割成一定長(zhǎng)度范圍的長(zhǎng)度范圍的DNADNA片段，再與合適片段，再與合適的載體在體外重組后，導(dǎo)入

11、受體的載體在體外重組后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱為該生物基因組文庫(kù)。其目的是為該生物基因組文庫(kù)。其目的是分離有用的目的基因和保存某種分離有用的目的基因和保存某種生物的全部基因。生物的全部基因。目的基因的獲取目的基因的獲取1.1.基因文庫(kù)基因文庫(kù)目的基因的獲取目的基因的獲取cDNAcDNA( (互補(bǔ)互補(bǔ)DNA)DNA)：是由生物的某一特定器官或是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNAmRNA經(jīng)體外逆轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)經(jīng)體外逆轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)DNADNA片段，與載體連接后儲(chǔ)片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)存在一個(gè)受體

12、菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做這種生物的受體菌群就叫做這種生物的cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù) 2)cDNA2)cDNA文庫(kù)文庫(kù) ( (cDNAcDNA library library) )基因重組基因重組逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA基因的剪刀基因的剪刀 限制性核酸內(nèi)切酶（分子手術(shù)刀）限制性核酸內(nèi)切酶（分子手術(shù)刀）一種酶識(shí)別并切割一種特定的核苷酸序列一種酶識(shí)別并切割一種特定的核苷酸序列G A A T T CC T T A A GGC T T A AA A T T CG黏性末端黏性末端限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶（1 1）利用限制酶和）利用限制酶和DNADNA連接酶

13、如何構(gòu)建基因表達(dá)載連接酶如何構(gòu)建基因表達(dá)載體？體？2 2、構(gòu)建基因表達(dá)載體、構(gòu)建基因表達(dá)載體單酶切單酶切-先用同一種限制酶目的基因和質(zhì)粒，再先用同一種限制酶目的基因和質(zhì)粒，再加入加入DNA連接酶連接酶單酶切單酶切-先用同一種限制酶目的基因和質(zhì)粒，再先用同一種限制酶目的基因和質(zhì)粒，再加入加入DNA連接酶連接酶質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒連接物質(zhì)粒連接物目的基因目的基因-目的基因連接物目的基因連接物目的基因目的基因質(zhì)粒連接物質(zhì)粒連接物質(zhì)粒自身環(huán)化質(zhì)粒自身環(huán)化目的基因自身環(huán)化目的基因自身環(huán)化質(zhì)粒自身環(huán)化質(zhì)粒自身環(huán)化 質(zhì)粒質(zhì)粒 目的基因目的基因目的基因自身環(huán)化目的基因自身環(huán)化質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因目的基因目

14、的基因單酶切單酶切 變變 雙酶切（用兩種酶分別切割目的基因的兩端雙酶切（用兩種酶分別切割目的基因的兩端和質(zhì)粒）和質(zhì)粒）為了防止目的為了防止目的基因和質(zhì)粒在基因和質(zhì)粒在酶切后末端發(fā)酶切后末端發(fā)生生任意連接任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用酶切時(shí)應(yīng)選用兩種酶切割，兩種酶切割，從而保證目的從而保證目的基因和載體定基因和載體定向連接向連接。（2 2）目的基因與質(zhì)粒相互連接成基因表達(dá)載體的）目的基因與質(zhì)粒相互連接成基因表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是什么？結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是什么？AGCTATGC平面結(jié)構(gòu)平面結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)（3 3）如何針對(duì)基因表達(dá)載體進(jìn)行加工和改）如何針對(duì)基因表達(dá)載體進(jìn)行加工和改造才能實(shí)現(xiàn)目的基因的穩(wěn)定存在和

15、高效表達(dá)？造才能實(shí)現(xiàn)目的基因的穩(wěn)定存在和高效表達(dá)？目的：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并可以遺傳給下一代使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并可以遺傳給下一代使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。復(fù)制原點(diǎn)：復(fù)制原點(diǎn)：目的基因：目的基因：?jiǎn)?dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：終止子：終止子：標(biāo)記基因：標(biāo)記基因：控制合成目的蛋白質(zhì)控制合成目的蛋白質(zhì)是是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位部位,啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA終止轉(zhuǎn)錄終止轉(zhuǎn)錄鑒別與篩選導(dǎo)入目的基因鑒別與篩選導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞的受體細(xì)胞組成組成標(biāo)記基因一定標(biāo)記基因一定是抗性基因嗎？是抗性基因嗎？DNA的復(fù)制的的復(fù)制的起始

