血紅蛋白電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、實(shí)驗(yàn)匯報(bào)實(shí)驗(yàn)名稱：血紅蛋白電泳項(xiàng)目名稱：兩種堿性血紅蛋白樣品處理方法的電泳結(jié)果實(shí)驗(yàn)時(shí)間： 2018 年 9 月 17 日實(shí) 驗(yàn) 室：龍泉驛區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)人員：楊松報(bào)告單位：成都溫倫科技有限公司1 / 4一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握生理鹽水處理血紅蛋白樣品的方法2、掌握四氯化碳處理血紅蛋白樣品的方法3、掌握電泳儀實(shí)驗(yàn)的操作4、分析兩種堿性血紅蛋白樣品處理方法電泳結(jié)果的不同二、實(shí)驗(yàn)原理：血紅蛋白電泳就是利用在電場的作用下 , 由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小 , 形狀等性質(zhì)的差異 , 使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度 , 從而對(duì)樣品進(jìn)行分離 , 鑒定或提純的技術(shù)，在臨床檢驗(yàn)中 , 主

2、要用于分離各類蛋白分子。三、實(shí)驗(yàn)方法：瓊脂糖電泳法四、實(shí)驗(yàn)器械：樣品： 10 個(gè) EDTA抗凝管抽取的病人全血樣品試劑： 0.9%生理鹽水 500ml，四氯化碳 500ml，界面液 250ml，美國 Helena Spife3000 血紅蛋白電泳檢測試劑盒器材：移液槍，一次性移液槍頭若干， EDTA抗凝管 10 個(gè)，玻璃試管 10 個(gè)設(shè)備：美國 Helena Spife3000 全自動(dòng)電泳儀五、實(shí)驗(yàn)步驟：1、取得醫(yī)院檢驗(yàn)科EDTA抗凝管抽取的病人全血樣品10 個(gè)，編號(hào)為 1，2,3.10。2、將 1-10 號(hào)十個(gè)個(gè)樣品分別用移液槍取200ul 到玻璃試管中，編號(hào)為1-1,2-1,3-1,.10

3、-1。3、將 1-10 號(hào) 10 個(gè)樣品進(jìn)行生理鹽水前處理，處理方法如下：-用 0.9%生理鹽水混勻， 3500 rpm 離心 10 分鐘 . -吸走棄去清液。-以上步驟連續(xù)進(jìn)行三次。-完全吸走棄去上清液。-20ul 制作后的樣本 +80ul 溶血素，混勻。-取溶血后的樣本17ul 加入樣品孔。4、將 1-1 到 10-1 號(hào) 10 個(gè)樣品進(jìn)行四氯化碳前處理，處理方法如下：- 用 0.9%生理鹽水溶液 5000L 與樣品混合。-3000rpm 離心 5 分鐘。- 棄去上清液，只留下紅細(xì)胞。- 加入 200ul 蒸餾水溶解紅細(xì)胞。- 加入 300ul的四氯化碳，混合均勻，3000rpm離心 5

4、分鐘。- 取上面萃取后的血紅蛋白液 17ul 加入樣品孔。5、記錄下這 20 個(gè)樣品的樣品孔編號(hào)， 將樣品孔放入樣品板， 擺放進(jìn)電泳槽中，放上加樣刀鋒，添加界面液，放上瓊脂板，掀開瓊脂板保護(hù)膜，吸取多余界2 / 4面液，放上碳棒，關(guān)上電泳槽的蓋子，啟動(dòng)設(shè)備開始電泳。6、大約 30 分鐘后，電泳完成，取出碳棒放好，鏟掉瓊脂板上的鹽橋，取出瓊脂板，放入染色槽中進(jìn)行染色脫色干燥。7、大約 30 分鐘后，染色脫色干燥完成， 取出瓊脂板， 放入掃描儀中進(jìn)行掃描，用 PT軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)，記錄數(shù)據(jù)。六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：前處理方法一（生理鹽水） 前處理方法二（四氯化碳）樣品編號(hào)HbAHbA2HbAHbA2197.

5、47%2.53%97.28%2.72%297.03%2.97%96.82%3.18%396.71%3.29%95.96%4.04%497.19%2.81%95.84%4.16%596.07%3.93%95.56%4.44%696.97%3.03%95.98%4.02%797.23%2.77%96.86%3.14%896.88%3.12%96.52%3.48%997.21%2.79%96.86%3.14%1097.45%2.55%96.95%3.05%七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：3 / 4采用前處理方法二（四氯化碳）處理的血紅蛋白，相對(duì)于前處理方法一（生理鹽水）處理的血紅蛋白， 電泳結(jié)果 HbA2偏高，HbA1偏低，電泳條帶更加聚集。八、參考文獻(xiàn)：電泳技術(shù)以及其臨床應(yīng)用ISBN 7-5381-4777-2實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理CNAS-CL27瓊脂糖電泳的發(fā)展和研究I