16、起始位點(diǎn)位點(diǎn) 標(biāo)記基因用于檢測(cè)標(biāo)記基因用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入目的基因是否導(dǎo)入成功的原理是什么？成功的原理是什么？啟動(dòng)子與起始密碼、終止子與終止密碼一樣嗎？啟動(dòng)子與起始密碼、終止子與終止密碼一樣嗎？編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)起始密碼起始密碼終止密碼終止密碼mRNA啟動(dòng)子(DNA片段)起始密碼子(RNA)；終止子(DNA片段)終止密碼子(RNA)3、受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與篩選思考：受體細(xì)胞的類型？轉(zhuǎn)化方法？為什么需思考：受體細(xì)胞的類型？轉(zhuǎn)化方法？為什么需要篩選？如何篩選？要篩選？如何篩選？篩選重組細(xì)胞篩選重組細(xì)胞(1)篩

17、選的原因：不是所有的受體細(xì)胞接納了重組篩選的原因：不是所有的受體細(xì)胞接納了重組DNA分子，只有部分受分子，只有部分受體細(xì)胞中含有目的基因。體細(xì)胞中含有目的基因。(2)篩選的方法：利用標(biāo)記基因。篩選的方法：利用標(biāo)記基因。 DNA分子分子 目的基因的獲取目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)原核生物原核生物 真核生物真核生物方法方法從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取人工合成人工合成PCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增 DNA復(fù)制復(fù)制操作工具操作工具組成過(guò)程限制酶DNADNA連接酶連接酶載體載體目的基因+

18、啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因+復(fù)制原點(diǎn)導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞DNA結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)基因工程應(yīng)用基因工程應(yīng)用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、植物、微生物植物、微生物基因工程藥物基因工程藥物基因診斷、基基因診斷、基因治療因治療轉(zhuǎn)基因食品、轉(zhuǎn)基因食品、生物的安全性生物的安全性發(fā)展發(fā)展蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程基因工程知識(shí)聯(lián)系不同來(lái)源不同來(lái)源DNADNA重新組重新組合的過(guò)程合的過(guò)程實(shí)質(zhì)基因重組基因重組優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：定向改造定向改造典例分析典例分析（選修模塊（選修模塊3：現(xiàn)代生物科技專題）：現(xiàn)代生物科技專題）圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶圖為某種質(zhì)粒表達(dá)

19、載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)為四環(huán)素抗性基因，素抗性基因，P為啟動(dòng)因子，為啟動(dòng)因子，T為終止子，為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。（1）將含有目的基因的）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切，酶切產(chǎn)物用酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連片段之間連接形成的產(chǎn)

20、物有接形成的產(chǎn)物有 、 、 三種。若要從這些連接產(chǎn)物三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對(duì)這些連接產(chǎn)物進(jìn)行中分離出重組質(zhì)粒，需要對(duì)這些連接產(chǎn)物進(jìn)行 。目的基因目的基因載體連接物載體連接物目的基因目的基因-目的基因連接物目的基因連接物分離純化分離純化載體載體-載體連接物載體連接物青霉素抗性基因青霉素抗性基因四環(huán)素抗性基因四環(huán)素抗性基因（2 2）用上述）用上述3 3種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有接種到含四環(huán)的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是的連接產(chǎn)物是 ； 若接種到含青霉素的培

21、養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是含有的連接產(chǎn)物是 。（3 3）目的基因表達(dá)時(shí)，）目的基因表達(dá)時(shí)，RNARNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是 ，其合成的產(chǎn)物是，其合成的產(chǎn)物是 。（4 4）在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體）在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是是_。載體載體-載體連接物載體連接物載體載體-載體連接物載體連接物目的基因目的基因-載體連接物載體連接物啟動(dòng)子啟動(dòng)子mRNAEcoRI和和Bam

22、HI青霉素抗性基因青霉素抗性基因四環(huán)素抗性基因四環(huán)素抗性基因例題：例題：（9分）下圖是利用生物工程技術(shù)生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的示意圖。質(zhì)粒上分）下圖是利用生物工程技術(shù)生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的示意圖。質(zhì)粒上的的Ampr表示青霉素抗性基因，表示青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因，限制酶表示四環(huán)素抗性基因，限制酶PstI、EcoR I和和Hind 切割形成的末端均不相同。據(jù)圖回答：切割形成的末端均不相同。據(jù)圖回答：（1）將人生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈篌w內(nèi)來(lái)生產(chǎn)生長(zhǎng)激素。圖中）將人生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈篌w內(nèi)來(lái)生產(chǎn)生長(zhǎng)激素。圖中對(duì)供體雌鼠甲用促對(duì)供體雌鼠甲用促性腺激素處理一段時(shí)間后與雄鼠乙交配，然后通過(guò)手術(shù)的方法從雌鼠甲的性腺激素處理一段時(shí)間后與雄鼠乙交配，然后通過(guò)手術(shù)的方法從雌鼠甲的_中取出受精卵。圖中早期胚胎應(yīng)保證發(fā)育到中取出受精卵